PrPc重组蛋白脑内接种金黄地鼠对mRNA表达的影响

为明确将牛PrPc重组蛋白接种金黄地鼠脑内是否引起异常临床表现、脑组织病理学变化及对其mRNA表达产生影响,为进一步研究PrPc蛋白与异构体PrPsc 的结构转换机制提供基础数据,将纯化的牛PrPc重组蛋白磷酸盐缓冲液制剂进行地鼠颅内接种,约3 μL/只,对照接种磷酸盐缓冲液（PBS）;102 d后取出脑组织：一部分福尔马林固定后进行常规H.E.染色观察, 另一部分提取脑组织总RNA,进行实时荧光定量RT-PCR检测.结果表明：处理未见临床异常表现;大脑、小脑、脑干组织病理学检测未见海绵状空泡变性和淀粉样斑;大脑PrPc mRNA表达水平无显著性差异.上述结果表明,用PrPc重组蛋白接种,在检测时间102 d内未引起金黄地鼠行为和脑组织的异常改变.     

pIRES2-EGFP-prnd真核表达载体的构建及其在BHK细胞中的表达

为探讨叠朊蛋白(Doppel)在正常生理条件及相关疾病中的临床及生物学意义,构建BALB/c小鼠Doppel基因prnd的重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-prnd,并转染BHK细胞,IFA检测其表达情况。结果表明,Doppel蛋白通过pIRES2-EGFP-prnd在BHK细胞中表达。试验可为进一步研究Doppel蛋白的结构、正常的生理生化功能及其与相关疾病的关系提供重要工具。     

致病性病原真菌研究进展

少数真菌（约１００余种）可引起人类及畜禽发病，这一类真菌称为“病原真菌”。根据致病作用，将致人和动物疾病的病原真菌分为几类：一类为真菌病的病原，如流行性淋巴管炎囊球菌等；另一类是真菌中毒病的病原，如镰刀菌等，人和动物食后引起中毒；还有少数真菌兼有感染和产毒性，如黄曲霉、烟曲霉等可致禽类霉菌性肺炎并产毒素而引起中毒。常见的致病真菌有以下几种：１流行性淋巴管炎囊球菌本菌系不完全纲含珠菌目的一种酵母样真菌，又名假皮隐球酵母菌。可致马属动物流行淋巴管（结）发炎、肿胀、溃疡，为一种慢性接触性传染病。１．１…     

实时荧光定量PCR构建奶牛生殖系统PrP基因标准品质粒和标准曲线

为阐释PrP基因在奶牛生殖系统的正常表达和正常的生理功能,以及为确定生殖系统在疯牛病垂直传播中的地位和其分子机理奠定基础,采用实时荧光定量RT-PCR的方法构建了奶牛生殖系统PrP基因的标准质粒和标准曲线。对含有目的基因质粒的EcoRⅠ酶切鉴定表明所插入的片段大小为302 bp,与预期的结果一致。所构建的标准曲线的相关系数r2=0.999,系统生成的回归方程为y=-0.29x 9.48,说明成功构建了奶牛生殖系统PrP基因的标准质粒和标准曲线,为研究PrP基因在奶牛其他组织的定量奠定基础。     

广房仔猪腹泻的鉴别与治疗

产房仔猪腹泻常见多发．主要表现为：腹泻、消瘦、脱水、被毛粗乱,衰竭死亡：病死猪皮肤苍白或呈暗红色,暴发或散发．治疗效果较差。病因可分为传染性因素和非传染性因素,传染性因素主要包括：冠状病毒或轮状病毒感染、大肠杆菌感染、产气夹膜梭菌感染、猪球虫感染、沙门氏菌感染、猪痢疾;非传染性因素常见于气温骤变仔猪受凉、母猪无乳或少乳造成仔猪低血糖症表现的腹泻症状等。     

实时荧光定量PCR检测PrP基因在金黄地鼠脑组织的动态表达

金黄地鼠是研究动物传染性海绵状脑病的理想模型动物之一,其脑组织内朊蛋白基因动态表达数据的测定对探讨该类疾病的发生、发展和分子致病机理具有重要意义。我们利用实时荧光定量RT-PCR技术,对不同年龄金黄地鼠大脑、小脑、丘脑和脑干PrP基因的表达进行了定量。结果发现,脑的四个检测部位都呈现高的表达量,但是同一年龄段不同组织每纳克总RNA中朊蛋白基因的表达量和每毫克组织中朊蛋白基因的表达量有显著的差别,不同组织在不同年龄出现表达高峰。本研究的结果对于探讨朊蛋白的基本功能和脑组织在传染性海绵状脑病病理发生中的作用,提供了基础数据。     

连翘水提液体外对禽流感病毒增殖及炎症因子表达的抑制效应

旨在评估连翘体外抗H5N1和H9N2禽流感病毒（avian influenza viruses,AIVs）增殖及其介导炎症的效果,本试验制备了连翘水提液,首先采用CCK-8法测定了连翘水提液对DF-1细胞的安全浓度,并通过3种处理方法（药液预处理病毒后感染细胞、先感染病毒后给药、先给药后感染病毒）来筛选连翘水提液的最佳给药方式;在最佳给药方式下,使用TCID₅₀法检测禽流感病毒H5N1和H9N2的增殖情况,并采用qRT-PCR检测了炎症相关趋化因子和细胞因子的表达变化。结果显示,连翘水提液对DF-1细胞的最高安全浓度为4 mg·mL^-1;先感染病毒后给药是最佳的给药方式;在最佳给药方式下,连翘水提液能显著降低H5N1和H9N2 AIVs在各个时间点的病毒滴度,并呈剂量依赖性关系;与对照组相比,H5N1 AIV给药组中CX3CL1、IL8L1、CCL5、SCYA4、IL1β、IL-6和TNF-α的表达显著降低,H9N2 AIV给药组中CX3CL1、IL8L1、CCL5、IFN-β、IL-6和TNF-α的表达也有类似的下降趋势。这表明连翘能够抑制H5N1和H9N2 AIVs在DF-1细胞中的增殖,降低炎症相关细胞因子的表达,有良好的抗炎和抗病毒活性。     

SD大鼠层粘蛋白受体基因的克隆与序列分析

以大鼠大脑皮质神经元的总RNA为模板,运用RT-PCR方法扩增了SD大鼠层粘蛋白受体基因, 并将其克隆到pMD18-T Simple载体中进行测序,运用分子生物学软件对获得序列进行了分析.结果表明所克隆的SD大鼠层粘蛋白受体基因的ORF片段包含了朊蛋白基因的完整编码区,共888个核苷酸, 该基因内无内含子,编码295个氨基酸的前体蛋白,推测其相对分子质量约32.6 kD.与已报道的绵羊、家鼠、猪、牛、人相应序列作比较,发现其核苷酸序列和氨基酸序列具有较高的同源性.氨基酸序列分析表明,SD大鼠层粘蛋白受体的氨基酸点突变位点为V176M,G243E.研究结果为探讨层粘连蛋白受体基因的功能及其在疾病发生、发展过程中的作用提供了基础数据.     

高+Gx过载作用对恒河猴肺脏的影响

15只健康恒河猴于清醒状态下，在动物离心机上经受相应峰值( 1Gx、 15Gx、 18Gx、 21Gx)的抛物线型过载作用后，按要求在过载后不同时期剖解，大体观察、取材，进行病理形态学的定性研究。结果显示：(1)眼观病变。 15Gx组、 18Gx组和 21Gx组在过载作用后即刻肺脏出现了不同程度的气肿、萎陷、淤血和出血点或斑；恢复组可见肺脏边缘有不同程度气肿区域，肺脏的背面呈暗红色；在各叶的背面均可见大小不等、多少不一的暗红色出血点或斑。(2)光镜下可见各急性实验组动物的肺脏呈现不同程度的气肿区和萎陷区，肺泡壁毛细血管扩张充血，肺泡腔内有浆液和红细胞渗出； 21Gx组还出现了血管内溶血、细支气管粘膜脱落和出血等，肺脏的病理损伤随G值升高而明显加重； 15Gx作用造成的肺脏损伤在1个月后基本恢复。而 21Gx作用后1个月肺脏的损伤尚未恢复，且出现了白细胞浸润、浆液渗出和增生等炎症反应。因此，高 Gx过载可引起猴肺脏明显的病理性损伤，其中 15Gx造成的损伤相对较轻，且容易恢复，而 21Gx造成的损伤严重，且难以恢复。     

抗羊口疮病毒蛋白ORFV086多克隆抗体的制备及其应用

本试验旨在克隆表达羊口疮病毒(ORFV)蛋白ORFV086,制备兔抗ORFV086蛋白多克隆抗体并检测ORFV086蛋白的表达。以ORFV基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增ORFV086的基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-33b(+)。将构建的pET33b-086重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3) pLys 感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达,以纯化蛋白作为免疫原,免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体。应用ELISA和Western blotting方法对所得抗体进行检测。结果显示,重组蛋白pET33b-086主要以包涵体形式存在,分子质量约为100 ku;目的蛋白经切胶纯化回收后作为免疫原制备的多克隆抗体效价达1:128000;纯化的多克隆抗体可用于检测重组及天然ORFV086蛋白,特异性好。本试验制备了ORFV086多克隆抗体,为深入研究ORFV086蛋白在羊口疮病毒感染过程中的作用奠定了基础。