2006～2012年猪繁殖与呼吸综合征病毒东北毒株GP5和M基因变异分析

分离鉴定三株中国东北地区PRRSV,对其主要结构蛋白GP5和M基因RT-PCR扩增和测序,同时对2006～2012年东北地区PRRSV毒株进行遗传变异分析.结果表明,三株东北地区PRRSV分离株均属于美洲型高致病性毒株,JilinTN2株和HH12株可能由JXA1变异而来,GP5基因变异较大,而M基因相对保守;一些氨基酸变异会改变GP5和M蛋白的二级结构;GP5蛋白中和表位Q40和L41的突变和诱骗表位L28的新突变在2011和2012年黑龙江省PRRSV毒株中被发现,33～37 aa处氨基酸的变异对潜在糖基化位点的数量和位置影响较大,可能会干扰中和抗体对紧随其后的中和表位识别,减少病毒中和抗体应答;GP5中PRRSV毒力关键住点的新突变在2012年分离株中被发现.文章揭示东北地区PRRSV流行毒株GP5基因的变异特征,PRRSV仍在不断发生变异,需针对GP5基因变异采取相应防控措施.     

鸡白细胞介素-18基因的原核表达及多克隆抗血清的制备

将编码鸡白细胞介素-18(interleukin-18，IL-18)成熟蛋白的基因亚克隆至原核表达载体pPROEXTMHT中，构建重组质粒并进行确证性序列测定。然后将重组质粒转化大肠杆菌DH5α并用IPTG于37℃诱导培养。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在，目的蛋白表达量占菌体蛋白的30％。SDS-PAGE和Western blot分析显示，表达的鸡IL-18融合蛋白相对分子质量约为23000。包涵体被6mol／L盐酸胍裂解后，通过镍离子亲和树脂进行了纯化。用所获得的重组鸡IL-18融合蛋白及其纯化产物经3次肌肉注射豚鼠，制备豚鼠抗鸡IL-18多克隆抗血清，并用琼脂扩散试验多克隆抗血清进行了证明。本试验成功的原核表达、纯化了鸡IL-18融合蛋白，并制备了抗鸡IL-18多克隆抗血清，为下一阶段关于鸡IL-18重组蛋白生物学特性及其应用的研究打下了坚实的基础。     

垫料发霉引起雏鹅爆发曲霉菌病的诊疗

1、发病情况:苗鹅300只,用陈稻草作垫料,喂莴苣叶、黄豆粉和米。饲养10天后,发现部分鹅发病死亡。畜主疑是小鹅瘟,自购抗小鹅瘟高免血清治疗,三天后发病死亡不见减少,反而增多,共死亡54只,死亡率18％。2、临诊症状:病初少食,后期不食,有时拉稀,缩头弓背,张口甩头,鼻流浆液,呼吸有“呼噜”声,一侧眼流水,下眼睑肿胀、结痂,剥去痂疤,有黄豆粒大小干酪样坏死灶,病程3-5天。3、病理变化:剖检8例。气囊明显增厚,有多量淡黄色的小结节。肌胃、肠浆膜、肺脏密集淡黄色或灰白色     

猪传染性胃肠炎病毒TH-98株S基因的克隆与同源性比较

用猪睾丸 (Swine testicle,ST)细胞繁殖并扩增猪传染性胃肠炎病毒国内分离株 TH- 98,根据 Gen Bank中已发表的TGEV S基因 c DNA序列 ,利用 Oligo4.1程序软件设计并合成两对引物 ,进行逆转录聚合酶链式反应 (RT- PCR) ,扩增出2 .3kb和 2 .1kb两个片段 ,分别命名为 Sa与 Sb,先后插入到 p UC18质粒载体上的 Eco RI和 Pst I多克隆位点上 ,构建了重组质粒 p UC- S。根据 TGEV S基因位点和 p UC18的物理图谱 ,用相应的限制性内切酶进行酶切及套式 PCR方法进行鉴定、分析 ,证明克隆的 p UC- S为 TGEV S基因。同时对 p U C- S进行序列测定分析 ,并与来自美国、英国和日本的五个毒株进行核苷酸及编码氨基酸同源性比较 ,证明了 S基因的高度保守性     

感染鸡贫血病毒雏鸡接种新城疫疫苗后免疫功能和免疫调节的变化

雏鸡1日龄感染鸡贫血病毒，8日龄接种Lasota疫苗，以未感染免疫雏鸡为对照，于免疫后7、14、28d检测血清免疫球蛋白IgG、IgM、IgA,在凝抑制抗体（HI）滴度；胸腺、法氏囊、脾脏T细胞、IgG^ 、IgM^ 、IgA^ ,抗体生成细胞数量及T、B细胞增殖反应；胸腺、脾脏细胞因子IL－2、IFN活性的变化。结果发现，感染CAV雏鸡Lasota疫苗免疫后，其血清IgG、IgM、IgA免疫球蛋白含量明显减少，HI抗体滴度降低；胸腺、法氏囊、脾脏T细胞、抗体生成细胞数量降低及T、B细胞增殖反应减弱，胸腺、脾脏IL－2及TNF诱生活性降低，表明其细胞免疫和体流免疫功能以及细胞因子免疫调节作用均未感染免疫雏鸡明显减弱。     

鸡传染性支气管炎病毒HH06株膜蛋白多克隆抗体制备及生物学功能研究

文章通过RT-PCR方法扩增传染性支气管炎病毒（IBV）HH06株M全长基因，经抗原性和亲水性分析，将M部分序列成功亚克隆于pET-30a（+）和PVAX1载体中。将阳性重组质粒pET30a-M转化E. coli Rosetta （DE3）感受态细胞，诱导表达获得20 ku重组M蛋白。Western blot检测表明，重组蛋白能够与IBV参考阳性血清反应。以纯化重组M蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体，其ELISA效价达到1??218；Western blot结果证实，其具有良好的反应性和特异性。间接免疫荧光试验表明，抗M蛋白多克隆抗体可检测到PVAX-M1转染BHK-21细胞表达的M蛋白，与IBV HH06毒株具有很好的特异性反应。病毒感染抑制试验表明，多抗血清对IBV Beaudette株的抑制率可达到25.9%。为IBV检测及M蛋白功能的研究奠定基础。     

繁殖障碍型猪瘟的研究进展

猪瘟是威胁我国乃至全世界养猪业的主要疾病。目前该病的流行和发病特点发生了很大变化 ,本文仅就繁殖障碍型猪瘟的发病情况、发病特点及其防制的研究进展作一综述     

繁殖障碍型猪瘟的研究进展

猪瘟(Classical swine fever,CSF或Hog cholera,HC)是一种高度接触性传染病。该病于1833年首次发现于美国俄亥俄州,百余年来其流行遍及全球。国际兽疫局将其定为A类传染病,我国《动物防疫法》将其列为一类传染病,是目前危害我国养猪业发展的主要疫病之一。自20世纪60年代开始,我国C一株兔化弱毒苗及其换代产品(细胞菌)的广泛应用,有效地控制了猪瘟疫病在我国的发生和大流行。20世纪70年代后期,猪瘟的流行形式发生了很大变化,从频发的大流行转为无规律的散发性流行;病原毒力降低,临床表现由典型变为非典型。主要表现为母猪繁殖障碍、猪瘟病毒持续感染、胎盘感染、出生仔猪先天性颤抖等隐性感染猪瘟症状,对养猪业的发展与经济效益造成严重影响。     

猪传染性胃肠炎病毒S基因核酸疫苗免疫小鼠免疫器官病理组织学变化的研究

本实验对TGEVS基因核酸疫苗免疫后免疫器官的变化进行了研究,同时比较了两种核酸疫苗单独免疫小鼠后免疫器官的变化,证明重组核酸疫苗诱导小鼠产生免疫应答。