融合蛋白Rv3872/CFP-10/ESAT-6的制备及在牛结核诊断中的初步应用

本研究通过融合表达Rv3872、CFP-10和ESAT-6蛋白,以改良牛结核病特异性鉴别诊断抗原CFP-10-ESAT-6,提高牛结核抗体鉴别诊断法的灵敏度。利用PCR方法,克隆牛分枝杆菌RD1区上述三个基因,通过酶切连接方法,将三个基因串联在pET-28a载体上,基因之间用Linker序列连接。融合基因在大肠杆菌内经IPTG0.4mmol/L诱导3h,目的蛋白经SDS-PAGE证实表达在上清中,Western-blot分析证实表达蛋白具有免疫原性。以所表达的融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA,检测了44份牛分枝杆菌感染背景清楚的临床奶牛血清。26份阳性血清中,Rv3872-CFP-10-ESAT-6融合蛋白ELISA检出阳性样本18份,检测灵敏度为69%,而CFP-10-ESAT-6融合蛋白ELISA只检出阳性样本4份。18份阴性血清中,两种ELISA均检出17份阴性血清,特异性都为94%（17/18）。因此,Rv3872-CFP-10-ESAT-6融合蛋白在对牛结核抗体检测特异性没有降低的情况下,敏感性获得了显著提高,这对牛结核病的早期鉴别诊断方法的建立具有重要意义。     

吊瓜的高产栽培技术

<正>吊瓜是我国传统的中药材,农学上又名栝楼、天瓜。吊瓜具有抗菌和抗癌作用,由于其富含大量的不饱和脂肪酸、脂溶性维生素和微量元素,不仅可以用于冠心病、心绞痛、支气管炎、乳腺炎和便秘等疾病的治疗,还可降低胆固醇,用于肝炎和糖尿病的治疗。现将其生长习性及高产栽培技术总结如下。1吊瓜的生长习性吊瓜有较好的耐寒性,但是不耐干旱,也怕水涝,喜欢温暖湿润的环境。18~32℃的环境最适宜吊瓜生长,当温度     

大蒜双膜覆盖高产栽培技术

<正>秋播大蒜采用双层地膜覆盖栽培技术具有提高产量,提早上市,增加效益的作用。特别是采用双膜覆盖栽培模式,与单膜覆盖能增加效益20%左右。下面,介绍一下有关的栽培技术要点。一、选择优良品种选择丰产性好、抗病力强的白皮类大蒜品种。如山东冠县大蒜,这是山东省的一个优良地方大蒜品种,也是一个重要的出口品种,每个蒜头有7-8瓣,外皮稍带紫红色,皮薄,蒜瓣肥大,辣味浓,品质好,属于有薹种。生长健壮,耐寒性强,抽薹率高,耐贮     

梅花鹿γ 干扰素在不同真核细胞系中稳定表达的研究

提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT PCR方法扩增出梅花鹿γ 干扰素成熟蛋白基因,经克隆测序表明与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到含有CMV增强子的真核表达载体质粒pCI neo上。利用磷酸钙介导转染法将重组载体质粒pCI neo CerIFN γ转染入中国仓鼠肾细胞(BHK 21)和牛肾细胞（MDBK）中,在G418抗性压力下进行筛选培养获得了稳定分泌表达的转染细胞系。通过Western blotting检测确定表达产物的相对分子质量分别为23、20、16 ku,与预测大小一致。本研究成果为进一步开发梅花鹿生物制品类治疗制剂奠定了基础。     

梅花鹿γ干扰素克隆表达及抗病毒活性测定

提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ干扰素成熟蛋白基因并将其克隆到pMD18-T载体上,测序结果表明,扩增片段为梅花鹿γ干扰素成熟蛋白序列,与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%.将其重组到原核表达载体pET32a(+)上,并在大肠埃希菌BL21中实现了高效表达.表达产物以His-Tag融合蛋白的形式存在,表达量约占细菌总蛋白的32.6%.用镍亲和层析法对蛋白进行纯化,并利用VSV-MDBK/IBRV细胞系统分析其生物活性,重组梅花鹿γ干扰素抗病毒活性分别约为7.25×104 U/mL和4.61×104 U/mL.结果表明,重组梅花鹿γ干扰素特异性好,而且抗病毒活性比较稳定.     

梅花鹿γ-干扰素在不同真核细胞系中稳定表达的研究

提取经植物血凝素诱导培养的梅花鹿外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出梅花鹿γ-干扰素成熟蛋白基因,经克隆测序表明与GenBank上发表的干扰素序列同源性为100%。将其重组到含有CMV增强子的真核表达载体质粒pCI-neo上。利用磷酸钙介导转染法将重组载体质粒pCI-neo-CerIFN-γ转染入中国仓鼠肾细胞(BHK-21)和牛肾细胞(MDBK)中,在G418抗性压力下进行筛选培养获得了稳定分泌表达的转染细胞系。通过Western blotting检测确定表达产物的相对分子质量分别为23、20、16ku,与预测大小一致。本研究成果为进一步开发梅花鹿生物制品类治疗制剂奠定了基础。     

水稻超高产强化栽培技术

<正>一、技术特点与传统高产栽培技术比较,水稻超高产强化栽培技术体系有以下特点。1、嫩秧早栽。强化栽培技术在冬闲田或冬水田可移栽2―3叶龄的秧苗,在两季田可移栽3―5叶龄的秧苗,与传统技术相比,移栽秧苗减少2―4片叶,有利于早?生快发,提高分蘖成穗率。2、稀植壮株。强化栽培技术本田稀植,每亩栽插6000―9000穴,比传统技术少栽5000―7000穴,有利于分蘖的发生和单株生长,形成有利于高产的群体结构,促进穗大粒多。     

基于结核菌素与CFP10／ESAT6的牛IFN-γ检测法在牛结核病诊断中的比较研究

本研究通过比较三种刺激物（牛结核菌素、禽结核菌素和牛型结核菌特异性抗原CFP10／ESAT6对结核菌素皮内变态反应阳性牛的IFN-γ刺激反应,探讨IFN-γ检测法在我国牛结核病诊断中的应用前景。无菌采集22头结核菌素皮内变态反应阳性牛的血液．肝素抗凝。每1mL全血与1mL RPMI1640完全培养基混合均匀,并加入0.1mL（20μg）PHA（阳性对照孔）、0．1mL（20μg PHA）CFP10／ESAT6融合蛋白、0．1mL（2000U）＆结核菌素（PPD／B）、0．1mL（2500u）禽结核菌素（PPD／A）或等量PBS（无刺激阴性对照）,37℃培养过夜。次日用夹心ELISA法检测各刺激组0．1mL培养上清的IFN-γ,以OD630表示IFN-γ浓度。结果,特异性抗原CFP10／ESAT6刺激组与牛结核菌素（PPD／B）刺激组的IFN-γ反应具有良好的相关性．相关系数为0．84。但CFP10／ESAT6刺激组IFN-γ浓度与牛和禽PPD的比较反应（以两刺激组IFN-γ浓度差值表示）间无相关性,相关系数为-0．11。分析禽PPD组的IFN-γ反应,发现实验牛中有少数牛对禽PPD有反应。以OD630=0．17为阳性反应切割值,牛PPD检出阳性牛21头,CFP10／ESAT6检出20头,牛和禽PPD比较反应（以OD值差值表示）检出14头,禽PPD阳性反应3头。扣除禽PPD阳性反应牛后,牛和禽PPD比较反应与牛PPD刺激组的相关系数增至0．54。结果表明,牛PPD的IFN-γ释放反应检测灵敏度最高。当出现牛型结核菌与环境分枝杆菌混合感染时．应用牛和禽PPD比较反应检测牛结核的准确度低,混合感染牛被误判为结核阴性牛。而基于CFP10／ESAT6的IFN-γ释放反应不受环境分枝杆菌的影响,检测具有良好的特异性与敏感性。