禽腺病毒4型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

禽腺病毒4型(FAdV-4)是心包积水综合征的重要病原。本研究拟建立FAdV4荧光定量PCR检测方法,为FAdV4感染的流行病学调查、早期诊断、疫病净化提供技术手段。根据GenBank中的禽腺病毒4型六邻体(hexon)基因序列,设计一对引物,扩增hexon基因,将目的基因与载体pEASY-T3连接,构建重组阳性质粒pEAST-T3-H,利用所制备的质粒pEAST-T3-H为模板,对PCR反应体系、反应条件进行优化。建立了禽腺病毒4型SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,检出的标准品的敏感性为1.7×10拷贝/μL,优于常规的PCR检测方法。该方法与其他禽病病毒均无交叉反应。表明该方法具有特异型强、灵敏度高、重复性好的特点,可用于临床样本的检测。     

肉鸽新城疫强毒的分离与鉴定

从山东地区发病的肉鸽群中分离到一株新城疫病毒,经测定,其鸡胚半数致死量(ELD50)为107.8,10日龄鸡胚平均致死时间(MDT)为52.5h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1.8,6周龄幼鸡静脉接种致病指数(IVPI)为2.2,证明该NDV为强毒.将该病毒回归非免疫肉鸽,能产生典型的新城疫症状与病变.     

鸡混合感染血清4型禽腺病毒和传染性法氏囊病病毒的诊治

2017年6月,山东某养殖场43日龄蛋鸡群出现发热、精神沉郁、拉黄绿色稀便、黄疸、冠髯苍白、衰弱等症状,剖检表现为:心包腔蓄积大量淡黄色水样液体,肝脏充血、肿大、质脆、色淡,心肌松弛,脾脏、肾脏充血肿大,腺胃乳头有弥散性出血点,肺脏水肿,法氏囊肿大,腿肌点状或条状出血,个别肌肉苍白。根据临床症状、剖检病变、琼脂扩散试验和PCR检测结果确诊为血清4型禽腺病毒和传染性法氏囊病病毒混合感染。     

寡聚脱氧核苷酸对鸡免疫增强作用的研究进展

新型免疫佐剂CpG寡聚脱氧核苷酸（CpGODN）的发现源于人类对癌症治疗的探究。早在19世纪九十年代。人们就观察到注射全菌制剂的癌症病人的肿瘤可以显著消除。最初认为脂多糖是细菌制剂中的活性成份。随后对结核分枝杆菌的研究证实,在鼠体内细菌DNA是抗肿瘤活性的主要介导物,其证据是BCG经DNA酶预处理后,细菌DNA的抗肿瘤能力就彻底消失。     

重组大肠杆菌的高密度发酵放大工艺研究

在初步筛选获得性价比较好的大肠杆菌高密度发酵培养基的基础上,以表达溶菌酶基因的pcDNKLYZ重组质粒转化的大肠杆菌DH5α为模型,用150 L发酵罐进行工艺放大研究,通过对细菌生长密度(D600 nm值)、质粒产量的比较和分析,探讨用于重组质粒规模化生产的发酵工艺。结果表明:国产培养基中添加100 mL.L-1甘油、磷酸盐和硫酸盐后,重组菌的生长密度和质粒产量均与进口LB培养基接近或略高;收集的菌体分别于-70和-20℃保存,质粒提取和定量检测结果显示保存6周后质粒产量无明显变化;质粒提取和定量检测结果显示每克湿菌用5 mL溶液悬浮,可获得较高的质粒产量。     

1株鸭坦布苏病毒人工感染雏鸭的病理学研究

7日龄雏鸭经肌肉接种坦布苏病毒BZ株1周后,发病率100%,死亡率为80%。接种鸭全身多数器官出现充血、出血、坏死等症状,病理学变化主要表现在肝实质严重变性、坏死;脾淋巴细胞局部减少;肾小管上皮细胞肿胀;肺淤血,内有大量细胞渗出;胰腺中可见凝固性坏死灶;大脑软脑膜充血、水肿,小脑脑膜上炎性细胞浸润。鸭接种该病毒后,攻毒组的丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、谷氨酰胺转移酶、乳酸脱氢酶水平和血清尿酸的浓度较对照组明显升高。结果表明:坦布苏病毒BZ株可造成全身多器官的病理性损伤以及主要血液生化指标的显著变化,这可能是该病毒致病性的重要机制之一。     

一株肉鸡H9亚型禽流感病毒的分离鉴定及其对肉鸡增重的影响

从济南地区发病鸡群中分离到一株病毒,经血清中和试验和RT—PER鉴定为H9亚型禽流感病毒（命名为DJ07）,并对其ELD加、HI相关系数及HA基因序列进行了分析,将DJ07回归试验肉鸡,发现其能显著降低试验鸡的增重率,而且降低幅度比蛋鸡源性H9要大。     

鸭病毒性肝炎病毒VP3基因的克隆与表达

提取鸭肝炎病毒RNA作为模板,进行RT-PCR扩增,得到723 bp的VP3基因,将纯化的VP3基因片段与pMD18-T载体进行连接,构建DHVVP3基因克隆重组质粒。然后定向插入到pET-32a(+)表达载体,筛选获得原核表达载体pET-32a-VP3。用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳和Western blot分析表明,VP3蛋白得到正确表达,其分子量为47.1 ku,表达的蛋白能与鸭肝炎阳性血清发生特异性反应。     

利用Cre-loxP自动去除禽痘病毒重组体的报告基因

在含痘病毒早晚期启动子的绿色荧光蛋白(GFP)基因表达盒侧翼各引入1个loxP序列。以禽痘病毒282E4株作为候选载体,通过同源重组将其插入到病毒基因组的FPV030区域,获得了表达GFP的重组禽痘病毒。然后在Cre酶介导下,利用loxP位点特异性重组剪除了重组病毒基因组中的GFP报告基因。结果表明,以GFP作为筛选标记使重组病毒的构建更为简便,同时利用Cre-loxP系统可以轻松地去除报告基因。这种技术有利于其它抗原性基因重组禽痘病毒的构建。     

2024年监测中心第一季度禽病检测动态

2024年第一季度实验室共接收家禽临床送检样品1 480份,利用PCR或荧光定量PCR方法对家禽主要疫病病原进行检测,结果发现鸡病原以呼吸道疾病病原和免疫抑制性病原占绝对优势,其中位居前三位的是传染性法氏囊病毒（IBDV）、H9亚型禽流感病毒（AIV-H9）和鸡传染性支气管炎病毒（IBV）,阳性检出率分别为28.13%、22.92%和21.88%。鸭病原中鸭圆环病毒1型(DCV-1)占首位,阳性检出率为21.43%,其次为鸭新型呼肠孤病毒(D-REOV)和鸭肠炎病毒（DPV）,阳性检出率分别为19.05%和16.67%。鹅病原中番鸭呼肠孤病毒（MD-REOV）占居首位,阳性检出率为34.62%,其次为鹅星状病毒（GastV）、细小病毒（GPV）和鸭圆环病毒1型（DCV-1）,阳性检出率均为15.38%。