牛BLG/hEPO和大鼠WAP/hEPO基因在家兔乳腺中的表达

将人红细胞生成素 (h EPO)基因组 DNA(g DNA)与 1.1kb牛 β-乳球蛋白 (BL G)基因的 5′端上游调控序列融合 ,构建了 p CMV- BL G- EPO- b GH poly A(p CBEA)乳腺定位表达载体。该载体与已构建的大鼠乳清酸蛋白 (WAP)基因 5′端上游调控序列和 h EPO融合基因 p WAP- EPO- WAP3′U TR(p WE3′)和 p CMV- WAP- EPO- b GH poly A (p CWEA )经脂质体包裹后 ,通过显微外科方法 ,经乳腺导管注入妊娠中后期家兔乳腺内 ,进行短暂表达。于家兔分娩后 1～ 2 5 d采奶 ,EL ISA检测乳汁中 EPO含量 ,3个载体均获得表达。表达水平从高到低依次为 p CWEA、p CBEA、p WE3′;表达量为 0 .116～ 0 .75 3μg/ L ,且表达一直持续整个泌乳期     

一起由冠状病毒引起的肉鸭急性传染性腹泻的调查和初步实验研究

这起肉鸭急性传染性腹泻病起病急,传播快,死亡率高,临床主要呈现腹泻;尸检主要病变在消化道,最为明显且有规律地集中在十二指肠段;采集18份十二指肠内粘性分泌物及泄殖腔内粪液进行电镜检查,全部查到散在具有冠状病毒典型形态的病毒颗粒,取十二指肠进行超薄切片检查,在肠粘膜上皮细胞中可见数量不等的冠状病毒颗粒;用刚死鸭十二指肠内枯液性分泌物经消化逆进行回归试验,可引起试验鸭发病、死亡,从而认为“冠状病毒”是本病病毒。     

牛BLG／tPA和牛as1酪蛋白／tPA基因在家兔乳腺中的暂时表达

为鉴定和筛选用于制备tPA转基因动物乳腺生物反应器的高效表达载体，试验分别以1.1kb牛b-乳球蛋白（BLG）基因，1．0kb牛asl酪蛋白基因5'端侧翼调控序列与1．7kb经过改造的人组织纤溶酶原激活剂（tPA)cDNA融合，构建了pBLG-PA2和pasl-PA22个乳腺定位表达载体。载体经酶切鉴定正确后，用脂质体包裹，并用毛细玻璃管经乳头管导入妊娠中后期的家兔乳腺，进行暂时表达。分别于家兔分娩后1－15d采奶，采用琼脂糖平板溶圈法测定乳汁中tPA的含量和活性。结果2个载体均获得表达，且pBLG-PA2表达水平高于pasl-PA2。pBLG-PA2和pasl-PA2在家兔乳汁中的含量分别为200－850μg/Lt 50-250μg/L。     

人c-myc乳腺定位表达转基因小鼠的建立

以含有 1.6 kb的小鼠乳清酸蛋白 (WAP)上游调序列的 p CAT- WAP和含有人 c- myc c DNA的 p WM为原始质粒 ,构建了 WAP启动子调控下的 c- myc乳腺定位表达载体 p WCS。载体用 Bgl Bam H 酶切 ,回收 3.5 kb的基因片段 WAP- c- myc- SV40 Poly A,通过显微注射方法导入 C5 7BL/ 6 J× DBA/ 2 JF1 代小鼠受精卵的雄原核内。共注射10 0 0枚卵 ,将存活的约 6 0 0枚卵分别移植至 2 9只假孕母鼠输卵管内 ,获得仔鼠 45只。PCR检测 ,阳性鼠 9只 ,South-ern blot检测 ,阳性鼠 3只 ,其中 1只母鼠 ,2只公鼠 ,在饲养过程中 ,1只母鼠意外死亡。对 2只转基因公鼠的 F1代PCR检测表明 ,仅 1只公鼠具有遗传性 ,在所生的 2 7只 F1代小鼠中有 13只为 PCR阳性。     

hEPO乳腺定位表达载体的构建及其在大鼠和家兔乳腺中的暂时表达

将人红细胞生成素（ｈＥＰＯ）基因组ＤＮＡ（ｇＤＮＡ）与大鼠乳清酸蛋白（ＷＡＰ）基因的上游调控序列融合,分别构建了ＰＷＡＰＥＰＯ－ＷＡＰ３‘ＵＴＲ（ＰＷＥ３’）和ＰＣＭＶ－ＷＡＰ－ＥＰＯ－ＢＨＧｐｏｌｙ（ｐＣＷＥＡ）２个乳腺中位表达载体,表达载体经脂质体包裹后,以显微外科方法,经乳腺导管注入妊娠中后期大鼠和家兔腺内,进行暂时表达。分别大于分娩后４８、７２ｈ,家兔分娩后１－１０ｄ采奶,ＥＬＩＳＡ方法检     

鸭冠状病毒肠炎流行病学调查

我们对昆明６个鸭场进行了冠状病毒的流行病学调查,经临床和实验室综合诊断,确诊有２次流行性腹泻是由鸭冠状病毒引起的。１调查方法对曾发病鸭场及周围３个个体养鸭场和畜产公司养鸭场、王官养鸭场共６个养鸭场进行了调查。当鸭群临床上出现流行性和传染性的腹泻时,采...     

电穿孔导入法在家兔精子基因转移中的应用

用假阴道法采集青紫蓝家兔精液,经电击缓冲液清洗、适当稀释后,加入质粒ＤＮＡ,利用ＢＡＥＲＯＮ６０００型基因转移仪,选择９组不同的电击条件对其进行电击处理,电击后的精子经ＤＮＡ Ｉ酶消化后作地高辛标记探针的原位杂交检测。结果显示：（１）电穿孔导入法确实能使精子细胞携带上外源基因;（２）最佳的电击条件为,脉冲时间５００ｍｓ,电压６ｋＶ。     

鼻咽癌来源潜伏膜蛋白1的表达诱发转基因小鼠鼻咽不典型增生

为建立鼻咽癌来源潜伏膜蛋白1（N－LMP1）转基因小鼠模型，从整体的角度研究N－LMP1的功能，进一步阐明EB病毒在鼻咽癌变过程中的作用，应用DNA重组技术将角质细胞特异性启动子EDL2与N－LMP1连接，构建转基因EDL2－N－LMP1；并用显微注射技术，将转基因EDL2－N－LMP1注射入小鼠受精卵前核，再将注射后的受精卵植入假孕母鼠，获得转基因鼠，然后观察目的的基因在鼻咽部的表达和病理变化。本实验共获得53只转基因鼠，PCR法证明其中6只小鼠有N－LMP1基因扩增带，Suothern杂交显示PCR阳性小鼠有特异的杂交信号，整合率为11．3％，1只4月龄的转基因鼠出现了鼻咽部不典型增生，说明N－LMP1单独就能诱发小鼠鼻咽部发生癌前病变，为EB病毒可能是鼻咽癌的主要病因提供了有力的证据。     

犬疱疹病毒感染的病理学研究

犬疱疹病毒感染的病理学研究范泉水齐桂凤王度林陆明昌乔贵林兰建强成都军区后勤部军事医学研究所幼犬感染疱疹病毒以后，可见肝、脾、肺、肾、肾上腺及脑各实质脏器表面有１～２ｍｍ的灰白色坏死灶和出血点；肺和肾脏尤为明显，大部分犬胸腹腔内有带血的浆液积留。实质脏...     

应用ELISA双抗体夹心法诊断鸭冠状病毒性肠炎的研究

将电镜检查鸭冠状病毒阳性的病鸭肠管及粪便,经PEG沉淀及蔗糖线性梯度超速离心提纯抗原。用其免疫豚鼠制备抗血清,经饱和硫酸铵粗提,再经QAE-ScphadcxA50离子柱纯化提取IgG。纯化IgG与辣根过氧化物酶(HRP)用过碘酸钠法进行标记,制备酶标抗体,建立ELISA了双抗体夹心法,以诊断鸭冠状病毒性肠炎抗原,对发病鸭及回归试验、人工感染试验中收集的55份粪便样品,用本试验检测,并用电镜检查作为对照,证明该法具有特异、敏感、快速、简便之优点,解决了仅靠电镜检查的局限性。