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为探究无乳链球菌菌毛岛屿3个亚基AP1、AP2、BP融合蛋白的抗原性,本研究根据该3个亚基基因的主要抗原结构域序列设计并合成引物,通过重叠延伸PCR技术获得上述3个亚基的串联核苷酸片段,并插入pET-30a(+)载体,转化至BL21(DE3)感受态细胞后诱导表达,表达蛋白经亲和层析纯化后进行western blot鉴定和小鼠免疫实验。结果表明,AP1-AP2-BP融合抗原具有良好的反应原性和免疫原性。本研究为进一步研究无乳链球菌基于AP1-BP-AP2融合蛋白的致病机制、检测制剂及亚单位疫苗研制提供了实验依据。 相似文献
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<正>保护地蔬菜生产是一项高投入高产出的事业,生产者为获得高产往往超量施入化肥,这就使得每个茬口都有相当数量的盐离子未被蔬菜吸收而残留在耕层土壤中,再加上塑料薄膜的遮雨作用,夏季保护地内的土壤得不到雨水的充分淋洗,灌水的深度仅限于耕层。因此,在蒸发力的作用下,保护地内土壤水分总 相似文献
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套牌品种坑农害农,是农业生产的大敌。监管机构对此一直是不遗余力地进行严厉打击。认真分析套牌品种形成的根源、类型及危害性,有针对性地采取预防管理措施,是消除套牌品种危害的有效方法。为此,笔者对南阳、驻马店、信阳3个地方的种子市场进行了3年的跟踪、查访,对套牌品种的形成根源、表现形式及如何预防和打击有了一点粗浅的认识。 相似文献
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华双5号是由华中农业大学著名油菜育种家吴江生教授采用多品种(系)为亲本,通过单交、复交和聚合杂交,并应用小孢子培养加倍单倍体技术精心选育而成。2004年通过全国审定。特征特性:该品种属半冬性高产、耐肥、抗寒、抗倒,分枝角度小,耐密植,耐迟播,对菌核病、病毒病抗性与中油821相当。全生育期216天左右,株高165cm左右,一次有效分枝数8~12个,分枝部位30cm左右。千粒重3.5g以上,每荚粒数18~22粒,含油量42.28%。一般产量200kg/亩,高产田块可达300kg/亩以上,是集丰产性、稳产性、适应性、抗逆性、早熟、抗倒等优良性状于一体的甘蓝型双低油… 相似文献
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为评价牛乳腺炎无乳链球菌重组表面蛋白(pgk)免疫原性,并通过建立检测抗体的间接ELISA方法对免疫抗体效价进行评价,本研究根据GenBank登录的无乳链球菌pgk基因序列,设计一对引物,以临床分离菌株基因组DNA为模板PCR扩增出pgk蛋白抗原优势区的编码基因序列。将其插入pET-30a(+)中,并在大肠杆菌中表达。Western blot鉴定表明,表达的重组蛋白与阳性血清具有良好的反应原性。采用纯化的表达产物作为包被抗原建立了检测无乳链球菌抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为3.115μg/mL,血清最佳稀释度为1∶160,酶标二抗最适稀释度为1∶4 000。初步应用于检测无乳链球菌、化脓性链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌小鼠阳性血清的检测。结果表明牛乳腺炎无乳链球菌pgk亚单位抗原具有良好的抗原性,抗体检测灵敏度达到1∶4 000,同时表现良好的特异性。 相似文献
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盐胁迫对冬小麦叶过氧化物酶同功酶的影响 总被引:5,自引:0,他引:5
采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳(PAGE)法研究了1g/L NaCl处理对冬小麦叶过氧化物酶(POD)同功酶酶谱的影响,结果表明,对照组A区有1条扩散酶带,处理组A区变为3条,较对照组有明显的变化,对照组B区仅有1条扩散带,盐胁迫后变为2条或1条不清晰的三级带,且发现具有B1酶带冬小麦返青率等5项农艺性状显著高于无此带的品种;有7个供试品种盐胁迫后C1酶带与C3酶带之间的距离较对照组增大,部分品种在盐胁迫后C区的个别酶带颜色加深或变浅,甚至消失。 相似文献
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为了实现多级转速和转矩的输出,轴向柱塞马达必须使用节流阀、减压阀等耗能元件来改变输入压力和流量,但同时降低了效率。新型双斜盘多排式轴向柱塞马达可以利用其结构的特殊性,实现输出转矩的多样性。本文基于双斜盘多排式轴向柱塞马达的结构特点及工作原理,推导了该马达在不同工作方式下的理论瞬时转矩和转矩不均匀系数,并通过Matlab分析了内外马达转矩系数比对转矩不均匀系数的影响,设计了马达的实验液压系统并搭建了实验平台,对马达进行了原理性实验,并进行了数据分析。实验结果表明,在额定压力和额定排量下,该马达能实现多种不同的转速与转矩输出,随着内外马达转矩系数比的增大,低速大转矩的转矩不均匀系数越小,高速低转矩不稳定系数越大,通过合理设计可以实现马达在不同工作状态下的稳定运行,验证了新型马达在结构原理上的可行性,为新型轴向柱塞马达的改进设计提供了实验依据。 相似文献
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利用DNAStar Protean功能筛选AP1和AP2主要抗原结构域,引入15位柔性多肽,通过重叠延伸PCR技术串联融合AP1、AP2主要抗原域基因,PCR扩增串联体基因片段,将其克隆至pET-30a(+)载体,转化BL21(DM3)细胞,进行高效表达,目的蛋白经亲和层析纯化后进行Western blot鉴定。PCR扩增出320bp的AP1和759bp的AP2主要抗原域,经重叠延伸PCR获得了1 065bp的AP1、AP2串联体基因片段,DNA测序结果表明,无碱基的缺失、突变和移码。构建的重组表达载体经诱导能够可溶性表达,目的蛋白相对分子质量大小约46 000,纯化后重组蛋白的纯度96%,Western blot分析重组融合蛋白结果表明,能够被兔源抗无乳链球菌阳性血清所识别。重叠延伸PCR获得了AP1、AP2主要抗原域串联体,构建了pET-30a(+)/AP1+AP2重组表达载体,诱导目的蛋白呈可溶性表达,表达产物具有良好的免疫反应原性,为进一步研究基于AP1、AP2蛋白的致病机制,检测制剂及疫苗奠定了试验基础。 相似文献
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为建立一种快速准确高效的检测奶牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿抗原相应抗体的检测方法,本研究以牛乳腺炎无乳链球菌Ia型PI-2a菌毛岛屿辅助蛋白AP1、AP2及骨架蛋白BP 3基因串联表达的重组蛋白为ELISA包被抗原,通过方阵滴定法优化反应条件,建立了奶牛乳腺炎无乳链球菌抗体的间接ELISA检测方法。优化后抗原的最佳包被量为5.0μg/孔,血清样品最佳稀释倍数为1∶40,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶5 000。对S.agalactiae、S.pyogens、E.coli、S.aureus、S.epidermidis阳性血清进行检测结果显示,后4种阳性对照血清未出现阳性反应,表明该方法具有良好的特异性;对已知牛无乳链球菌阳性血清倍比稀释后进行检测时,当稀释倍数达到1:12 800时仍出现阳性结果,表明该方法具有较高的敏感度;重复性试验显示批内变异系数为2.41%~8.89%,批间试验变异系数为7.53%~10.46%;用该方法对426份临床样品进行奶牛无乳链球菌抗体检测,结果显示,其样品阳性检出率为45.07%。本研究首次基于乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿三联重组蛋白建立的间接ELISA方法为奶牛无乳链球菌的快速检测提供了一种准确、可靠的检测方法。 相似文献