鸡IL-2和新城疫病毒HN基因在毕赤酵母中的融合表达

为进一步研究IL-2对疫苗的免疫增强作用,本研究经PCR扩增分别获得鸡IL-2和新城疫病毒(NDV)HN基因片段,应用分子克隆技术获得含有融合基因IL2-HN的真核表达载体pPICZαA-IL2-HN,重组质粒pPICZαA-IL2-HN线性化后整合入毕赤酵母X-33染色体上,在甲醇诱导下表达融合蛋白,再进行SDS-PAGE、Western-blot检测。SDS-PAGE分析结果表明目的蛋白为分泌性表达,分子量约为100 ku,Western-blot结果表明目的蛋白具良好的免疫反应性。     

禽传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中的表达

根据GenBank已公布的传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)株S1基因序列及pPIC9K表达载体序列,设计1对IBV S1基因表达片段的PCR引物,用RT-PCR方法扩增出长度为1 566 bp IBV S1基因表达片段,5′端不含信号肽序列,3′端添加了终止密码子。用限制性内切酶SnaB和Not将S1基因和载体pPIC9K酶切回收后连接,构建了重组表达载体pPIC9K-S1。用限制性内切酶Bgl将表达质粒pPIC9K-S1线性化,然后用电转化的方法导入毕赤酵母GS115,在MD平板上生长的转化子经过PCR鉴定和表型筛选后,获得了整合型阳性重组菌株GS115/pPIC9K-S1 His Muts。将重组菌株在1%甲醇中进行诱导分泌表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot分析。结果显示,IBV S1基因在毕赤酵母中成功获得了表达,表达蛋白的分子量约为76 000,能与IBV阳性血清特异性结合,表达的蛋白占上清中总蛋白量的12.5%。     

6种中药成分对猪传染性胃肠炎病毒的体外抑制作用

【目的】为探讨连翘苷等6种中药成分抗猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）的作用机制,明确其体外抗病毒作用效果,为抗TGEV的药物筛选提供依据。【方法】利用动物细胞培养技术,采用MTT比色法和细胞病变(CPE)观察法相结合,测定连翘苷、连翘苷元、绿原酸、咖啡酸、丁香酚、丹皮酚6种中药成分不同浓度下对猪睾丸细胞（ST）的毒性作用,通过观察细胞CPE情况,确定药物对细胞作用的最大安全浓度;同时测定病毒的TCID₅₀,用细胞维持液配成100·TCID₅₀病毒悬液备用;将6种药物在最大安全浓度范围内连续2倍倍比稀释后,分别采用先感染病毒后加药、先加药后感染病毒、药与病毒混合后感染细胞3种不同作用方式进行体外增殖抑制试验,各试验组均设置正常细胞对照组和病毒对照组,每组设置3个重复,通过酶标仪测得630 nm处OD值,计算出不同作用方式下中药成分分别对TGEV的抑制率,筛选出抗TGEV活性较好的中药成分,并分别记录抗病毒效果最佳时药物的浓度;6n>种中药成分与病毒作用后,测定TGEVRT-PCR鉴定各个药物单体对病毒RNA合成的抑制情况,进一步明确各中药成分对TGEV的抑制作用。【结果】连翘苷、连翘苷元、绿原酸、咖啡酸、丁香酚、丹皮酚的最大安全浓度分别为320、200、80、125、100、200 μmol·L^-1;抗病毒效果最佳时药物的浓度分别为：160、100、20、62.5、25、100 μmol·L^-1。根据Karber法计算出初始TGEV的TCID₅₀为10^-6.25/0.1 mL;6种中药成分对TGEV在ST细胞上均有一定的增殖抑制作用,其中咖啡酸浓度为62.5 μmol·L^-1时与100·TCID₅₀病毒混合作用后的病毒增殖抑制效果最好,相互作用72 h时,细胞形态依然能够保持圆滑、无固缩、完整,且细胞间轮廓清晰,仅有少量细胞脱落、死亡;此时测上清病毒的TCID₅₀为10^-3.75/0.1 mL,结果显示咖啡酸组病毒含量比病毒对照组10^-6.45/0.1 mL差异极显著（P＜0.01）;通过酶标仪测得630 nm处OD值计算出抑制率能够达到84.4%,咖啡酸直接灭活病毒作用极其显著。其次是连翘苷、连翘苷元、绿原酸、丹皮酚及丁香酚,其病毒滴度分别为：10^-4.75、10^-5.55、10^-5.55、10^-5.65、10^-5.75/0.1 mL,但是这几种中药成分对病毒的抑制作用不够显著,抑制率大多在50%以下。另外,各中药成分对TGEV在ST细胞上的增殖抑制作用均为对TGEV的直接灭活作用最好,其次为对TGEV吸附阻断作用,最后为对TGEV的复制阻断作用。RT-PCR鉴定中药成分对病毒抑制作用,结果显示咖啡酸组条带与病毒对照组相比较暗,病毒效价较低,对病毒抑制作用效果显著;其次是连翘苷、连翘苷元、绿原酸、丹皮酚及丁香酚。【结论】6种中药成分在ST细胞上对TGEV均有一定的增殖抑制作用,其中咖啡酸直接灭活病毒作用最显著,有望被开发成抗病毒药物。     

动物药学专业多元化实践教学体系的探索

结合社会对动物药学人才培养的要求、学校人才培养定位及动物药学专业培养目标和专业特点,文章从实践教学环节、实践教学方法和实践教学环境等方面对动物药学专业多元化实践教学体系进行了设计与探索。     

合生元对艾维因肉鸡生长性能和免疫功能的影响

此试验研究了合生元对1～35日龄艾维因肉鸡生长性能和免疫功能的影响。结果表明：合生元组在整个试验周期的平均体重均较对照组和中草药组极显著提高（P〈0．01）,但与芽胞杆菌组差异不明显（P〉0．05）。日增重仅在0～5周差异极显著（P〈0．01）,合生元组的日增重仅在第2周龄较茅胞杆菌组极显著提高（P〈0．01）,在0～4周龄,均较芽胞杆菌组和中草药组差异显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01）。在料肉比方面,1～5周龄合生元组均比对照组、芽胞杆菌组,中草药组极显著降低（P〈0．01）,但各周龄合生元组与茅胞杆菌组无明显差异（P〉0．05）,合生元组与中草药组除了第5周龄无明显差异（P〉0．05）,其余各周龄均差异显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01）。在免疫方面,合生元组的胸腺、法氏囊、脾脏指数均有不同程度的提高,新城疫效价较其它各组均极显著提高。     

中草药和乳酸杆菌合生元的研究

试验采用分光光度法,测定了贯众、白术、黄芪、山萸肉等15种中草药对乳酸杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌的相互作用,结果表明:15种中草药对乳酸杆菌均有不同程度的促进作用,但贯众、山萸肉、陈皮、党参、栀子对大肠杆菌和沙门氏菌却具有良好的抑制作用,在试验浓度范围内具均表现为显著差异(P<0.05)或极显著(P<0.01),其余的对乳酸杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌均有不同程度的促进作用。     

单增李斯特菌hly基因缺失株的构建及重要特性分析

为构建单增李斯特菌(LM)hly基因缺失株,并分析其生物学特性和免疫保护效果,本研究利用同源重组技术获得基因缺失株LM△hly112-153,研究该缺失株对巨噬细胞的侵袭力、溶血能力并测定其LD50,同时评价该缺失株对小鼠的免疫保护效果。结果显示经PCR扩增及序列分析表明获得基因缺失株LM△hly112-153,该缺失株对巨噬细胞的侵袭能力显著下降(p<0.01);其溶血活性比野生株降低2个滴度;并且该缺失株对BALB/c小鼠的LD50为4.253×108 cfu,高于野生株3个数量级;免疫保护试验显示,经缺失株免疫的小鼠对野生株攻毒有75%的免疫保护率。本研究构建了基因缺失株LM△hly112-153,该缺失株对小鼠具有较好的免疫保护效果,以上研究为减毒李斯特菌疫苗载体的研发奠定重要基础。     

科学发展观视角下的动物药学专业人才培养模式研究

动物药学专业是适应我国畜牧业发展而设立的新专业,动物药学专业的建设和发展必须贯彻和落实科学发展观,坚持以学生为主体,以教师为主导,教育教学工作要统筹兼顾,培养目标要与我国经济社会发展状况及发展动向相适应。     

论校内动物医院在高校办学中的作用

校内动物医院是动物医学类专业所在高校必备的机构之一,是集教学、科研和社会服务于一体的多功能实践基地.校内动物医院服务于学生的实验学习、课程实习、教学实习和毕业实习,可为教师科研提供丰富的临床素材,能够为社会提供高水平的动物诊疗服务,是学校对外宣传的窗口,也是为社会提供再就业培训的平台.校内动物医院的建立实现了生产(诊疗...     

基于多专业的预防兽医学实践教学体系的改革与探索

随着畜牧业经济的快速发展,预防兽医学学科的重要性日益提升。预防兽医学学科中多门课程是动物医学、动物检疫学及动物药学专业的主干课程,然而在多专业下预防兽医学实践教学体系存在一些不合理的现象。针对河南科技大学动物科技学院预防兽医学实践教学体系面临的问题,从完善培养方案、修订教学大纲、引入新型教学方法及手段、加强教学实习基地的建设、促进产学研相结合及师资队伍的建设等方面进行了改革,旨在为河南科技大学培养高素质的预防兽医学人才提供保证,也为其他相关高等学校预防兽医学人才的培养提供有价值的借鉴。