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利用单根肌纤维法分离和培养猪骨骼肌卫星细胞及其成肌诱导分化 总被引:1,自引:0,他引:1
建立单根肌纤维法体外培养猪骨骼肌卫星细胞的体系,了解其增殖和成肌特性。通过Ⅰ型胶原酶消化,从猪骨骼肌中分离完整的单根肌纤维并培养,用细胞免疫荧光鉴定肌纤维上的卫星细胞,随后对从单根肌纤维上游离出来的卫星细胞进行细胞免疫荧光染色,传代培养,成肌诱导分化和Western blot分析骨骼肌卫星细胞成肌特异性蛋白的表达。结果显示:分离并培养的单根肌纤维上附着有卵圆形的细胞,并随时间的推移,细胞缓慢向外迁移并增殖,卫星细胞特异性标志基因对盒转录因子(Paired protein box,Pax7)和成肌分化抗原(Myogenic Differentiation Antigen,MyoD)免疫荧光染色呈阳性,且阳性率达到90%以上。成肌诱导分化后,细胞开始汇合,并呈方向性生长,最终形成多核肌管,且成肌特异性标志基因Myogenin和myosin heavy chain(MyHC)表达呈阳性。MyoD蛋白高表达于增殖期,而Myogenin和MyHC在进入分化期才表达。该实验成功建立了猪骨骼肌单根肌纤维的体外培养方法并获得了高纯度的卫星细胞,为骨骼肌卫星细胞进行活体移植治疗相关疾病研究提供了实验材料。 相似文献
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将猪亚利桑那菌培养后离心、冷冻,以小白鼠为试验动物进行细菌毒素鉴定,结果确定猪亚利桑那菌仅有内毒素;用鲎试剂测得其细菌内毒素含量大约为0.125 EU/mL。取10只健康小白鼠观察猪亚利桑那菌对动物的致病性。小白鼠临床症状明显,眼内有脓性分泌物;病理组织切片结果发现,肝细胞界限不清,胞核大小差异较大;脾脏内有大面积出血区;肾小管上皮细胞肿胀,部分胞核消失;心肌纤维肿胀、断裂;由此可见猪亚利桑那菌对小白鼠有很强的致病性。 相似文献
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【目的】探讨猪脂肪甘油三酯水解酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)基因在脂肪细胞脂解中的作用。【方法】构建针对猪ATGL基因CDS区113和1 358位点的慢病毒干扰载体,包装后用其感染猪成熟脂肪细胞,检测ATGL和激素敏感脂酶(hormone-sensitive lipase,HSL)基因mRNA及其蛋白的表达情况;用甘油试剂盒检测细胞甘油释放量。【结果】成功构建了ATGL基因的慢病毒干扰载体,用其感染猪成熟脂肪细胞后,RT-PCR分析和Western印迹检测结果表明,试验组脂肪细胞ATGL的表达显著下调,HSL的表达没有明显变化;甘油释放量显著降低,其中针对ATGL基因CDS区113位点的siRNA1对ATGL mRNA的干扰效率达55%,甘油释放量降低了49%。【结论】成功构建了猪ATGL基因慢病毒干扰载体,其能显著降低ATGL基因mRNA及其蛋白在猪成熟脂肪细胞中的表达,降低脂肪细胞的甘油释放量,表明ATGL在猪脂肪细胞脂解中有着重要作用,且113位点是ATGL基因CDS区的最佳干扰靶位点。 相似文献
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应用32、50、68周龄褐壳来杭型蛋鸡(1965年以来没有选育),ISA褐壳蛋鸡(商品褐壳蛋鸡)和巴布考克B-300蛋鸡(商品白壳蛋鸡)的鸡蛋共2123枚,研究了蛋白质量的测定值与蛋白功能特性之间的关系。样本为储存了5天、10天后的新鲜鸡蛋。将鸡蛋称重、打开,测定蛋白高度、pH值和搅拌80秒钟后的体积。此外,将蛋黄和烘干的蛋壳称重,蛋重减去蛋黄重和蛋壳重即为蛋白重。随着鸡龄增长,蛋重和鸡蛋3个主要组成部分的重量增加,并且蛋黄有成比例的更大增加。随着储存时间延长,蛋重和蛋白重减少,而蛋黄重则增加。褐壳来杭母鸡的蛋最小,但其蛋黄的比例最大。随储存时间延长,蛋白高度减小,蛋白pH值和蛋的搅拌后体积增加。各品系鸡之间的差异表明,通过选育,改变了蛋黄、蛋白和蛋壳的比例,增加了蛋白的高度。蛋白高度和搅拌后体积呈负相关。此外,各品系间的差异表明,通过选育可能还已降低了蛋白的发泡能力.而蛋白的发泡能力是将鸡蛋加入到许多种加工食品中的主要理由。 相似文献
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为探讨不同性别对关中黑猪生长性能、血液指标及宰前应激的影响,选取10头体重(6.34±0.14)kg的关中黑猪,公母各半,进行分栏饲养,公猪在7日龄去势。分阶段对关中黑猪的体尺进行测量,并在屠宰时采集其血液,对其血液常规指标和应激指标进行检测。结果显示,关中黑猪去势公猪体重自5月龄起显著高于母猪(P0.05),体长在2月龄和8月龄显著高于母猪(P0.05),体高和腿臀围在2月龄和6月龄显著高于母猪(P0.05),胸围自6月龄起显著高于母猪(P0.05)。关中黑猪的血液生化指标在性别间无显著影响(P0.05)。关中黑猪去势公猪血液中肌酸激酶含量显著低于母猪(P0.05),并且检测到血液中乳酸含量也有同样趋势。综合考虑得出,关中黑猪去势公猪的生长性能及抗应激性能优于母猪。 相似文献