牛瑟氏泰勒虫吉林株18S rRNA基因的扩增及系统发育研究

本研究根据GenBank上发表的牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,对寄生于牛体内的瑟氏泰勒虫基因组DNA进行扩增,得到1 356 bp的18S rRNA基因片段,测序后blast分析表明该虫种属牛瑟氏泰勒虫。将该基因片段序列与GenBank中8种已知泰勒虫的相应序列进行比较分析,建立系统发育树。结果表明,牛瑟氏泰勒虫吉林分离株与水牛泰勒虫亲缘关系最近,与小泰勒虫亲缘关系较远。这一结果说明宿主因素对泰勒虫的基因型影响较大。     

右美托咪定神经保护机制的研究进展

长时间接受全身麻醉会损害发育期认知功能的形成,也会加速老年认知功能退化。近年来研究发现,右美托咪定(Dex)作为一种α₂肾上腺素能受体激动剂,不仅能与其他麻醉药联合使用,从而减少其他全身麻醉药的用量,还可以减轻麻醉药诱发的神经细胞氧化应激、细胞凋亡和线粒体损伤等,起到一定的神经保护作用。因此,本文从神经炎症和炎性因子释放、氧化应激、基因表达、细胞自噬、细胞凋亡、突触可塑性和神经发生等角度系统阐述Dex在麻醉过程中神经保护的作用机制,为进一步研究Dex的神经保护机理提供理论依据,为其在兽医临床和比较医学领域中的进一步应用提供参考。     

驽巴贝斯虫PCR检测方法的建立及应用

根据驽巴贝斯虫BC-48基因序列,设计并合成1对特异性引物,建立了驽巴贝斯虫PCR检测方法。试验扩增出610 bp的基因片段,其序列与GenBank上驽巴贝斯虫BC-48基因同源性为96.7%。而对新孢子虫、弓形虫、马巴贝斯虫的基因组DNA没有扩增带出现。对驽巴贝斯虫基因组DNA的最小检测量为2.812 fg/μL。通过对35份临床样品的检测,阳性率为20%。同时与血液涂片染色镜检进行了比较,结果表明,PCR检测方法准确、敏感、特异。     

吉林省部分地区马梨形虫病的流行病学调查

为了解吉林省部分地区马梨形虫病流行情况,以血液涂片染色镜检虫体的方法对吉林、延边、通化3个地区的130匹马进行了马梨形虫病的流行病学调查。结果表明,以上3个地区马梨形虫感染率分别为12.50%,26.09%,9.09%,其中以延边地区流行较为严重;3个地区流行的马梨形虫均以马巴贝斯虫为主。通过调查,吉林省是马梨形虫病的流行地区。     

以重组蛋白作为诊断抗原用ELISA方法对马梨形虫病调查

马梨形虫病是一种蜱传播的血液原虫病，以高热、贫血、黄疸、出血、呼吸困难等症状为特征，具有一定地区性和季节性。在我国大部分地区历年来均有不同程度的发生和流行，发病率曾高达49．09％，病死率为10％，常给养马户造成较大的经济损失。     

东方泰勒虫PCR-ELISA检测方法的建立

为建立东方泰勒虫PCR-ELISA检测方法,根据GenBank中报道的东方泰勒虫p33基因设计1对分别标记生物素(Biot)和地高辛(Dig)的引物,并优化PCR扩增和ELISA检测步骤,建立了东方泰勒虫PCRELISA。结果表明:该方法能检出的东方泰勒虫基因组DNA为18pg/μL,敏感性比常规PCR高10倍;且与环形泰勒虫、新孢子虫和弓形虫等的基因组DNA无交叉反应。对112份待检样本检测的结果,阳性检出率为34.8%(39/112),高于常规PCR的28.6%(32/112)。因此,所建立的东方泰勒虫PCR-ELISA具有敏感、特异、安全和快速的优点,适用于东方泰勒虫病的分子流行病学调查和口岸检疫等批量样本的检测。     

吉林省部分地区黄牛新孢子虫病的流行病学调查

为了解吉林省黄牛新孢子虫病的流行情况,用重组蛋白GST-NcSAG1作为ELISA诊断抗原,对吉林省4个地区153份黄牛血清样本进行了新孢子虫病的流行病学调查。结果梅河、舒兰、珲春、双阳地区黄牛的新孢子虫阳性率分别为4.55%,7.14%,10.53%,16.67%。调查结果表明,吉林省部分地区黄牛群中存在犬新孢子虫的感染。     

FTA纸片中保存的马巴贝虫DNA的PCR检测

应用PCR分别检测了保存在FTA纸片中和-20℃保存的37份马抗凝血液样本中的马巴贝虫DNA。结果显示，FTA纸片和马抗凝血液的马巴贝虫DNA检出率均为75．7％（28／37）。证实FTA纸片中的血液样本可以用于PCR检测，而且结果可靠、节省时间。便于送检和保存，有利于疾病的诊断和流行病学调查。     

猪附红细胞体特异性基因的克隆和序列分析

为分析吉林省流行的猪附红细胞体基因序列,根据发表的猪附红细胞体16S rRNA基因序列设计引物,扩增出长度约为541 bp的基因片段,并成功地将该基因克隆到pGEM-T Easy载体.将经Not Ⅰ酶切鉴定和PCR鉴定为阳性的重组质粒进行测序,与发表的附红细胞体基因序列进行比较,试验所获得的核苷酸序列与猪附红细胞体16S rRNA基因序列非常相近,同源性为97.8%～100%,从而证明吉林省所流行的猪附红细胞体属于16S rRNA基因群.     

牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因的克隆与原核表达

构建牛瑟氏泰勒虫P23基因片段原核重组表达质粒,表达重组蛋白。采用PCR方法扩增牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白基因,将扩增产物与pMD18-T-Simple载体连接,测序,验证扩增产物。将P23基因片段克隆到载体pGEX-4T-3上,经酶切分析、PCR鉴定后,IPTG诱导表达,最后用SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定表达产物。结果表明克隆的P23基因片段为684 bp,重组质粒pGEX-4T-3/P23构建成功;SDS-PAGE显示目的蛋白相对分子质量约为58 ku;Western blotting分析结果显示,与牛瑟氏泰勒虫阳性血清发生反应,而与牛瑟氏泰勒虫阴性血清无反应,表明牛瑟氏泰勒虫P23表面蛋白具有良好的抗原性和特异性,提示可以利用融合蛋白来建立检测抗体的间接ELISA诊断方法。