排序方式: 共有44条查询结果,搜索用时 15 毫秒
11.
12.
基于正交试验设计优化真菌DNA提取的CTAB法 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】从统计学的角度明确CTAB法提取真菌DNA过程中各因素的影响,确定CTAB法提取真菌DNA的最优方案.【方法】本试验以菌体量、破壁、抽提、沉淀为考察因素,以核糖体RNA(rRNA)内转录间隔区(ITS)和28SrRNA基因序列的PCR反应扩增率为指标,用SPSS软件设计混合水平正交试验L25(5×34)并进行方差分析.【结果】采用CTAB法提取真菌基因组DNA时,菌体细胞破壁和沉淀DNA这两个步骤对真菌DNA提取效果的影响最大,其次是抽提步骤,在100mg范围内,菌体量对DNA的提取效果影响不大.【结论】采用CTAB法提取DNA时,挑取40~80mg菌体,用带有无菌塑料钻头的手电钻研磨进行菌体细胞的破壁,研磨时可先加入液氮冷冻后再进行研磨,或直接在冰上研磨,酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)抽提1次,等体积异丙醇沉淀DNA,可以得到较好的DNA提取效果. 相似文献
13.
14.
为确诊重庆涪陵地区一山羊养殖场发生山羊皮下脓肿的病原,采集病料分离病原、进行药敏试验。通过生化试验和16S rRNA分子方法鉴定病原菌;PCR扩增分离株的神经氨酸酶基因(neuraminidase,NA),并利用细菌神经氨酸酶的隐马尔科夫模型(Pfam编号为PF13088)搜索自建的本地蛋白质组数据库,通过MEGA7.0构建系统进化树,从而分析神经氨酸酶基因在脊椎动物、寄生虫、真菌、细菌和病毒中的遗传进化特征,并利用PredictProtein进行分离株神经氨酸酶的点突变分析。结果表明,分离株的16S rRNA基因与JQ975932.1(中国新疆)株化脓隐秘杆菌序列同源性高达99.7%,结合生化特性确诊分离株为化脓隐秘杆菌;利用模型进行检索,共检索到214条神经氨酸酶氨基酸序列。神经氨酸酶遗传系统进化树显示,细菌神经氨酸酶主要集中在放线菌门中,脊椎动物的神经氨酸酶主要聚集在GroupⅠ和GroupⅡ,寄生虫的神经氨酸酶主要集中于GroupⅠ,真菌神经氨酸酶分布较广,存在GroupⅠ、GroupⅡ以及GroupⅣ中,而病毒神经氨酸酶主要分布于GroupⅠ和GroupⅡ。点突变分析表明,细菌神经氨酸酶不同位点的氨基酸突变对神经氨酸酶功能的影响不同。 相似文献
15.
5种方法提取真菌基因组DNA作为PCR模板效果的比较 总被引:2,自引:1,他引:2
本研究旨在比较CTAB法、改良CTAB法、SDS法、氯化苄法和Chelex-100法提取真菌DNA作为PCR模板的效果,以生长速率、菌落形态差异较大的11个煤污病菌属真菌为研究对象,以核糖体RNA(r RNA)基因中的内转录间隔区(ITS)序列和28S r RNA基因部分序列的扩增率为指标,采用SPSS软件对结果进行方差分析。结果表明,CTAB法和改良CTAB法适用真菌范围最广,分别有7个和9个属真菌的扩增率都大于70%且无显著性差异;氯化苄法和Chelex-100法适用范围居中,分别有6个和8个属真菌的扩增率较高且无显著性差异,扩增率分别大于70%和50%;SDS法适用范围最窄,有6个属真菌的扩增率高于50%且无显著性差异。大多数煤污病菌至少有2种及以上的DNA提取方法能够取得较好的效果,但链丝孢属真菌只有用氯化苄法提取DNA效果最好。采用改良CTAB法结合氯化苄法,能够满足所有供试煤污病菌类群真菌提取基因组DNA用作PCR反应模板的需要。 相似文献
16.
当前我国测定土壤有机质的国家标准方法为重铬酸钾容量法,该种方法具有操作简便,测定结果准确,适用大量样品的分析等优点,但是较容易产生误差,且该方法中的加热介质、空白替代物、加热温度和加热时间在各种文献说法不一。采用标准物质GBW07414a、GBW07416a,对重铬酸钾容量法中加热介质、空白替代物、加热温度和加热时间4个测定条件进行实验探索,结果表明:选择石蜡作为加热介质,不用替代物作空白,测定结果的准确度和精密度高;加热温度选择170-190℃,加热时间控制在5~8min,测定结果较为理想。 相似文献
17.
18.
19.
20.
【目的】探究根际 NaCl 浓度对冰菜的形态和生理的影响,找到适合植物工厂冰菜营养液栽培的适宜 NaCl 浓度,为冰菜植物工厂生产管理提供参考。【方法】以水晶冰菜种子为材料,选用日本园试营养液配方,在人工光下水培,以未添加 NaCl 处理为对照(CK),添加 NaCl 至终浓度分别为 3、6、9、12 g/L(分别记为 T1、T2、T3、T4)。处理 21 d 后,分析不同 NaCl 浓度营养液中冰菜的形态和生理指标,统计表皮盐囊泡面积占比和表皮盐囊泡个数,分析不同 NaCl 浓度与冰菜形态和生理的关系。【结果】从形态指标与质量来看,冰菜在 3 g/L NaCl 浓度营养液中,株高、茎粗、叶面积、地下部鲜质量和地上部鲜质量与 CK 相比无极显著差异 ;冰菜在 6 g/L NaCl 浓度营养液中株高和地下部鲜质量和地上部鲜质量与 CK 相比显著增高,该浓度对冰菜生长有一定的促进作用;冰菜在 9、12 g/L NaCl 浓度营 养液中株高、茎粗、叶面积、地上部鲜质量呈下降趋势,与 CK差异达到极显著水平,表明冰菜在 9 g/L 和 12 g/L NaCl 浓度营养液中生长受到抑制。从生理指标方面来看,冰菜的可溶性蛋白含量、可溶性糖含量和叶绿素 SPAD 值随 NaCl 浓度升高呈上升趋势,在 12 g/L NaCl 浓度营养液中可溶性蛋白含量、可溶性糖含量和叶绿素 SPAD 值最高,分别比 CK 增加 50.2%、119.5% 和 77.9%;从表皮盐囊泡指标来看,冰菜表皮盐囊泡面积占比与表皮盐囊泡个数随营养液中 NaCl 浓度的升高而增大,在 12 g/L NaCl 浓度营养液中达到最大,分别比 CK 增加 54.9%、182.1%。【结论】 营养液中 3~6 g/L NaCl 浓度最适于植物工厂冰菜栽培。 相似文献