不同抗冻保护剂对鸡精液冷冻效果及基因表达的影响

旨在研究不同抗冻保护剂对鸡精液的冷冻保存效果,并通过比较差异表达基因,以解释不同保护剂的抗冻机制。以海兰褐种公鸡为研究对象,检测了不同抗冻保护剂(保护剂Ⅰ和保护剂Ⅱ)冷冻保存后的精子活性,并利用Affymetrix表达谱芯片检测技术,对差异表达相关基因进行筛选。结果表明:1)保护剂Ⅰ组的精液冻后活力活率(27.05±1.22vs 47.65±5.89)显著高于保护剂Ⅱ组(20.65±1.50vs 35.15±5.15)(P0.05);2)鸡精液冷冻后,2个不同抗冻保护剂处理组共发现1 604个差异表达基因。保护剂Ⅰ组中显著上调的基因1 380个,显著下调的基因224个;3)基因本体(GO)分析表明,包括核糖体亚基、线粒体呼吸链、泛素蛋白连接酶结合和微管蛋白结合,翻译起始以及RNA分解代谢等过程都与精液抗冻性相关;4)KEGG通路富集分析发现,其主要富集在内质网应激通路、氧化磷酸化、蛋白质泛素化、核糖体调控以及线粒体呼吸调控等相关信号通路上;5)挑选CCND1、HSP70、RHOA、HSP90和CIRBP5个差异表达基因并利用荧光定量PCR对芯片结果进行验证,二者吻合。综上,初步研究比较了2种精液保护剂的冷冻效果,并筛选出差异表达基因,发现抗冻保护剂Ⅰ更适合海兰褐种公鸡冷冻精液的保存,为鸡精液冷冻技术提供参考,并为鸡精液抗冻分子机制解析提供方向。     

不同胎次奶牛血液生理生化指标影响

为了更好的了解不同胎次奶牛血液生理生化指标的变化规律，进一步指导实际生产工作，本试验选用体况相近的不同胎次荷斯坦奶牛，对奶牛的血液样品进行血常规指标和血液生化指标检测。结果表明：血常规测定发现5胎奶牛白细胞数量明显增多，显著高于2-4胎奶牛(P＜0.05)；2-4胎奶牛红细胞数显著高于5胎和1胎奶牛的红细胞数(P＜0.05)；1胎奶牛的血红蛋白却显著高于2-5胎奶牛；5胎奶牛的中性粒细胞百分数显著升高(P＜0.05)。血液生化测定发现1胎奶牛内ALKP的含量与钙离子浓度显著都高于2-4胎(P＜0.05)，趋势都是随着胎次的增加含量逐渐降低。结论得出母牛胎次与血液生理生化指标具有一定的相关性，可为不同胎次母牛的饲养管理提供依据。     

猪冷冻精液生产关键技术的研究

冷冻精液有着保存时间长,成本较低,易于运输等优点,在养殖业中起着非常重要的作用,但猪冷冻精液存活率低、受胎率低、畸形率高等原因使得该技术在生产应用中存在着很大的困难,严重制约了我国猪业的发展。试验通过优化冷冻组合液,构建猪精液冷冻、解冻程序,建立并完善猪冷冻精液和深部输精技术体系,使猪冷冻精液更加高效地在生产中广泛应用。     

外源性孕酮对牛卵母细胞体外核成熟的影响

了研究外源性孕酮对牛卵母细胞体外核成熟的作用,通过向成熟培养液中添加10 μg/mL FSH +10 μg/mL LH（对照组）和0 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL、1000 ng/mL的外源性孕酮,对牛卵丘卵母细胞复合体进行体外成熟培养,在培养8 h后用醋酸地衣红染色观察各自的生发泡破裂率,然后在成熟22 h统计第一极体率,体外受精后7~8天统计囊胚率。结果表明,对照组卵母细胞的生发泡破裂率(75.0%)和极体率(79.6%)均明显高于添加不同浓度孕酮的各处理组(P<0.05),而囊胚率各组之间均无显著差异(P>0.05)。因此,外源性孕酮不能促进牛卵母细胞的核成熟,单独添加外源性孕酮不能起到与内源性孕酮相同的作用。     

小鼠输卵管中标记滞留细胞的定位研究

本研究旨在探讨小鼠输卵管中标记滞留细胞的存在与分布情况。C57乳鼠从出生后第3天开始,每隔1天分别在9:00和16:00皮下注射BrdU（5-溴-2-脱氧脲苷）,8周后对输卵管取材进行冰冻切片和免疫荧光染色,用以检测BrdU标记滞留细胞的定位情况。结果显示：经过长周期的定位示踪,输卵管中有标记滞留细胞的存在,这些细胞自输卵管远端（壶腹部方向）至近端（峡部方向）呈现明显的梯度分布,并且其主要位于上皮组织中。以上结果表明,成年小鼠的远端输卵管上皮中很可能存在相应的前体细胞或干细胞。     

通过优化超排后合笼时间高效获取小鼠孵化囊胚

本试验旨在优化小鼠超排后的合笼时间,高效获取小鼠孵化囊胚。试验选用150只ICR系8周龄雌性小鼠,随机分为5组,同一时间超排处理后雌、雄按1:1于18:00、19:00、20:00、21:00合笼过夜,次日上午08:00查栓,发现阴道栓这为妊娠第1天(D1)。取妊娠第5天(D5)小鼠处死,剪取双侧子宫角,冲取胚胎。统计每组冲取胚胎的总数及孵化囊胚/未孵化囊胚的比值,作为胚胎获取效率的评价指标;统计内细胞团数/滋养外胚层细胞团数,作为评价胚胎质量的参考指标。结果发现,在数量上组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ囊胚数差异不显著(P>0.05),但有增高趋势,组Ⅳ囊胚数显著高于其他3组(P<0.05)。组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ、组Ⅳ内细胞团数/滋养外胚层细胞团数分别为23.18%、23.55%、21.72%和23.28%,各组间差异不显著(P>0.05)。结果表明,组Ⅳ所对应的合笼时间获取小鼠孵化囊胚获取效率最高,胚胎囊胚质量无明显差异。     

牛抑制素α亚基基因克隆及表达载体的构建

为克隆牛抑制素α亚基基因,构建抑制素pET32a-成熟肽表达载体,从河北大厂县屠宰场采集卵巢,提取总RNA并反转录成cDNA,根据GenBank NM_174094.4 设计一对引物扩增出成熟肽cDNA,将所扩增基因插入到pET32a 表达载体BamHⅠ与HindⅢ酶切位点之间,构建重组质粒抑制素pET32a-成熟肽。结果成功构建出抑制素α亚基基因。笔者初步得到了抑制素重组质粒,为今后重组蛋白原核表达的研究奠定了基础。     

PGE2可以恢复缺少内源性PGs的牛体外早期胚胎的正常发育

旨在研究外源添加PGE2(前列腺素E2)对缺少内源性前列腺素(PGs,Prostaglandins)的牛IVF早期胚胎外发育的影响。在牛IVF胚胎中抑制内源前列腺素合成再外源添加PGE2,以观察PGE2对牛IVF胚胎发育的作用以及起作用的胚胎阶段。并检测PGE2受体的mRNA水平。抑制胚胎内源性前列腺素合成限速酶COX-1和COX-2会使牛IVF胚胎卵裂率、8-16细胞率、囊胚率以及孵化率显著低于常规培养组;而外源添加PGE2能够补偿IVF胚胎因缺少内源性PGs导致的损伤,基本抵消COX-1和COX-2的特异性抑制剂对牛早期胚胎体外发育产生的不利影响;PGE2的添加浓度以1×10-8mol/L为宜,并且其补偿作用发生在8细胞阶段之前。利用半定量RT-PCR未能检测到以上6个阶段IVF胚胎上EP1、EP2、EP3和EP4四种受体的mRNA。PGE2可以恢复缺少内源性PG的牛体外IVF早期胚胎的正常发育。     

GlyCAM-1在自然发情绵羊子宫中的表达研究

旨在研究GlyCAM-1 在绵羊自然发情子宫组织中的表达变化,以期为周期发情绵羊子宫中GlyCAM-1 的表达受孕酮诱导调控的推测提供支持。运用实时荧光定量PCR和免疫印迹法对绵羊自然 发情后子宫第10、12、14、16 和18 天GlyCAM-1 mRNA和蛋白表达变化进行检测。实时荧光定量PCR结果显示：在绵羊发情后的第10~18 天之间,子宫组织中GlyCAM-1 的表达呈现先下降再上升的趋势,发情后的第10 天GlyCAM-1 在转录水平表达出现峰值,并且显著的高于另外4 个时段(P<0.05),第12 天GlyCAM-1 mRNA水平显著下降(P<0.05),第14~16 天的表达量保持相对恒定,第18 天GlyCAM-1 mRNA水平再次显著升高(P<0.05),但仍低于第10 天水平(P<0.05)。Western Blotting 检测结果显示：绵羊在自然发情后的第10~18 天,子宫内膜上的GlyCAM-1 蛋白表达量的变化亦呈现出先下降后上升的趋势,与其他4 个时间点相比第10 天的蛋白表达量达到峰值(P<0.05),第12~16 天GlyCAM-1 的蛋白表达量没有显著变化(P>0.05),GlyCAM-1 的蛋白表达量在第18 天显著升高(P<0.05)。GlyCAM-1 在转录与翻译水平的表达变化一致,呈现先下降后上升的趋势。该结果为周期发情绵羊子宫中GlyCAM-1 的表达可能受 孕酮诱导调控的推测提供支持。