猪IL-2与IL-6的原核表达及其对伪狂犬病基因缺失疫苗的佐剂效应研究

 将猪白细胞介素2(pIL-2)与猪白细胞介素6(pIL-6)的cDNA序列克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a及pGEX-KG上,转化BL21(DE3)表达菌,经IPTG诱导产生重组蛋白pIL-2与pIL-6,表达量分别占菌株总蛋白的43.45％和28.37％,经提纯后含量可分别达到97.06％和86.37％。将提纯后不同剂量的两种重组蛋白以单独或组合的方式,加入伪狂犬病(Ea株)TK~-/gG~-双基因缺失疫苗中,使每头份疫苗分别含2、5和10μg·ml~(-1)的pIL-2或(和)pIL-6,用此疫苗免疫伪狂犬病抗体阴性猪。同时设试验对照组。初次免疫30d后加强免疫,测定中和抗体,观察试验猪的日增重情况,进行统计分析。发现各试验组的抗体水平均高于不含重组蛋白的基因缺失疫苗组;其中,含2μg·ml~(-1)pIL-2试验组与含10μg·ml~(-1)pIL-2/pIL-6试验组抗体水平和基因缺失疫苗对照组之间呈显著差异(P=0.019)与极显著差异(P=0.009)。结果表明,大肠杆菌表达的pIL-2、pIL-6对伪狂犬病鄂A株基因缺失疫苗(TK~-/gG~-/LacZ~+)有较强的佐剂效应,且呈剂量相关性。不同试验组日增重比较结果表明,免疫效果高低与猪的生长速度呈正相关。本试验为重组pIL-2与pIL-6作为新型疫苗佐剂应用提供了重要的试验依据。     

利用棉绳采集口腔液监测猪伪狂犬病方法的应用分析

为分析使用棉绳采集口腔液监测猪场伪狂犬病(PR)方法的科学性,本研究拟通过实验室水平、动物试验及临床应用3个方面对使用棉绳采集口腔液监测猪场PR这一方法开展应用分析。首先对采样条件进行优化,并通过模拟试验测定棉绳对伪狂犬病病毒(PRV)的释放能力,通过动物试验测定病毒感染后检出时间,最后对临床样品进行检测分析。结果表明:使用直径为1.0 cm的棉绳,在早上喂料前采集口腔液样品,采样时间为20~30 min,可采集到更能满足试验要求的口腔液。病毒释放能力测定显示,棉绳对PRV的释放能力为50%左右,使用棉绳采集口腔液可检测到1个TCID50/0.1 mL的病毒含量。动物试验检测发现,猪群在感染后28 d中除第5天外,口腔液中病原含量均高于鼻拭子中病原含量,口腔液检测效果优于鼻拭子,且口腔液中病毒的检出时间(感染后第1天)早于血液中抗体转阳时间(感染后第7天)。临床样品检测分析结果表明,PRV疫苗免疫后也可通过口腔液检测到疫苗毒,并且存在无法通过口腔液检测感染PRV野毒后稳定猪中带毒的情况,因此口腔液检测方法应结合gE抗体检测,才可综合判断猪群是否为感染群体。综上,本研究优化了口腔液采集方法,并测定了棉绳对口腔液的释放能力和感染后检出时间,表明口腔液可作为较好的监测猪群PR的手段;口腔液监测方法需结合gE抗体检测来综合判断猪群是否为感染群体。     

一例猪瘟混合感染副猪嗜血杆菌和猪蛔虫的案例诊治

2019年11月底,湖北某商品猪场保育猪只出现厌食、消瘦、呼吸困难、咳嗽等症状,偶有病猪急性死亡,为查找病因,控制疫情,减少损失,依次通过流行病学调查、病理剖检和实验室检测,最终确定该发病猪场为感染猪瘟病毒,进而继发感染Hps-4混合感染,并伴随蛔虫感染导致。通过筛选敏感药物治疗,优化生产管理,成功控制了此次疫情。该案例对此次疫情进行了分析总结,就加强生物安全建设,优化养殖管理,实现生产质量可控提供了参考建议。也为猪瘟混合感染呼吸系统细菌性疾病的防控提供参考。     

猪流行性腹泻病的历史、现状和展望

猪流行性腹泻病（PED）是一种灾难性的病毒性传染病,以急性肠炎和伴有脱水的水样腹泻为特征,各种年龄的猪均易感。该病对不同年龄易感猪群的致死率不同,以哺乳仔猪的致死率最高。该病最先于1971年在英格兰被发现,此后,欧洲和亚洲也报道了很多该病的暴发。该病的病原是猪流行性腹泻病病毒,属于冠状病毒科,于1978年被首次描述。     

伪狂犬病病毒鄂A株 TK－／LacZ＋突变株的构建

本研究以地高辛标记的含TK基因的BamHI／KpnI片段为探针，通过Southern杂交确定伪狂犬病病毒鄂A株基因组中一大小约5.9kb的KpnI片段中含有TK基因，回收该片段并克隆于pUC18的KpnI位点。然后进一步克隆其中含TK基因的PstI／KpnI片段，并将LacZ表达盒插入到该片段中的BamHI位点，构建转移质粒pUEKPZ。将该质粒与伪狂犬病病毒鄂A株基因组共转染PK-15细胞，待完全病变后在X-gal存在下筛选蓝斑，蓝斑纯化3次后，经PCR扩增、Southern杂交证实获得的病毒为伪狂犬病病毒鄂A株TK     

猪乙型脑炎血清抗体DIGFA检测方法的建立与应用

本试验建立了一种以固相滤膜为载体，以红色胶体金颗粒标记的免抗猪IgG作为探针，特异性地检测猪流行性乙型脑炎病毒抗体的斑点金免疫渗滤测定法（DIGFA）。与血凝抑制试验（HI）对比检测了54份猪血清临床样本，两法的阳性符合率为71.4%、阴性符合率为65.5%、总符合率为81.4%。本法中抗原抗体通过渗滤在膜上进行反应，数分钟内即可用肉眼观查结果，具有快速，操作简单，敏感性高，特异性强，重复性好，易于判读等优点，特别适合于猪流行性乙型脑炎快速诊断和大规模血清流行病学调查。     

猪腹泻病的鉴别诊断与防控措施

正近两年来,腹泻是养殖业的一个大问题,尤其是冬春多发,夏天也有,由于目前很多规模猪场做的都是自动控温系统,猪场里面的温度是均衡的,因此,这种疾病的防控可能会成为常态化。猪消化系统正常的功能依赖于结构与功能的完整,以及有益微生物与有害微生物之间的平衡。在临床上,如果用抗生素治疗腹泻病3天,效果依旧不理想,甚至有时候越用抗生素腹泻越严重,这时候可以使用一些微生态制剂,恢复受损的胃肠道微生物。一、腹泻的原因猪场发生腹泻后,很多猪场都是先看是什么病原,其实更应该关注是什么原因导致的发病,常见的猪腹泻原因有以下几     

我国猪病防治的新问题与对策

正一、疾病发生概况疾病发生概况主要依据:笔者所在实验室2011~2012年猪病诊断结果;2011~2012年亚洲猪病信息(以第6届APVS论文集为依据);2013年国家生猪技术体系信息。(一)临床送检猪病归类分析2011年1月至2012年12月共接诊5203家规模化猪场送检的27022份临床病料、病猪和33215份血样,对其中2307家送检病猪猪场进行临床疫病分     

猪防御素基因pBD-2在大肠杆菌中的重组和融合表达

哺乳动物防御素是动物机体在抵御病原微生物的防御反应中产生的一类重要的抗菌肽物质,具有十分广泛的抗菌谱,在先天免疫上起重要作用。本研究根据已报道的pBD-2基因cDNA序列,合成了3条基因片段(1、2、3)。片段1、2和片段2、3各有15个碱基互补配对,PCR扩增延伸得到pBD-2基因,将pBD-2基因克隆至原核表达载体pGEX-KG,成功地在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出pBD-2融合蛋白。pBD-2基因的成功表达为进一步研究其抗菌活性打下了基础。     

猪肺Ⅱ型上皮细胞的分离和培养研究进展

肺泡Ⅱ型上皮细胞具有重要的生理功能,并与肺内其他细胞之间存在着复杂的关系。研究Ⅱ型细胞的体外培养,为科学评价Ⅱ型细胞在多种生物机制中所起的作用提供了有效的途径。上皮细胞的提取技术经过近30 年的发展,日渐成熟,呈现多样化的特点。总的说来,肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离、纯化、原代培养和鉴定,操作复杂,时间长,损伤较大,且细胞形态功能易发生变化,因此仍然有必要改进分离和培养技术。文章主要概述了猪肺泡上皮细胞提取,以及原代培养技术的进展与存在的问题。