山东及河南濮阳禾谷孢囊线虫分布调查与rDNA-ITS-RFLP分析

为进一步明确山东省和临近山东的河南濮阳地区禾谷孢囊线虫病(Cereal cyst nematode,CCN)的发生状况及种类组成,于2013年6-8月,对山东省12个地级市124个点及河南省濮阳市19个点麦茬田采集的土样进行检测,分离孢囊,并通过rDNA-ITS-RFLP分析技术研究了山东省和河南省共15个禾谷孢囊线虫群体核糖体DNA(rDNA)内转录间隔区(ITS)的遗传变异。结果表明,山东省各县(市)的孢囊平均检出率为66.13%,河南省濮阳市的孢囊检出率为80.95%,其中山东聊城市和河南濮阳市发病相对较重;rDNAITS-RFLP鉴定结果表明,山东和河南两省的CCN为Heterodera avenae,不同地区CCN同源性高达99.8%以上,8种限制性内切酶AluⅠ、AvaⅠ、HaeⅢ、HindⅢ、HinfⅠ、RsaⅠ、PstⅠ、TaqⅠ共产生18个酶切片段,其中,AvaⅠ和HindⅢ不能酶切。酶切结果稳定,所有地区鉴定结果一致。     

山羊HABP4基因的克隆、序列分析及功能预测

旨在克隆简州山羊HABP4基因,鉴定与HABP4互作蛋白的mRNA表达水平并分析其相关性,为进一步探讨HABP4基因在调控山羊细胞凋亡中的作用奠定基础。于四川省简阳大哥大牧业有限公司随机选取10月龄左右,体重为55 kg左右的健康简州大耳羊公羊（16只）,清晨空腹屠宰后迅速采集各山羊心、肝、脾、肺、肾、小肠、大肠、瘤胃和胰腺9个组织样本,TRIzol法提取组织总RNA,并反转录cDNA。RT-PCR技术克隆山羊HABP4基因cDNA序列,利用在线软件进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR （RT-qPCR）技术检测HABP4基因在不同组织中的表达量（n=16）以及分析在胰腺（n=16）组织中与该HABP4蛋白可能存在相互作用的10个蛋白的mRNA表达特性及其相关性。结果,成功扩增山羊HABP4基因1 496 bp,包含5'UTR 61 bp,CDS区1 254 bp,3'UTR 181 bp,编码417个氨基酸残基。HABP4 mRNA在山羊各组织中均有表达,在胰腺中表达水平最高,且与UAB52呈极显著正相关,和RPL32、RPS9呈显著正相关,推测其在细胞定位、新陈代谢、多生物过程及生物过程负调节以及翻译起始、核糖体转录、细胞质代谢等方面发挥着重要作用。本研究成功克隆山羊HABP4基因cDNA全长1 496 bp,其可能与UAB52、RPL32和RPS9呈显著正相关。这些结果也为进一步探讨HABP4在调控细胞凋亡过程中的作用提供了参考数据。     

四川彭州猪流行性腹泻流行株全基因序列测定及其遗传变异分析

为了对四川省彭州某免疫过猪流行性腹泻病毒（PEDV）疫苗猪场猪感染的PEDV毒株基因组特征和遗传变异规律进行研究,本试验采用RT-PCR法筛选PEDV阳性样本,命名为SCXM株,对全基因组序列克隆测序获取全基因组序列,并对主要结构基因进行遗传变异分析和系统进化分析。结果显示,SCXM株的遗传变异主要集中在S基因,与71个毒株相比同源性为90.4%~99.2%,与猪场免疫疫苗株CV777相比同源性仅为93.8%。与国内常用疫苗毒株相比,在5个线性抗原表位（P1、S1P2、S1P3、SS5和SS6）和1个中和抗原表位（SID）均存在氨基酸位点突变。遗传进化分析表明,SCXM株属于G2b亚型PEDV,与湖北HBXY3株和越南毒株同在一个分支,表明这些地区流行毒株的演化过程存在相关性。另外对ORF3、M和N基因分析结果显示,SCXM与疫苗株相比均存在一定数量的氨基酸突变,但变异程度相对较小,且未引起抗原性预测值的变化。结果表明,PEDV SCXM株属新型变异毒株,其S基因发生较大程度的变异,S基因多个氨基酸突变和抗原性的变化可能是导致猪场疫苗免疫失败的原因之一。本研究丰富了PEDV基因学研究资料,探讨了SCXM株PEDV遗传变异和演化特征,为PEDV的分子演化研究奠定了基础。     

一例鸽大肠杆菌病的病原鉴定及其致病性研究

为了确定某赛鸽公棚病死赛鸽的病原菌,试验从送检病死鸽的肝脏分离出病原菌,然后对病原菌进行纯化培养、染色、生化试验、血清型鉴定、菌毛基因PCR检测与系统发育分析,以及肠毒素基因PCR检测、动物致病性试验。结果表明:共分离得到7株病原菌,7株病原菌均符合大肠杆菌的生物学特性;血清型分别为O55(3/7)、O1(1/7)、O164(1/7),2株未定型;分离菌除O164外,其余6株均表达黏附素基因K99、肠毒素基因STa及LT毒力因子; O55分离株对试验鸽有一定的致病性。说明该公棚赛鸽病死系由大肠杆菌引起。     

猪流行性腹泻的预防与控制

猪流行性腹泻又称流行性病毒性腹泻,是由冠状病毒属的猪流行性腹泻病毒引起猪的一种高度接触性肠道传染病.冬季气温变化异常易诱发本病,以呕吐、严重腹泻和脱水为主要特征,给养猪业带来巨大的经济损失.笔者主要从流行病学、临床综合诊断、实验室诊断、疫苗研究等方面,浅谈猪流行性腹泻预防与控制.     

镁叶绿酸钠体外抗猪流感病毒的作用效果研究

为探讨蚕沙提取物中镁叶绿酸钠体外对猪流感病毒(H3N2)的抑制作用,通过低血清培养非洲绿猴肾细胞(Vero),在添加胰酶的条件下进行体外病毒感染,病毒与药物通过3种不同给药方式(感染病毒后添加药物、添加药物后感染病毒、病毒与药物直接感作)作用于细胞导致细胞病变(CPE),通过微量细胞培养试验观察细胞病变效应,从而观察镁叶绿酸钠对猪流感病毒的抑制及对被感染细胞的保护作用,并通过Reed-muench法计算药物作用前后TCID5(0半数细胞感染量)的变化,评价药物抗病毒效果。结果显示,镁叶绿酸钠药物最大安全浓度为33μg/mL,治疗作用的最小浓度为0.516μg/mL,预防作用的效果不突出,病毒对药物的直接阻断作用的最小浓度为0.258μg/mL。     

一起猪链球菌引起成年种猪急性死亡的诊治报告

2010年3月中旬,四川省某集约化养殖场有50余头种猪出现急性死亡病例,发病猪主要为成年种公猪,发病率为5%,死亡率为50%;且经统计发现,杜洛克猪发病率明显高于长白和大约克两个品种。患病猪初期体温升高达41℃～43℃，食欲废绝，站立困难。病猪均出现四肢肿大，关节、肩胛部肌肉等处出现化脓性病灶，且部分内脏器官如肝、肺等也出现脓包：全身淋巴结充血、腹股沟淋巴结肿大出血；心包积液，且有纤维素性渗出液；     

沙门菌nirB基因启动子区域分子克隆及序列分析

为了给构建含沙门菌内源性诱导启动子基因疫苗表达载体奠定物质基础,试验从活化培养的 猪霍乱沙门菌C500中提取细菌基因组DNA,运用PCR技术扩增nirB基因启动子区域,回收、纯化,将TA克隆到pUCX-T载体上,对阳性克隆进行测序和生物信息学分析.结果表明:成功扩增出nirB基因启动子区域,长约760 bp;成功构建了...     

副猪嗜血杆菌RfaF基因的原核表达及抗原性分析

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)RfaF基因编码脂多糖庚糖基转移酶Ⅱ,参与了细菌的黏附入侵和抗血清中补体杀菌作用.为了进一步研究庚糖基转移酶Ⅱ的功能,用原核表达系统表达H.parasuis RfaF基因.用特异性引物扩增H.parasuis SC096株血清4型RfaF基因,得到一条1 053 bp的片段,将其连接到pET-32a(+)载体上,构建重组表达质粒,并将其转化至DH5α感受态细胞中,经酶切、PCR和测序进行鉴定.测序正确后,提取重组质粒,转化至E.coli BL21 (DE3)感受态细胞中,并用IPTG进行诱导.将诱导产物进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果显示,H.parasuis RfaF基因可以在E.coli中表达,重组蛋白分子质量约为55 ku,与预期分子质量大小一致.Western blot分析表明,RfaF蛋白可以与H.parasuis血清4.型阳性高免血清产生特异性结合反应,具有良好的抗原性.本研究结果为深入探讨RafF基因的功能奠定了基础.