实时荧光PCR快速鉴定橘臀纹粉蚧

橘臀纹粉蚧Planococcus citris (Risso)是一种常见的农林业害虫,可为害寄主植物的茎、叶、花和果,造成叶、花和果的褪绿或畸形,严重影响水果的经济价值和园艺植物的观赏性。由于粉蚧科昆虫体较小,需制作玻片后才能进行鉴定,鉴定周期长、难度大,并且橘臀纹粉蚧与其近似种大洋臀纹粉蚧P.minor (Maskell)形态相似,因此建立快速准确鉴定橘臀纹粉蚧新方法十分必要。根据橘臀纹粉蚧线粒体DNA中特异序列设计实时荧光Taqman探针,通过优化反应条件,建立橘臀纹粉蚧实时荧光PCR快速鉴定方法,可用于基层实验室橘臀纹粉蚧的检测鉴定。     

桑树光合作用转录组研究

研究高产桑品种鄂桑1号(E1)和对照桑品种湖桑32号(H32)光合特性及光合相关基因表达变化,为桑树高光效育种以及种质资源筛选提供理论依据。利用LI-6400XT型便携式光合测定仪测定桑树叶片气体交换和叶绿素荧光参数,同时测定叶绿素含量和1,5二磷酸核酮糖羧化酶(RUBP)活性,在桑树光合日变化曲线峰值和谷底取样进行转录组测序,比较不同桑品种光合相关基因表达的差异。对E1和H32的光合日变化测定结果显示,桑品种E1叶片的Pn峰值显著大于H32峰值(P0.05),H32叶片Tr峰值显著大于E1峰值(P0.05);不同品种桑树叶片Pn-PAR和Pn-Ci的响应中,CE、CSP为E大于H32,AQY、LCP、LSP、CCP为H32大于E1。E1在较弱光强下实现光合产物积累的能力强于H32,E1对CO2低浓度的利用效率优于H32;不同桑品种叶片叶绿素荧光参数中,E1叶片ΦPSⅡ和qP显著大于H32(P0.05),H32的NPQ显著大于E1(P0.05),表明H32叶片吸收的光能较多的以热能的形式进行耗散;H32的叶绿素a、叶绿素b和叶绿素含量均显著小于E1(P0.05),E1的RUBP活性大于H32(P0.05),表明E1光合能力优于H32。不同品种不同时段发现3 356个差异表达基因(Differentially expressed genes,DEGs),代谢通路分析显示共有1 136个DEGs注释到KEEG数据库,DEGs显著富集的光合作用相关代谢通路主要是光合作用固碳、碳代谢、卟啉和叶绿素代谢等3条光合相关代谢通路。在FC≥2且FDR0.01的高差异表达基因中筛选功能描述与光合作用相关的新基因共10个。其中Mulberry_newGene_3646、Mulberry_newGene_1405、Mulberry_newGene_2419和Mulberry_newGene_320共4个DEGs可能是造成H32和E1净光合速率和产量差异的关键基因,可重点研究。     

PEG模拟干旱胁迫对不同桑树砧木生理生化特性的影响

采用5%的PEG模拟重度干旱胁迫研究不同桑树砧木的生理生化特性.在重度干旱胁迫下,桑树砧木叶片迅速失去水分,不同砧木的萎焉时间和萎焉率有明显差异.丙二醛(MDA)、脯氨酸(Pro)、过氧化氢(H2O2)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性等与抗逆性相关的生理生化指标的测...     

番茄黑环病毒检测方法的建立

通过汁液摩擦接种的方法接种几种鉴别寄主,筛选出检测番茄黑环病毒（TBRV）的一套鉴别寄主.同时建立了免疫学电镜检测方法.根据TBRV外壳蛋白基因的保守序列设计2对引物,应用RT-PCR均能从TBRV的6个分离物中扩增到与预期大小相同的DNA片段.利用抽提的质粒研究了RT-PCR方法检测TBRV的灵敏度.     

长期偏施氮肥对桑树根际土壤微生物碳源利用能力的影响

采用Biolog微生态技术,研究长期(4年-4Y,17年-17Y,32年-32Y)偏施氮肥桑树根际土壤微生物碳源利用能力变化。结果表明,不同施肥年限及不同取样时期桑树根际土壤微生物利用单一碳源能力不同,4Y土壤微生物活性(AWCD)、Shannon多样性指数及对糖类、氨基酸类、胺类碳源的利用能力均高于其他处理土壤,且与32Y土壤均达显著差异水平(P0.05);主成分分析表明,4Y土壤和17Y土壤与32Y土壤间微生物碳代谢功能差异较大;逐步回归分析表明,碳源利用Shannon多样性指数与土壤有机质含量、p H及速效氮含量有一定相关关系。     

桑园一年二熟制套作对桑树光合生理的影响

解析"桑树套作马铃薯和红薯"(Ms)与"桑树套作蚕豆和黄豆"(Md)2种桑园一年二熟制套作模式下的植物群体光能竞争机制,有助于通过技术措施提高桑园种植植物复合系统的光能利用效率。研究单作桑园(CK)与2种套作模式桑园内的微气候特征、桑树的光合特性和冠层结构等,结果表明:Ms和Md套作模式一定时期内可提高桑园内的CO_2浓度(Ca)、降低桑园内的温度(T)、提高桑园的环境湿度(RH);单作和套作模式下的桑树均有光合午休现象,净光合速率(P_n)、气孔导度(G_s)、胞间二氧化碳浓度(C_i)、蒸腾速率(T_r)日均值大小依次为CK、Md、Ms;CK模式的桑树冠层叶面积指数(LAI)、消光系数(K)、吸光度(R)均显著大于Md和Ms 2种套作模式(P0.05)。试验结果表明,2种桑园套作模式对桑树的正常生理和生长有一定影响,应加强套作桑园的肥水管理,减小桑树与套种作物的营养竞争;从增加桑园综合效益考虑,桑园适宜采用Ms和Md套作模式。     

套袋苹果微域环境下微生物种群结构研究

为了探讨套袋微域环境下微生物种群及对果实病害和质量的影响,以红富士苹果为试材,利用选择性培养基,对套袋苹果袋内微域环境的微生物进行了分离、鉴定和分类,分析了不同果袋和苹果表面不同部位微生物种群结构的变化。结果表明,在苹果套袋微域环境下,主要真菌是链格孢菌(Alternaria),还包括镰刀菌(Fusarium)和青霉菌(Penicillium);主要放线菌是烬灰类群(Cinereus),另外还有白色类群(Albosporus)、绿色类群(Viridis)和黄色类群(Flavus)等;不同果袋种类和果实不同部位的微生物种群结构差异不显著。     

食品过敏原大豆P34蛋白基因的实时荧光PCR检测

以大豆主要过敏蛋白P34基因为靶标,采用TaqMan探针实时荧光PCR方法建立食品过敏原大豆成分的检测方法。实验表明建立的检测方法具有特异性,灵敏度高,检测限为10mg/kg。通过对市售样品的检测,该方法适用于对常见食品种类的检测,但不适用于精加工油脂等精细加工产品的检测。     

实时荧光RT-PCR方法检测香石竹环斑病毒

 本研究以香石竹环斑病毒(Carnation ringspot virus, CRSV)的5个分离物为研究对象,根据CRSV运动蛋白（MP）基因的保守序列设计一对特异性引物和TaqMan荧光探针,建立了检测CRSV 的实时荧光RT-PCR（real-time fluorescent RT-PCR）方法。该方法利用TaqMan探针水解产生的荧光信号实时监测目标基因的扩增,实现real-time fluorescent PCR扩增和检测同步进行。结果表明,本研究建立的实时荧光RT-PCR方法具有更快速、灵敏和特异的优点,与普通RT-PCR方法相比其灵敏度提高了100倍,适合于对进境种苗携带的CRSV的快速检测。     

进境百合种球上草莓潜隐环斑病毒的检测方法

草莓潜隐环斑病毒(Strawberry latent ringspotvirus,SLRSV)是蔷薇科果实类作物上的重要病毒之一,在一些感病草莓品种上,可引起斑驳症状,导致品种衰退和品质、产量的严重损失[1-2].