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根据鸡白痢沙门菌与鸡伤寒沙门菌的rfbS基因在第237和第598位碱基的不同,设计和合成了等位基因特异性PCR引物,建立了快速检测鸡白痢沙门菌的PCR方法,并应用该方法对鸡白痢沙门菌临床分离样品进行了PCR鉴定。结果显示,该PCR方法能够特异性地鉴定鸡白痢沙门菌,检测灵敏度达100PgDNA。对35个经常规方法鉴定的鸡白痢沙门菌分离株应用等位基因特异性PCR方法进行鉴定,鉴定出33株鸡白痢沙门菌,符合率为94.3%。表明,建立的等位基因特异性PCR方法能够准确而快速地鉴定鸡白痢沙门菌。 相似文献
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建立了利用STR-PCR技术检测克隆羊的DNA多态性的方法,即利用带有荧光标记的特异性引物,扩增产物带有荧光,在allelic ladder的指示下计算出扩增产物大小,即等位基因的大小。用该方法对克隆羊的8个DNA位点进行了遗传多态性分析,成功地对各位点进行基因型分离检测,结果表明克隆羊的基因组DNA和供核羊的基因组DNA是一致的。此方法和其他方法检测的结果完全一致。 相似文献
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为了提高转基因动物乳腺特异性表达水平,构建了两种不同启动子的乳腺特异性表达载体,以比较其乳腺特异性表达效果.应用山羊β-酪蛋白或牛αs1-酪蛋白调控序列、鸡β-球蛋白隔离元件、巨细胞病毒(CMV) 基因表达涮控元件构建了,乳腺特异性表达复合启动/增强子(Pcmv) ,以单一的酪蛋白启动子作为对照,与人乳铁蛋白cDNA组成乳腺特异性表达载体,并制备了转基因小鼠.经ELISA检测,复合启动/增强子构件指导人乳铁蛋白cDNA在原代转基因小鼠乳腺中重组人乳铁蛋白(rhLF) 表达水平(2.0~8.1 g·L-1) 明显高于单一酪蛋白启动子构件(0~12 mg·L-1) ,而在所有转基因小鼠的血清和唾液中未检测到rhLF.结果提示:酪蛋白-Pemv复合启动/增强子不仅可提高转基因小鼠乳腺特异性表达水平,而且具有良好的乳腺表达特异性. 相似文献
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将氯霉素(Cm)抗性基因克隆到pUTmini-Tn5Km2载体中,利用含卡那霉素(Km)和氯霉素(Cm)抗性基因的pUTmini-Tn5Km2(Cm)转座载体将Km和Cm抗性基因随机插入鸡白痢沙门氏菌基因组中,以相应的抗生素进行筛选,获得大量在不同位点插入突变的突变体,从中筛选鸡白痢沙门氏菌某功能缺陷型突变株。通过对突变株的基本特征以及PCR鉴定后,再进行插入基因定位。结果表明,Km和Cm抗性基因已成功转座至鸡白痢沙门氏菌基因组上;基因定位显示突变株均有且只有1个插入位点,插入位点的位置不尽相同。这为研究鸡白痢沙门氏菌功能基因和筛选特定突变株提供了必要的基础。 相似文献
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本研究对破伤风毒素C片段进行了基因克隆、重组表达、蛋白纯化和免疫原性分析。应用PCR技术直接从破伤风梭菌64008菌株基因组中扩增出大小为1356 bp的破伤风毒素C片段(TetC)基因,经DNA序列测定分析,扩增出的基因与GenBank上登录的序列AF154828的同源性达到99.2%。将此基因克隆至大肠杆菌融合表达载体pGEX-6P-1,构建成重组表达质粒pGEX-6P-1-TetC,并在大肠杆菌BL21中表达,重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的21%。经SDS-PAGE蛋白电泳鉴定,表达产物为76 Ku左右的重组蛋白,经免疫印迹试验证实该重组蛋白是破伤风毒素C片段抗原。 相似文献
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一流行特点1基本流行情况本病及病原于1925年在美国洛岛由May和Tittste最早发现,以后发生于美国、欧洲等养鸡发达地区,上世纪50年代至60年代在我国报道,90年代在徐州周边地区呈地方性流行,目前本地区仍呈地方性流行,但疫点和流行范围在逐渐增加和扩大。 相似文献
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为表达麻鸭白介素17(duIL-17),本研究提取ConA刺激的麻鸭脾脏淋巴细胞总RNA,RT-PCR扩增duIL-17基因片段,将该片段插入克隆载体pCR2.1中构建重组质粒pCR2.1-duIL17.将duIL-17基因片段亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组质粒pGEX-duIL17,将其转化到大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达.测序结果显示,duIL-17与参考序列(EU366165.1)相比较第174位碱基由C突变为T,并且为沉默突变.SDS-PAGE和western blot分析显示,诱导表达的重组蛋白GST-duIL17主要以包涵体形式存在,分子量大小约为45 ku,duIL-17与抗鸡IL-17抗体具有良好反应性.本研究为制备duIL-17单克隆抗体提供了实验依据. 相似文献
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乙肝病毒基因在转基因小鼠中高效表达的研究 总被引:1,自引:1,他引:1
采用传统育种方法,将整合含有人类乙肝病毒(HBV)基因的转基因小鼠通过近交和远交的育种方法,获得纯合子小鼠,收集由纯合子小鼠产生的双重杂合子小鼠及后代小鼠的血清,用竞争PCR联合产物酶联杂交技术定量测定血清中的HBVDNA量。结果表明:相对于单纯杂合子小鼠,纯合子小鼠的表达量增高不明显,而双重杂合子小鼠的表达量有明显提高。将双重杂合子再进行杂交传代,其后代也有增高趋势。 相似文献