伪狂犬病病毒Bartha株TK-/LacZ+突变株的构建及其生物学特性研究

本研究将伪狂犬病病毒Bartha株基因组与含有LacZ标志基因的TK基因转移质料pUEKPZ共转染猪肾传代细胞PK－5，细胞出现病变后，反复冻融3次收毒，按1：5稀释接种于IBRS－2细胞。在X－gal存在下挑取蓝斑，蓝斑筛选3次，再进行空斑试验，同时用PCR扩增LacZ基因，经3次空斑纯化，随机挑取的空斑均能扩增出LacZ基因，证实所获得的重组病毒为伪狂犬病病毒Bartha株TK^-/LacZ^ 突变株。TCID50试验表明，TK失活对Bartha株在细胞上增殖无影响；Balb/C小鼠试验表明，该突变对Balb/C小鼠的安全性明显高于Bartha亲本毒株。     

新型基因工程亚单位菌苗对猪传染性胸膜肺炎的保护效力研究

 利用分泌毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ的重组表达产物和胸膜肺炎放线杆菌7型菌，研制了一种新型的基因工程亚单位菌苗并对此疫苗的免疫效力进行了研究。利用该疫苗免疫断奶仔猪，间隔3周加强1次，同时设空白对照组和一种商品化的三价细菌灭活苗组。首免后每周采血检测ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ的ELISA抗体和7型菌的血凝抗体，第2次免疫两周后用猪胸膜肺炎放线杆菌1型菌株进行气管攻毒。从攻毒后症状、细菌分离、抗体检测、死后剖检对免疫效果进行评价。结果显示亚单位菌苗对于猪传染性胸膜肺炎有显著的保护力，能明显减轻临床症状和降低肺部损伤，效果优于商品化的细菌灭活苗。     

猪流行性腹泻病的历史、现状和展望

猪流行性腹泻病（PED）是一种灾难性的病毒性传染病,以急性肠炎和伴有脱水的水样腹泻为特征,各种年龄的猪均易感。该病对不同年龄易感猪群的致死率不同,以哺乳仔猪的致死率最高。该病最先于1971年在英格兰被发现,此后,欧洲和亚洲也报道了很多该病的暴发。该病的病原是猪流行性腹泻病病毒,属于冠状病毒科,于1978年被首次描述。     

猪胸膜肺炎放线杆菌荚膜多糖基因的原核表达及其产物的细胞毒性

参考GenBank中猪胸膜肺炎放线杆菌（App）血清2型荚膜多糖基因的序列分别设计了3对特异性引物，通过PCR分别扩增了CpsA、CpsB、CpsC3个基因，获得长约1137、429、1146bp的片段，将其分别克隆到pMD18-T中，经酶切鉴定和序列分析获得了阳性克隆子；再将CpsA、CpsB、CpsC分别插入原核表达载体pGEX-KG后，转化BL21，在IPTG诱导下获得高效表达，经Western-blotting检测证实，表达产物CpsC有生物学活性，CpsA、CpsB无活性；将3种表达产物等量混合，做10倍递进稀释后，与分离出的猪嗜中性粒细胞作用，37℃、50mL／L CO2培养箱中温育4h后加入底物液，测定D492nm值。结果表明，App荚膜多糖对猪嗜中性粒细胞无毒性作用。     

猪圆环病毒病研究进展

圆环病毒是近年来兽医界广泛关注的新发现畜禽类病毒之一,具有重要的经济意义.在2000年墨尔本国际猪病会议(IPVS)和1999年北京国际禽病会议(ICEVP)上均成为受到重视的热门话题.     

规模化猪场猪流行性腹泻的诊断与防控探索

2010年底以来,猪流行性腹泻的暴发给我国养猪业带来巨大的经济损失。传统意义上,本病主要发生在冬春季节,以腹泻仔猪的高死亡率为主要特征,夏季发病报道较少。一些病例为免疫母猪群所产仔猪,给本病的防治带来新的挑战。本文报道某规模化猪场猪流行性腹泻的控制过程,希望对同行有所帮助。     

猪圆环病毒2型感染PK-15细胞差异表达miRNA和mRNA互作网络

旨在筛选猪圆环病毒2型感染猪肾上皮细胞(PK-15)后差异表达miRNA和mRNA,并探究miRNA和mRNA之间的互作关系。使用茎环定量PCR检测多个热点miRNA在PCV2感染组和未接种病毒组之间的差异表达水平以发现差异表达miRNA,分析PCV2感染后第12小时的蛋白质组学研究结果(GEO登录号:GSE71945)以获得差异表达mRNA,并分析差异表达miRNA和mRNA之间的互相作用关系。结果显示,在PCV2感染后第12小时miR-10b、miR-128、miR-155-5p、miR-21、miR-29b、miR-361-3p等表达量显著性变化,使用miRecords预测其靶基因,分别发现7 105、9 741、7 451、7 183、7 971、8 793个靶基因;PCV2感染后第12小时共有158个差异表达mRNA,分属于多种细胞结构成分并参与多条重要的细胞生物途径,且差异miRNA的靶基因和差异mRNA之间有大量的交集基因。上述结果表明,PCV2感染能导致细胞内多种miRNA差异表达,造成miRNA的靶基因表达紊乱,进而影响细胞正常的生命进程。     

伪狂犬病毒中和抗体与gB-ELISA抗体阻断率之间的相关性

为了测定伪狂犬病毒中和抗体与gB抗体之间的相关性,本试验用216份伪狂犬病毒中和抗体阳性血清,对每一份样本作4种不同的稀释(1:1、1:20、1:40、1:80),用Idexx公司的gB-ELISA试剂盒检测.试验结果表明:216份中和抗体阳性血清样品中,有7份gB抗体阴性,阳性检出率为97.8%(209/216);随着中和抗体效价的增高gB-ELISA OD650值降低;gB抗体阻断率随中和抗体效价的增高而增加;对同一份血清样本作1:1、1:20、1:40、1:80稀释,测定结果发现,随着稀释度的增加,gB抗体阻断率逐渐降低,而gB-ELISA OD650值逐渐升高.     

基于NGS技术的仔猪腹泻病毒检测

为探究四川某猪场反复暴发仔猪腹泻的原因,利用下一代测序技术(NGS)对该猪场的仔猪肠道样品进行检测,结合常规PCR、测序方法进行验证分析。结果表明:该猪场存在猪流行性腹泻病毒PEDV,通过对该场PEDV S1基因的进化树分析,发现该PEDV毒株属于独立的一个分支;同时还在该场病料中检测到猪圆环病毒3型(PCV3),该猪场腹泻问题可能是由于新型PEDV毒株和PCV3毒株混合感染导致。