猪水肿毒素A亚基基因表达产物的生物学特性及抗体检测ELISA方法的建立

根据TMpred生物学软件对SLT-ⅡeA亚基的蛋白质结构分析结果,表达了猪水肿毒素(SLT-Ⅱe)A亚基。SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达产物以可溶形式存在,易于纯化且具有良好免疫学活性。生物学毒性试验表明,表达产物不能致死小白鼠,也不具有Vero细胞毒性。体外细胞毒性中和试验表明,表达产物的兔抗血清能中和天然SLT-Ⅱe(中和度90.4℅)。在小鼠免疫保护力试验中,表达产物作为免疫原不能提供任何保护力。以表达产物为抗原建立检测SLT-Ⅱe抗体的间接ELISA方法,结果该方法对猪萎缩性鼻炎等9种常见细菌性疾病阳性血清的检测均为阴性,能特异性检测到人工感染猪水肿毒素8d仔猪的血清抗体IgG,对临床送检的1083份猪血清的检测阳性率为20.9℅。     

伪狂犬病根除计划

伪狂犬病是当今危害全球养猪业最严重的猪病,给养猪业造成了巨大的经济损失。西方发达国家大多在90年代相继制定和启动了该病的根除计划,并取得了很好的成效。该病在我国广泛存在并严重发病,损失巨大。“九五”期间我们承担了国家科技部中国生物工程开发中心生物技术攻关项目“伪狂犬病基因缺失疫苗研制”课题。经过五年的辛勤劳动,利用本室从我国华中地区发病猪病料分离鉴定筛选到抗原性和免疫原性强、在细胞上增殖滴度高的猪伪狂犬病毒鄂A株为亲本材料,成功研制出伪狂犬病毒gG—和gE—两     

细菌多重耐药泵的研究进展

细菌主要通过药物代谢酶将药物失活、靶向改造药物作用部位、降低细胞膜通透性和通过耐药泵主动将胞内药物泵出胞外4种方式抵抗抗生素和其他药物的毒性作用,其中细菌通过耐药泵将药物排出胞外是细菌的主要耐药机制之一,尤其是多重耐药泵,可以外排结构迥异的多种药物或对细菌有毒的代谢产物。由于细胞膜结构的不同,革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌所具有的耐药泵种类和结构也有所不同。革兰氏阴性菌中,目前发现的细菌耐药泵种类主要包括ATP结合盒超家族(ATP-binding cassette family,ABC)、耐药节结化细胞分化(resistancenodulation division,RND)家族、主要易化子超家族(major facilitator superfamily,MFS)、小多重耐药(small multi-drug resistance,SMR)家族和多药及毒性化合物外排家族(multidrug and toxic-compound extrusion family,MA-TE)。革兰氏阳性菌中,目前发现的细菌耐药泵种类主要包括ABC、MFS、SMR和MATE家族。近年来,诸多学者开展了细菌耐药泵的结构及其耐药机制的...     

当前仔猪腹泻病原学与防控关键技术

仔猪出生后3～10天,大量死亡,严重影响养猪生产成绩。某场案例如下:2012年2月1日到6月16日,生产仔猪2952头,死亡1551头,平均死亡率为52.5%。6月29日到7月7日,生产17窝仔猪共146头,到7月22日,只存活39头,死亡率为73.3%。而在4日龄仔猪肠道、粪便、呕吐物中67%PCR检测为猪流行     

专家指点当前养猪疫病综合防控——当前仔猪腹泻病原学与防控关键技术

近几年，养猪业流行一句话，叫疫情决定行情。事实上，最近几年，猪价的大起与大落基本都与疫情有关。而国家乃至各地的生猪预警系统，主要是从提供的市场供给量上来进行调控和指导，对猪疫情很难甚至无法预警，因此，预警系统在指导养猪生产的过程中有一定的局限性。其实，如果疫情稳定，养猪群体和出栏规模基本能稳定在一定的范围内，总体的养猪利润也会稳定。在中国兽药协会9月5日举办的中国猪业高峰论坛上，国内著名的猪病防控专家云集，他们对当前危害养猪业的主要疫病防控提出了实用方案，现采撷精彩观点奉献给读者。     

伪狂犬病病毒野毒感染猪场的gE抗体阳性头胎母猪生产成绩调查

伪狂犬病（Pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）感染多种野生动物及家畜引起的急性、热性的高度接触性传染病。为掌握PRV隐性感染对头胎母猪生产成绩的影响，本研究跟踪调查某一PRV野毒阳性稳定万头母猪场中野毒gE抗体阴性和阳性的头胎母猪总产仔数、健仔数、弱仔数、死胎数、木乃伊胎数、仔猪初生窝重以及断奶活仔数、断奶合格仔数、仔猪断奶重等不同生产成绩指标，探索相同饲养条件下伪狂犬病对头胎母猪各生产指标的影响。结果发现，每头PRV野毒gE抗体阴性头胎母猪每窝平均可产11.96头活仔猪，比gE抗体阳性母猪每胎次多产活仔0.63头，以及每胎次可多提供0.18头断奶活仔，每胎次多提供0.28头断奶合格仔。虽然PRV野毒gE抗体阳性母猪所产仔猪初生均重及断奶均重均高于gE抗体阴性母猪所产仔猪，但gE抗体阴性母猪所产仔猪断奶合格率高于gE抗体阳性母猪，表明其断奶活仔整齐度更高。综上，PRV野毒gE抗体阳性的头胎母猪生产成绩低于gE抗体阴性母猪，伪狂犬病的净化可为猪场带来更高的经济效益，表明伪狂犬病的净化至关重要。     

猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪A群轮状病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用

本试验旨在建立能同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪A群轮状病毒(GAR)的多重RT-PCR检测方法。根据GenBank收录的PEDVM基因、TGEVN基因、GARVP7基因,利用软件Pri mer 5.0设计合成能分别特异性扩增PEDV、TGEV、GAR相应基因的引物。利用这3对引物,作者建立了一种新的能够同时检测PEDV、TGEV和GAR的多重RT-PCR方法,并将这种方法和常规的RT-PCR进行了比较。实验室检测中,多重RT-PCR检测方法能够检测到35 pg的TGEV-PEDV-GAR三联苗的混合RNA。应用该方法检测了华中地区75份腹泻猪粪样,同时利用常规RT-PCR检测方法对该检测方法的敏感性和特异性进行了分析,结果表明该方法检测PEDV、TGEV、GAR的敏感性分别为92%、100%、100%,特异性均为100%。该方法敏感性高、特异性强,是一种新的检测PEDV、TGEV和GAR的方法。     

猪流行性腹泻病和猪圆环病毒病混合感染的诊治

2014年2月,突遇降雪天气,某规模化猪场2 000头母猪中约100头母猪所产新生仔猪集中在1周龄内出现大批死亡现象,死亡前均出现呕吐、消瘦及水样稀粪症状。通过采用现场调查、实验室病理解剖、病理组织学观察、免疫组化、RT-PCR、测序、ELISA检测等方法,本试验确定该病是猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异野毒株感染引起,同时混合感染猪圆环病毒2型(PCV2)。通过采取母猪群紧急接种疫苗、仔猪口服卵黄抗体及加强保温、消毒等综合措施,该病迅速得到控制。     

建立PCR-ELISA方法检测单核细胞增多性李斯特菌

针对hlyA基因设计特异性引物和探针，在上游引物5?#31471;标记生物素，核酸探针的3?#31471;标记地高辛，将PCR扩增、核酸液相杂交以及酶联显色技术结合，并对检测条件进行了优化，建立了PCR和PCR-ELISA检测食品样品中单核细胞增多性李斯特菌的方法。经对试验菌株检测表明，PCR 、PCR-ELISA方法检测单核细胞增多性李斯特菌能扩增出特异片段，其它李斯特菌、大肠杆菌和沙门氏菌等扩增检测结果是阴性。对60个样品进行检测表明，与SN/T0148.1-2005方法相比， PCR-ELISA方法具有更高的敏感性。与PCR产物电泳法检测比较，PCR-ELISA方法进一步提高检测方法的敏感性和特异性，敏感性高于前者150倍以上，并适合批量样品的检测分析。