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用ELISA方法进行猪圆环病毒病血清学调查 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究用猪2型圆环病毒ORF2基因的表达产物包被酶标板,建立ELISA诊断方法,用此方法对临床1257份送检血清进行了检测,其总阳性率为57.28%(720/1257),仔猪阳性率为30.83%(119/386),肥猪阳性率为64.93%(137/211),母猪阳性率为71.50%(419/586),公猪阳性率为70.27%(52/74)。这一结果表明猪圆环病毒在我国流行较普遍,且抗体阳性率随猪体年龄的增长而升高。 相似文献
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为了解华中地区犬细小病毒2型(CPV-2)的流行趋势以及变异情况,本研究于2020年9月至2022年1月间采集华中地区的418份疑似感染犬细小病毒的粪便样品,通过PCR方法检测,利用F81细胞进行病毒分离、间接免疫荧光试验,并对分离病毒的VP2基因进行氨基酸序列及其同源性和遗传进化分析。结果显示,358份病料检测出CPV-2,阳性率为85.65%。病料接种F81细胞后,有23份阳性样品出现明显细胞病变,间接免疫荧光试验观察到明显荧光。VP2基因序列分析结果表明,分离毒株中有New-CPV-2a型12株、New-CPV-2b型5株、CPV-2c型6株。核苷酸同源性为97.9%~99.8%,氨基酸同源性为95.9%~100.0%。遗传进化分析结果显示,分离毒株与国内分离株、伊朗、巴西分离株亲缘关系较近,与意大利、日本、阿根廷分离株亲缘关系较远。本研究为华中地区犬细小病毒防控及研制高效疫苗奠定了基础。 相似文献
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圆环病毒是近年来兽医界广泛关注的新发现畜禽类病毒之一,具有重要的经济意义.在2000年墨尔本国际猪病会议(IPVS)和1999年北京国际禽病会议(ICEVP)上均成为受到重视的热门话题. 相似文献
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间接ELISA检测猪伪狂犬病血清抗体 总被引:9,自引:0,他引:9
用猪肾传代细胞IBRS-2增殖猪伪狂犬病病毒(PRV)鄂A株,病毒培养上清液经硫酸铵沉淀、聚乙二醇(Mr20000)浓缩后作为包被抗原。用纯化的猪血清IgG免疫家兔,HRP村记撮的兔抗猪IgG,制备出高效价的酶标抗体,酶标抗体工作浓度为1:50000;经各种条件的选择,建立了检测猪伪狂犬病血清抗体的间接ELISA。所建立的间接ELISA抗原包被浓度为39.2mg/L,血清最佳稀释度为1:20,与猪细小病毒、猪、O型口蹄疫、猪衣原体标准阳性血清呈阴性反应,与标准阴性血清和临床未感染PRV的猪血清呈阴性反应;与猪伪狂犬病标准阳性血清、免疫猪血清和临床发病猪血清呈明显的阳性反应;与美国进口的PRV抗体检测ELISA诊断试剂盒检测结果比较,45份猪血清的阴、阳性检出符合率均为100%。表明建立的间接ELISA具有敏感性高、特异性强、重复性好的优点,可用于猪伪狂犬病血清抗体的定性和定量检测。 相似文献
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用EcoR Ⅰ酶切伪狂犬病病毒疫苗株Tk-/gE-/LacZ 基因组,与含有猪2型圆环病毒(PCV2)ORF2基因的重组转移载体pIEORF2共转染IBRS-2细胞.收集病变细胞,经空斑纯化和PCR鉴定,获得了新的重组病毒Tk-/gE-/ORF2 .用Southern blot杂交证明该重组病毒构建正确,用间接免疫荧光法和Western blot证日月该重组病毒可表达PCV2的主要免疫原性蛋白Cap蛋白.重组病毒在IBRS-2细胞上连续传15代后,遗传稳定.该重组病毒在IBRS-2细胞上增殖滴度为10-7.1 TCID50/0.1mL,在鸡胚成纤维细胞上增殖滴度为10-4.8 TCID50/0.1mL,在Marc-145细胞上增殖滴度为10-6.8 TCID50/0.1mL. 相似文献
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为分析中国新疆小反刍兽疫病毒(PPRV)毒株分子演变特点和疫情传播路线,从GenBank数据库下载所有国家全部的PPRVF基因全序列,应用DNAStar软件,结合疫情毒株时空分布进行序列分析。结果显示,中国新疆PPRV株F基因全序列,与2014年小反刍兽疫情中河南和北京毒株核苷酸的同源性最高,为99.8%~99.9%,与中国西藏3个毒株核苷酸的同源性为97.7%,与中国采用的疫苗株核苷酸同源性为92.9%,核苷酸同源性最低的是肯尼亚毒株,与国外毒株核苷酸同源性最高的是印度毒株。F基因系统进化关系分析显示,中国新疆PPRV株属于基因Ⅳ系。F蛋白氨基酸同源性结果显示,除与科特迪瓦1989年毒株ICV89氨基酸同源性最低外,与其他氨基酸同源性比对结果均与核苷酸的比对结果一致。中国新疆PPRV株存在一定程度的变异,可能是由周边国家传入。 相似文献
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应用在大肠杆菌中表达的猪2型圆环病毒ORF2蛋白建立一种ELISA诊断方法 总被引:13,自引:1,他引:13
根据GenBank中猪2型圆环病毒(PCV2)序列(AY035820),设计1对引物,并以包含PCV2全基因组的重组质粒pT-PCV为模板,扩增出含ORF2全基因的片段(709bp),回收PCR产物,将其克隆入pMDl8-T载体,获得重组质粒pTORF2,并对其进行序列测定。重组质粒经Bal I和Sal I双酶切,回收ORF2基因,将其插入pGEX-KG的Sma I和Sal I位点间,构建原核表达质粒pGEXORF2,阳性重组质粒转化E.coli BL21(DE3),进行原核表达。用此表达产物包被酶标板,建立EUISA诊断方法,并对临床676份送检血清进行了检测,结果表明其总阳性率为62.7%(424/676),仔猪阳性率为38.9%(74/190),肥猪阳性率为63.2%(84/133),母猪阳性率为74.6%(249/334),公猪阳性率为89.5%(17/19)。 相似文献