荧光定量PCR中至少应提供的信息(MIQE)

荧光定量PCR也称qPCR(quantitative PCR),是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,然后结合相应的软件对待测样品模板的起始浓度进行定量。目前,人们对实时定量PCR的操作规范和试验结果分析缺乏共识,许多发表的文章中缺乏足够的试验细     

内质网应激偶联炎性反应研究进展

内质网是真核细胞蛋白合成和折叠的主要细胞器,当内质网内蛋白合成或折叠负担增加,引起未折叠或错误折叠蛋白增多时,可激活内质网几条特定信号通路,启动未折叠蛋白反应,这对维持细胞稳态有重要意义。越来越多研究表明,多种炎性反应疾病与内质网应激有密切联系。一方面,内质网应激引起的未折叠蛋白反应可以诱发或者抑制炎症,另一方面,炎性反应也能影响蛋白折叠,从而促进或缓解内质网应激。2型糖尿病、肿瘤和动脉粥样硬化等多种重大疾病的病理机制都涉及内质网应激与炎性反应的相互作用,对该问题的深入研究不仅能加深人们对这些疾病发病机制的理解,也有助于相关药物的研发。     

呼吸道感染牛分枝杆菌对肝脏和肠道影响的病理组织学观察

为了对牛结核分支杆菌引起的牛消化道如肝、肠道的病理变化进行研究。本试验采用滴鼻吸入的方式感染犊牛,七个月后进行剖检和显微镜下的病理组织学观察。结果发现,肝脏可观察到肉芽肿结节,中心为干酪样坏死或者钙化,外周为上皮样细胞和郎罕氏细胞,最外层是淋巴细胞和成纤维细胞;肠道病变不明显,多为局灶性炎性细胞聚集。此次试验可为牛分枝杆菌对消化道的影响提供参考。     

一例猫卵巢恶性颗粒细胞瘤的病理学分析

本文报道猫伴发腹腔种植性转移的卵巢恶性颗粒细胞瘤1例,较为罕见,国内外文献未见报道。1例15岁雌性家猫,因不食和腹围增大就诊。超声检查显示,左肾尾侧可见一大小约4.27 cm×2.63 cm的肿物。开腹探查,可见大网膜、肠壁及胃壁弥散性分布大量大小不等的球形肿物,左侧卵巢明显增大,表面形成坚实或柔软的结节。对肿物进行组织病理学检查,诊断为卵巢恶性颗粒细胞瘤。本文提供该病例临床和组织病理学资料,并回顾相关文献资料,希望对该肿瘤的诊疗和研究提供帮助。     

传染性海绵状脑病污染环境引发的风险

正传染性海绵状脑病(TSEs)又称朊蛋白疾病(Prion diseases),是一组能够感染人和动物的慢性、致死性、神经退行性疾病。目前普遍认为是由体内正常的朊蛋白(PrP~C)错误折叠成具有部分蛋白酶抗性的PrP~(Sc)引起的。该病可引起多种动物与人发病,如人类克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob,CJD)、格氏病(Gerstmann-Scheinker,GSS)、致死性家族失眠症     

实时荧光定量PCR构建奶牛生殖系统PrP基因标准品质粒和标准曲线

为阐释PrP基因在奶牛生殖系统的正常表达和正常的生理功能,以及为确定生殖系统在疯牛病垂直传播中的地位和其分子机理奠定基础,采用实时荧光定量RT-PCR的方法构建了奶牛生殖系统PrP基因的标准质粒和标准曲线。对含有目的基因质粒的EcoRⅠ酶切鉴定表明所插入的片段大小为302 bp,与预期的结果一致。所构建的标准曲线的相关系数r2=0.999,系统生成的回归方程为y=-0.29x 9.48,说明成功构建了奶牛生殖系统PrP基因的标准质粒和标准曲线,为研究PrP基因在奶牛其他组织的定量奠定基础。     

新疆地区牛分枝杆菌29个毒力基因的突变分析

为了解我国新疆地区牛分枝杆菌的毒力基因变异情况并初步评估其毒力变化,利用聚合酶链式反应(PCR)检测临床分离的66株牛分枝杆菌的29个毒力基因,经Sanger测序后与标准株AF2122/97和本实验室保存的两株牛分枝杆菌(M.bovis C68004和M.bovis N)进行序列比对,对基因突变情况进行统计,分析基因突变对其编码蛋白功能和结构的影响。结果表明:1)临床分离株与本实验室保存的高毒力菌株M.bovis N毒力基因突变位点具有很高的相似性,在检测的29个毒力基因中,50%以上临床分离株与M.bovis N共有25个基因序列一致;2)临床分离株广泛存在的Mb2958、Mb2982C和Mb1553C基因突变PROVEAN评分均低于-2.5,可能改变其编码的酶催化活性,进而影响细胞壁脂类合成;3)Mb0607、Mb0609、Mb0606、Mb2979C和Mb1214基因突变分别造成哺乳动物细胞入侵蛋白、甲基转移酶和酰基转移酶蛋白二级结构改变,或许对细菌的胞内生存产生影响。综上,本研究筛选出8个关键毒力基因,这些基因的突变可能在新疆地区牛分枝杆菌流行菌株的毒力变化中发挥重要作用;同时,本研究揭示了关键毒力基因的突变特征,为进一步研究牛分枝杆菌遗传多样性及进化规律奠定了基础。     

东北虎朊病毒基因的克隆与序列分析

根据已报道的哺乳动物朊病毒基因序列设计引物，采用PCR方法扩增了25只东北虎的朊病毒基因，克隆、测序及序列分析表明，所得到的东北虎朊病毒基因片段为402bp，编码134个氨基酸的前体蛋白，核苷酸序列同源性为99．67％。共发现了4个核苷酸多态性（T423C，A501G，C511A，A610G），其中C511A和A610G的碱基突变导致K171Q和A204T氨基酸的变异。与已报道的猫、貂、绵羊、鼠和犬等哺乳动物的氨基酸序列比较，结果与猫（AF003087，97．3％）和绵羊（97．3％）的氨基酸同源性最高。     

牛分枝杆菌MPB83基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

为观察重组MPB83蛋白的免疫活性,揭示该蛋白在牛结核病的诊断和防治中的作用,克隆了牛分枝杆菌MPB83基因,构建了克隆载体pGEM-MPB83和表达载体pET30a-MPB83,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并进行蛋白纯化。试验结果表明:牛分枝杆菌MPB83基因体外扩增产物与预期值相符,约600 bp;所构建表达质粒pET30a-MPB83经测序,结果与预期一致;SDS-PAGE分析表明,该融合蛋白以包涵体的形式表达,其分子质量约为26 ku,蛋白表达量占菌体总蛋白的20%;该蛋白经电洗脱纯化后,纯度达95%以上;免疫印迹分析表明,原核表达的融合蛋白可与兔抗牛分枝杆菌多克隆抗体结合,并且具特异的免疫反应性。