复方甘草酸单铵保护内毒素/恩诺沙星诱导的鸡肝细胞损伤机制研究

为了探索内毒素(LPS)和恩诺沙星(ENR)联合诱导鸡原代肝细胞损伤机制以及复方甘草酸单铵(CAG)的保护作用,采用改良二步灌流法分离鸡原代肝细胞,MTT法测定细胞存活率并且筛选出LPS联合ENR(LPS/ENR)致鸡肝细胞损伤的最佳剂量和CAG的保护浓度,收集细胞上清液测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)和谷氨酸氨基转移酶(AST)的含量,流式细胞计数仪测定细胞凋亡率,RT-qPCR检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、细胞色素-C(Cyt-C)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA表达水平。结果显示:LPS/ENR的最佳浓度为(30+80)μg/mL;与对照组相比,上清中ALT(P0.01)和AST(P0.01)极显著升高;流式细胞计数显示LPS/ENR处理后早期细胞凋亡率极显著升高(P0.01);在CAG处理组,早期细胞凋亡率成浓度依赖性降低;LPS/ENR组Caspase-3(P0.05)、Caspase-9(P0.01)、Cyt-1 C(P0.01)、Bax(P0.05)的mRNA表达水平显著升高,Bcl-2明显降低。结果表明:LPS/ENR诱导的肝细胞损伤可能是通过凋亡实现的,CAG能够预防这种损伤。     

鸡肝原代细胞药物代谢模型的建立与优化

[目的]建立成年鸡原代肝细胞的药物代谢模型并对其进行优化。[方法]以改进的二步灌流法分离8~12周龄的雄性黄羽鸡肝细胞,比较在不同细胞基础培养液条件下鸡肝细胞体外培养的情况,利用倒置显微镜观察肝细胞的形态,利用MTT检测法绘制生长曲线,测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,用q PCR和Western blot测定肝细胞中CYP450酶亚型CYP1A4、CYP1A5和CYP3A37 mRNA相对表达水平和3种酶蛋白的表达量。[结果]离体灌流操作简便,获得的细胞存活率高达90%以上;用含0.5 mg·L-1牛胰岛素、10 g·L-1双抗(100 U·m L-1青霉素和链霉素)和体积分数为10%胎牛血清的DMEM基础培养液体外培养鸡肝细胞,贴壁培养时可见到肝细胞较为明显的分化过程,贴壁后呈上皮细胞样生长,多角形,胞浆内容物均匀丰富,细胞核清晰透亮,少数有双核,细胞生长状态良好。生长曲线和LDH活性测定结果显示:培养3~5 d时细胞状态稳定,并且在肝原代细胞培养的8 d内,CYP1A4、CYP1A5和CYP3A37 mRNA相对表达水平和蛋白的表达量没有显著差异。[结论]以改进的二步灌流法分离鸡肝细胞操作简便,分离的鸡肝原代细胞存活率高,用含0.5 mg·L-1胰岛素、100 U·m L-1青霉素、100μg·m L-1链霉素和10%胎牛血清的DMEM基础培养液体外培养鸡肝原代细胞效果最好,培养3~5 d是进行体外药物代谢等试验的最佳时机。     

氨苄西林与阿莫西林对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的体外抗菌后效应

采用菌落计数法分别测定了氨苄西林和阿莫西林在 0 5、 1、 2、 4倍于各菌最小抑菌浓度 (MIC)时对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌标准株及其临床分离株的体外抗生素后效应 (PAE)。结果显示 ,氨苄西林和阿莫西林在 0 5、 1、 2、 4倍MIC时对金黄色葡萄球菌C2 61 1 2 及临床分离株均具有一定的PAE ,且PAE与浓度在一定范围内 (0 5～ 4倍MIC)呈剂量依赖性 ,当药物浓度达 4倍MIC时 ,PAE明显延长 (P <0 0 5 ) ;但两药对金黄色葡萄球菌C2 61 1 2 及临床分离株的PAE值仅在4倍MIC时差异显著 (P <0 0 5 )。在相同浓度下 ,两药对大肠杆菌ATCC2 5 92 2和临床分离株的PAE很小甚至没有。提示 :在临床设计给药方案时 ,对金黄色葡萄球菌敏感株引起的感染 ,除了考虑药代动力学和MIC指标外 ,还应考虑PAE因素 ,可适当延长给药间隔时间 ;而对PAE无意义的大肠杆菌敏感株引起的感染 ,宜持续给药或缩短给药间隔时间     

国产妥曲珠利对小鼠的急性毒性和亚慢性毒性试验

为了探讨妥曲珠利对小鼠的毒性作用,评价其临床用药的安全性,进行了妥曲珠利对小鼠的急性毒性和亚慢性毒性试验.结果表明,妥曲珠利对小鼠无毒性作用,经口LD50为5 011 mg/kg.妥曲珠利以500、100、20 mg/kg给小鼠连续灌胃30 d,500mg/kg表现出生长缓慢、肝脏损伤,100mg/kg和20 mg/kg剂量组鼠的体重、脏器系数、血液指标均与空白对照组无差异(P＞0.05).表明妥曲珠利毒性小,临床推荐剂量是安全的.     

固体过氧化氢的制备及其杀菌效果和稳定性研究

过氧化氢又称双氧水(H2O2),为常用的消毒灭菌剂,且含氧高、氧化能力强、具有良好的消毒杀菌功能、不产生二次污染等优点,但其因稳定性差、储存条件要求高、8％以上的双氧水被列入危化品管理的特点,极大地限制了其应用.因此对其进行改造并解决稳定性,将能极大地提高其临床应用范围.本试验研究了一种稳定性过氧化氢的制备方法,并对其...     

赤灵芝多糖硫酸酯化初步研究

多糖经硫酸酯化处理后能产生较强的生物活性,本研究在采用热水浸提乙醇沉淀法提取赤灵芝多糖的基础上,以氨基磺酸作为硫酸酯化试剂,通过设计正交试验以硫酸基取代度为指标对酯化条件进行优选,并以红外光谱分析法辅助分析.结果表明氨基磺酸硫酸酯化赤灵芝多糖的最佳条件为反应温度80℃,多糖与氨基磺酸比1:2(质量比),酯化时间2h,氨基磺酸与溶剂吡啶比1∶50(质量体积比).     

消菌灵现场消毒试验

消菌灵 (氯溴异氰尿酸 )是国内近期新研制的含氯消毒剂 ,已广泛用于农作物及蔬菜等方面的消毒。实验室消菌灵对畜禽病原微生物作用的研究显示 ,该产品有与同类有机氯消毒剂相比 ,作用相类似或较强。本试验在此基础上 ,观察了消菌灵对禽舍表面消毒及空气消毒的效果 ,为消菌灵在畜牧生产及兽医临床上推广应用提供依据。1　试验材料和方法1 1　试验药物及试剂消菌灵由南京农业大学实验农药厂常州分厂提供 ;对照用消毒剂毒菌净为市售产品 ,主要成分为二氯异氰尿酸钠。培养基用含 10 %血清的马丁琼脂培养基 ;中和剂为 0 5 %硫代硫酸钠 ;采样液为…     

复方氟苯尼考可溶性粉对人工诱发雏鸡大肠杆菌病的疗效试验

氟苯尼考是动物专用的氯霉素类药物，强力霉素则是常用的半合成四环素类抗生素，二者对致病的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及支原体等均有良好的抑杀作用，但抗菌谱侧重点，临床细菌耐药情况也不同。复方氟苯尼考可溶性粉是以二者为主组成的复方制剂。本文在联合药敏试验基础上，用雏鸡人工感染大肠杆菌病的方法，评价其临床疗效，为实际临床推广使用提供依据。     

N,O-羧甲基壳聚糖对AA肉鸡免疫机能的影响

试验研究了饲料中添加N,O-羧甲基壳聚糖对AA肉鸡免疫机能的影响。结果表明:与添加抗生素相比,添加0.1%的N,O-羧甲基壳聚糖能显著增加肉鸡免疫器官指数(P<0.05),且有高于空白对照组的趋势;添加0.1%和0.2%N,O-羧甲基壳聚糖可显著增加肉鸡血液中白细胞和淋巴细胞的数量;添加不同剂量的N,O-羧甲基壳聚糖均可有效提高肉鸡对人工感染大肠杆菌的保护率(甚至达90.00%)。可见,N,O-羧甲基壳聚糖可以增强肉鸡的免疫机能。     

新型精液保护剂对种鸡精液质量的影响

种公鸡携带病原体传递给后代的问题由来已久,作为垂直传播的一个途径其危害不容小视,可致雏鸡死亡率高、后代生长不良、疫病代代相传、生产力低下,甚至给环境保护、可持续发展带来挑战。试验对新研发的一种精液保护剂进行了评价。1通过两种稀释比例、经过4个不同时间点,检测了新型精液保护剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的杀灭率,结果表明,新型精液保护剂对三种细菌的杀灭率分别达到99.99%、99.99%和100.00%;2对加入新型精液保护剂后的种鸡精液在不同时间点进行精子活力测定,结果各时间点的精子活力均明显高于空白试验组。综合表明,该新型精液保护剂不但可杀灭精液中的病原体,而且可以提高精子活力。