牛流行热病毒人工感染牛外周血淋巴细胞T淋巴细胞亚类的分布研究

通过人工接种，使牛患牛流行热，并以流式细胞术分析了患牛高热期外周血中CD3^ 、CD4^ 、CD8^ 、γδT淋巴细胞和B淋巴细胞的分布情况。结果表明，高热期患牛外周血中CD4^ 细胞数明显升高，说明细胞免疫在牛流行热中的重要性；其它淋巴细胞亚类百分率无显著变化，但CD3^ 、CD8^ 和B淋巴细胞也有一定程度的提高；在反刍动物中起重要作用的γδT淋巴细胞则表现为下降，其作用尚需进一步探讨。本研究首次证明，BEFV可显著刺激牛外周血淋巴细胞CD4^ 的急剧增殖，证明牛流行热病程中细胞免疫可能起着重要作用。     

我国禽流感防制研究进展

禽流行性感冒 (简称禽流感 ,avian influenza,AI)是由A型流感病毒引起的禽类烈性传染病 ,被国际兽疫局定为A类传染病 ,并被列入国际生物武器公约动物类传染病名单。禽流感可表现为亚临床、轻度呼吸系统疾病、产蛋下降及急性致死性疾病等多种形式。世界各地历次由特定毒株引起的禽流感的暴发和流行 ,均招致禽只的大量死亡和生产性能急剧下降 ,造成了巨大的经济损失 [1 ] 。 1 997年香港H5N1和 1 999年内地和香港 H9N2禽流感感染人事件的发生 ,更突出地显示了禽流感的公共卫生意义。我国禽流感研究开展得较晚。自 80年代起始有禽流感病毒…     

鸡球虫基因工程疫苗研究进展

近年来 ,应用鸡球虫基因工程疫苗预防球虫病的试验报道逐年递增 ,许多保护性抗原陆续被发现。各种研究结果表明 ,动物机体的抗球虫免疫以细胞免疫为主 ,因此能否诱导机体产生细胞免疫是判定虫体蛋白能否作为重组疫苗成分的标准之一 ;此外 ,研究结果也显示 ,孢子或裂裂子生殖阶段的部分抗原可以诱导机体产生抗球虫免疫 ;抗有性生殖阶段抗原的抗体也可以减少攻虫雏鸡的排卵囊量。虽然在试验条件下 ,重组基因工程疫苗可以减轻球虫感染所造成的病理损伤或者减少卵囊在体内的繁殖数量 ,但距离应用于生产还相差较远 ,因此仍然有必要对相关的一系列问题进行更加详细和更深一层的研究 ,以期获得切实有效的鸡球虫基因工程疫苗     

应用放射性标记技术鉴定单克隆抗体及其特异性抗原

应用放射性结合试验和放射性免疫印迹试验证明:试验中原单克隆抗体具有牛外周血T细胞特异性;其特异性抗原为单一成分,分子量57Kd,占膜蛋白总量的6.9％。对戊二醛、SDS和热处理有较高的稳定性,糖蛋白检测阴性。     

用 MTT 比色分析法检测牛白细胞介素-2的研究

以伴刀豆蛋白 A(Con A)活化的牛外周血单个核细胞(PBM)作应答细胞,对四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析法检测牛白细胞介素-2(IL-2)的各项参数作了系统探讨,首次建立了检测牛 IL-2的 MTT 比色分析法。结果表明,活化应答细胞时的细胞密度以2.5～5×10~6个/ml、Con A 浓度以12.5μg/ml、活化时间以48～72小时为宜;MTT 比色分析的最适条件为:应答细胞密度1～2×10~5个/孔,α-甲基-D-甘露糖苷(α-mM)终浓度为12.5mg/ml,样品与应答细胞作用时间为36～48小时,MTT 用量为50μg/孔,MTT 作用时间为2.5小时,结果证明,本方法可检出少至390个活应答细胞、0.03个单位(U)的重组人 IL-2(rhIL-2)和2~(-5)稀释的含牛 IL-2培养上清.本方法避免了传统~3H-胸腺嘧啶核苷(TdR)掺入法的诸多不便,是一种方便、敏感、可靠和安全的牛IL-2检测法.     

白细胞介素-2免疫增强作用的研究

用白细胞介素-2(IL-2)体外诱导培养小鼠脾细胞制得的淋巴因子活化的杀伤(LAK)细胞对SP2/0、NS-1骨髓瘤细胞、P815肥大细胞瘤细胞及BW5147胸腺瘤细胞都具有杀伤作用,其杀伤率分别为35％、40％、45％和32％。证明IL-2可通过诱导LAK细胞而发挥抗肿瘤作用。IL-2和M5-y_(90)布鲁氏菌疫苗联合免疫鼠与疫苗单独免疫鼠相比,前者的抗布鲁氏菌抗体效价比后者高58～128％;前者的白细胞总数显著高于后者(31～83％);前者的细胞在淋巴细胞中的比例也比后者高10％。证明IL-2是一种潜在的免疫佐剂。     

堆形艾美球虫广东株Ea1A基因的扩增与序列测定

根据GenBank上登录的堆形艾关球虫Ea1A基因序列，设计了1对引物，以抽提的广东株的总RNA为模板，利用反转录一聚合酶链反应(RT—PCR)扩增获得了Ea1A基因部分片段，并将此片段克隆至pGEM—T载体中，经PCR、限制性内切酶分析和克隆片段序列测定、比较，证实了克隆片段的可靠性。     

反义RNA重组逆转录病毒逆转录套式PCR检测方法的建立

为探求一种快速检测反义RNA重组逆转录病毒效价的新方法，用脂质体介导法将反义RNA重组逆转录病毒载体pLXSA、pLXSB分别转染包装细胞系PA317，经G418筛选，获得数个稳定的产毒细胞克隆，择优挑选7个细胞克隆扩增培养，收集细胞上清，用异硫氰酸胍-酚一步法提取病毒RNA，进行逆转录套式PCR，检测细胞上清中的反义RNA重组逆转录病毒效价，同时用传统方法（小鼠成纤维放大法）进行测定。2种方法检测结果的比较表明，逆转录套式PCR法的特异性和敏感性均高于小鼠成纤维放大法，是一种敏感性高、特异性强、操作简便、快速的检测逆转录病毒效价的新方法。