奶牛阴道菌群的多样性与产后子宫内膜炎的相关性研究

[目的]探讨奶牛阴道菌群的多样性与奶牛产后子宫内膜炎发病之间的关联性.[方法]随机采集30头牛的阴道分泌物,对其分泌物进行16S rDNA测序,将测序的数据进行除杂等处理后,使用UPARSE软件对不同样本细菌的丰度及多样性进行分析,记录所采集的30个样本产后子宫内膜炎的发病情况.[结果]4头奶牛产后患有子宫内膜炎,发病率为13.33％.不同样本的阴道菌群差异显著但在患病样本中却有一定的相似性.产前阴道菌群的OTU(operational taxonomic unit)个数均在100以上且丰度也较大,且菌群中多以短小芽孢杆菌(Bacillus_pumilus)为主的奶牛产后易患子宫内膜炎.[结论]奶牛产前阴道菌群的多样性变化可为产后子宫内膜炎的发病提供早期预警,对奶牛子宫内膜炎的防治具有一定的参考价值.     

miR-22-3p/5p抑制小鼠成肌细胞增殖的功能研究

[目的]丰富家畜骨骼肌生长发育的分子调控机制.[方法]选择能够在低血清诱导条件下分化为多核肌管的小鼠成肌细胞(C2C12)作为细胞模型,在C2C12细胞中转染携带荧光标记的mmu-miR-22-3p、mmu-miR-22-5p模拟物;利用实时荧光定量PCR法检测mmu-miR-22-3p/5p在C2C12细胞中的表达;采用CCK-8法、流式细胞术检测mmu-miR-22-3p/5p对C2C12细胞增殖的影响.[结果]实时荧光定量PCR的结果显示,在C2C12细胞增殖的过程中,mmu-miR-22-3p的表达量在增殖第4天显著升高(P＜0.05),mmu-miR-22-5p的表达量逐渐升高(P＜0.01).CCK-8细胞增殖的检测结果显示,分别转染mmu-miR-22-3p模拟物组的OD值均低于NC对照组;流式细胞术的结果发现,转染mmu-miR-22-3p后,S期的C2C12细胞数量极显著低于NC对照组(P＜0.01).转染mmu-miR-22-5p后,S期C2C12细胞数低于对照组,但差异不显著.[结论]mmu-miR-22-3p和mmu-miR-22-5p对小鼠成肌细胞的增殖过程具有不同程度的抑制作用.     

牛体外受精早期胚胎培养体系优化的研究

研究旨在筛选牛体外受精的最优培养体系,提高体外受精的囊胚孵化率。本研究将培养体系分为四组,CR1aa组,mCR组,CR1aa前+mCR后组,mCR前+CR1aa后,通过统计胚胎发育情况。结果显示CR1aa组卵裂率,八细胞率,囊胚率,孵化率分别为82.29±0.58,48.79±1.12,24.99±0.28,14.42±0.86;mCR组卵裂率,八细胞率,囊胚率,孵化率分别为57.18±1.61,26.48±0.53,22.15±1.20,18.12±0.57;CR1aa前+mCR后组卵裂率,八细胞率,囊胚率,孵化率分别为82.24±1.32,48.60±1.93,34.07±1.04,24.87±0.66;mCR前+CR1aa后组卵裂率,八细胞率,囊胚率,孵化率分别为58.80±2.26,26.77±1.21,24.15±0.73,13.10±1.09;从四组结果中可以看出CR1aa前培养液与mCR前相比可以显著提高牛体外受精的卵裂及八细胞率(P0.05),但其后期发育不佳。mCR后与CR1aa后相比可以显著提高牛体外受精胚胎的囊胚率和孵化率(P0.05)。由此得出mCR前+CR1aa后组可以显著的提高体外受精的囊胚和孵化率。为了进一步验证该组合的稳定性,利用mCR前+CR1aa后体系分别在不同季节进行验证,结果显示除夏季相对不佳外,其他季节均能维持较高的卵裂囊胚孵化率。进而认为CR1aa前+mCR后体系最有利于牛体外受精胚胎的生产且孵化率较高,有利于后期胚胎移植的进行。     

利用性控精液体外生产奶牛早期胚胎

实验进行了精子处理方法、洗精液中添加抗生素种类及浓度、常规培养小滴(50μL)中入胚数的筛选,按照不同荷斯坦公牛个体分选的性控精液对体外生产的牛早期胚胎发育潜力的影响。结果表明:离心法处理性控精液效果最优。利用经过分选的性控精液进行体外受精(IVF)后都较易导致污染,且受精后的体外胚胎发育效果都较差。在洗精液中添加10μL/mL头孢哌酮钠的IVF胚胎体外发育较好,囊胚率达到16.9%;且在常规培养小滴中适当减少入胚数,能有效抑制利用性控精液制备的奶牛IVF胚胎自身对培养微滴的污染。利用直接离心法处理精液,在洗精液中添加头孢哌酮钠10μL/mL,可以成功进行牛性控精子的体外受精,但目前的受精效果低于用普通精子的体外受精效果。     

钙离子浓度对绵羊精子获能的影响

为探讨钙离子浓度对绵羊精子获能的影响,将绵羊精子在不同钙离子浓度的绵羊输卵管合成液（SOF液）中培养,并用钙离子载体A23187进行诱导。结果发现,不同钙离子浓度对绵羊精子的影响差别不明显,经A23187诱导后,1.7 mmol/L组和2 mmol/L组的顶体反应率（AR）与其他组有显著差异（P<0.05）,1.7 mmol/L浓度中,绵羊精子存活时间为16 h,2 mmol/L浓度中的存活时间为10 h,因此认为绵羊精子获能的适宜钙离子浓度为1.7 mmol/L,且获能过程中钙离子的存在是必要的。     

吡咯喹啉醌二钠对种公鸡抗氧化能力及睾丸组织形态的影响北大核心CSCD

本试验旨在研究饲粮添加不同水平的吡咯喹啉醌二钠(PQQ·Na2)对种公鸡抗氧化能力及睾丸组织形态的影响。试验选用96只健康的440日龄京红1号种公鸡,随机分为4组,每组6个重复,每个重复4只鸡,分别在基础饲粮中添加不同水平(0、0.5、1.0、2.0 mg/kg)的PQQ·Na2。试验期6周。结果显示:饲粮添加1.0和2.0 mg/kg PQQ·Na2可显著提高血清、肝脏、肾脏和睾丸中总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性(P<0.05),显著提高血清、肝脏、肾脏和睾丸清除羟自由基能力(P<0.05),显著提高血清、肝脏和睾丸清除超氧阴离子能力(P<0.05);显著降低血清、肝脏、肾脏和睾丸中丙二醛(MDA)含量(P<0.05);显著提高睾丸生精小管直径和生精上皮厚度(P<0.05)。由此可见,饲粮添加PQQ·Na2可改善种公鸡的抗氧化能力,提高种公鸡睾丸生精小管直径和生精上皮厚度,适宜添加水平为1.0 mg/kg。     

冻融过程诱导精子凋亡及抗冻保护剂的研究进展

精子凋亡广泛存在于精液冻融过程，冷应激或氧化应激刺激及获能样变化均可引起精子凋亡。产生凋亡样变化的精子其结构、线粒体功能、膜电位、DNA完整性和参与凋亡反应的蛋白均发生变化，导致精子死亡率升高，活率下降。简述了冻融过程中精子凋亡的成因及抗冻保护剂的研究进展，以期为进一步提高冻融后的精子质量提供理论参考。     

HIF-1α在奶牛胎盘滋养层细胞迁移及侵袭变化中的机制研究

为探究HIF-1α在CoCl₂影响奶牛胎盘滋养层细胞迁移及侵袭变化中的作用，揭示奶牛胎盘在缺氧条件下的形成机制，从早期妊娠奶牛胎盘中分离纯化奶牛胎盘滋养层细胞(BTCs),用吉姆萨染色法观察细胞形态，免疫荧光法检测上皮细胞标志蛋白角蛋白7(CK7)、Thy/CD90蛋白表达，后将pCI-neo-hTERT质粒转染至BTCs,用qPCR和Western Blot法检测细胞TERT mRNA及蛋白表达，用CCK8法测定细胞增殖率，用ELISA法检测细胞分泌胎盘催乳素(PL)的能力，进一步利用siRNA沉默细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达，ELISA法检测细胞分泌血管内皮生长因子(VEGFA)能力，通过划痕试验及Transwell检测细胞迁移及侵袭能力。结果显示，分离纯化的BTCs为典型上皮样细胞，存在一定数量的双核细胞，并表达上皮细胞标志蛋白CK7,未见Thy/CD90表达，转染后的细胞可稳定表达端粒酶(TERT)mRNA及蛋白，连续传代50代未见细胞老化现象，且增殖率显著高于原代BTCs(P<0.05),分泌PL能力较原代BTCs无显著差异(P&g...