2株乳酸菌对小鼠血清中IgG及IgA含量影响的研究

本试验以2株乳酸菌（LJ2和LZ1）按不同剂量分别对小鼠连续灌服30 d,在10、20、30 d检测各组小鼠血清中IgG和IgA的含量。结果表明,灌服不同剂量的LJ2和LZ1菌液均能提高小鼠血清中IgG、IgA含量,且随灌服时间的不断增加,低、中剂量组有超过高剂量组的趋势。整体上看,灌服LZ1菌液对提高血清中IgG、IgA含量的效果优于LJ2菌液,其中LZ1的低剂量组对于提高机体免疫力效果最好,中、高剂量组次之,最后是低剂量LJ2。     

尼龙袋法和改良体外三步法评定瘤胃保护性赖氨酸的瘤胃降解率及小肠消化率

本试验旨在利用尼龙袋法和改良体外三步法评定脂肪粉包被赖氨酸（Lys）的瘤胃降解率及小肠消化率。选用3只安装有永久性瘤胃瘘管的体重为（28.0±2.97）kg的5月龄哈萨克公羊,代谢笼内单笼饲养,每天饲喂棉籽壳200 g、精料500 g、小麦秸400～500 g,余料不超过10%。结果表明,该脂肪粉包被赖氨酸的干物质（DM）及粗蛋白质（CP）在瘤胃内的有效降解率均为20%,瘤胃保护率达到80%。经胃蛋白酶和胰酶培养24 h后,DM及CP的消化率分别达到63.6%和98.8%。综上所述,该脂肪粉包被赖氨酸可作为一种新型有效的反刍动物氨基酸补充形式。     

蝴蝶兰幼嫩花梗组织培养和快速繁殖

以蝴蝶兰(Phalaenopsis amabilis)幼嫩花梗获得的无菌苗的茎尖为外植体,通过在MS和1/2 MS培养基中加入不同质量浓度的6-BA、NAA、TDZ和2,4-D来筛选最佳培养基配方,从而初步建立蝴蝶兰的组织培养再生体系.结果表明,花梗用0.1%升汞消毒15 min效果最好.花梗腋芽启动培养基为1/2 M...     

仔猪胰腺细胞体外培养体系的建立

为了研究体外培养仔猪胰腺细胞的适宜条件,试验选取1日龄的仔猪胰腺组织置于冰上清洗、修剪,对消化酶、离心方式、培养皿铺被方式、培养液及添加不同促生长因子等多种因素进行筛选和优化。结果表明:0.25%胰酶消化所获得的细胞强于0.1%胶原酶消化获得的细胞,细胞清亮,易于生长;采用500 r/min离心5 min、多次离心所获得的细胞较Percoll不连续密度梯度离心和5%BSA等密度梯度离心所获得的细胞贴壁率高,生长能力强,易于培养传代;采用0.1%明胶或20μg/mL的层黏连蛋白铺被培养皿均比无铺被的培养皿获得更多的贴壁细胞;以RPMI 1640、M199、F12、L-DMEM多种培养液培养仔猪胰腺细胞,表现出多种细胞形态和生长趋势;在基础培养液中添加上皮生长因子、角质化生长因子、β-巯基乙醇和白血病细胞抑制因子、转铁蛋白与亚硒酸盐混合试剂等促干细胞增殖因子可促进不同形态细胞的增殖。说明按此方式培养可获得大量、多种细胞形态的仔猪胰腺祖/干细胞。     

家蚕耐氟近等基因系SSH文库的构建及部分差异表达基因的分析

为了获取与家蚕耐氟性状相关的基因信息,利用家蚕耐氟品种T6和氟化物敏感品种733新建立耐氟近等基因系,以回交11代的家蚕耐氟近等基因系群体中的耐氟个体和敏感个体的中肠为材料,构建家蚕耐氟近等基因系抑制消减杂交(SSH)cDNA文库。通过对抑制消减杂交cDNA文库中随机挑选的153个阳性克隆测序和聚类拼接,得到19个重叠群(con-tig)、47个已知功能基因(un igene)和28个未知功能基因。获得的表达序列标签(EST)经BLASTx比对和同源性分析,初步发现这些基因参与家蚕体内物质转运、能量代谢、基因转录、蛋白质合成与降解、蛋白质加工、信号转导、机体免疫防御、细胞结构形成等诸多生物学过程。采用实时定量RT-PCR方法,对部分基因在家蚕耐氟近等基因系群体中的耐氟个体和敏感个体的不同组织的表达进行定量分析,发现磷酸根离子转运蛋白基因、三磷酸腺苷(ATP)合成酶基因、液胞型H+-ATP酶基因、脂肪酶基因以及主要过敏原蛋白基因在耐氟个体的中肠、马氏管、脂肪体组织中的表达量有较明显上调。     

鲤春病毒血症病毒单克隆抗体制备及鉴定

为制备鲤春病毒血症病毒(SVCV)单克隆抗体(MAb),本研究用纯化的SVCV免疫BALB/c鼠,通过杂交瘤细胞技术,制备2株抗SVCV的MAb,分别命名为2A3和3H7。经间接ELISA检测腹水效价为1:10240和1:12150。亚类鉴定证实,这2株亚类均为IgG1型。经非竞争酶免疫试验测定2A3和3H7的抗体亲和力常数分别为4.86×108L/mol和1.86×109L/mol,3H7相对亲和力高于2A3。MAb 2A3和3H7的饱和度均为1:400,叠加试验所得增值指数为63.2%,大于50%。抗体反应增值结果表明:两株MAb分别针对不同抗原位点。免疫印迹分析检测表明,两株纯化的MAb均可与SVCV抗原发生特异反应。     

PRRSV河北地方分离株ORF5基因序列分析

为了分析河北秦皇岛和唐山部分地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因变异情况,对采集自秦唐部分地区在2009年的临床发病猪肺组织,提取其RNA,通过RT-PCR扩增样本中PRRSV的ORF5全序列,并对其进行生物信息学分析.应用DNA Star软件分析序列,系统进化分析表明,它们与国内2006年-20...     

脾酪氨酸激酶参与酿酒酵母甘露聚糖诱导绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)的表达

为了探索脾酪氨酸激酶(Syk)是否参与酿酒酵母甘露聚糖(S.c M)诱导绵羊瘤胃上皮细胞(ORECs)β-防御素-1(SBD-1)表达的过程,首先利用免疫组化、RT-PCR和免疫荧光等方法检测Syk在ORECs内的表达情况;然后采用qPCR和Western blot方法检测S.c M刺激ORECs后Syk的表达变化,同时用Western blot方法检测Syk的磷酸化水平;接着用3条Syk特异性siRNAs(#1、#2和#3)转染ORECs 24 h后,qPCR检测Syk mRNA的表达变化,筛选出干扰效果最佳的Syk siRNA;最后用效果最佳的siRNA和Syk特异性抑制剂R406分别处理ORECs后,采用qPCR和ELISA检测SBD-1的表达变化,以确定Syk在S.c M诱导SBD-1表达过程中的作用。结果显示:Syk在ORECs内表达;且S.c M刺激ORECs后Syk的mRNA和蛋白表达水平显著高于未刺激组(P<0.01或P<0.05),S.c M刺激ORECs不同时间(5、15、30、45和60 min)均能使Syk发生磷酸化,且刺激15 min后磷酸化水平达到最大(P<0.01);此外,Syk的3条特异性siRNAs转染ORECs后Syk的表达均降低,且Syk siRNA#2的抑制效果最明显(P<0.01);同时Syk siRNA#2和R406均能极显著降低S.c M诱导ORECs SBD-1的表达(P<0.01)。上述结果表明,Syk参与S.c M诱导ORECs SBD-1的表达。     

PRRSV GP5蛋白在杆状病毒表达系统中的表达

参照包含猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV) VR2332株完整ORF5基因的载体pMD18T-ORF5的核酸序列设计引物,扩增全长的PRRSV ORF5基因片段,同时以SOE-PCR技术扩增缺失信号肽和跨膜区的ORF5核酸片段ORF5NC,分别克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBac-HTA,获得重组转移载体pFastBacHTA-ORF5及截短表达的重组转移载体pFastBacHTA-ORF5NC。将供体质粒分别转化DH10Bac细胞,获得重组穿梭质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,在Sf9细胞中分别成功表达了全长的GP5重组蛋白和缺失信号肽、跨膜区的截短GP5重组蛋白。2种重组蛋白经纯化后,免疫小鼠制备抗血清,ELISA方法检测免疫GP5全长和截短重组蛋白的小鼠血清中抗体滴度分别为1∶800和1∶1 600,表明重组蛋白具有良好的免疫原性。本试验为进一步分析重组蛋白诱导中和抗体产生的能力以及为PRRSV基因工程亚单位疫苗的研究奠定基础。     

退化高寒草甸优势植物根际与非根际土壤养分及微生物量的分布特征

根际是一类特殊的微生态系统,对研究土壤与植物群落间的相互作用具有重要意义。本研究旨在探讨高寒草甸退化过程中根际与非根际土壤的养分和微生物量分布特征,以及优势植物根际养分富集的相关性和差异性。结果表明：不同退化程度条件下,根际土壤中微生物量碳、氮、磷和养分含量显著高于非根际土壤（P<0.05）,且随退化程度加剧呈逐渐下降趋势;随高寒草甸退化程度的加剧,根际微生物量的碳、氮、磷和养分均出现富集效应,其富集率表现为重度退化草地 > 中度退化草地 > 轻度退化草地 > 未退化草地;由相关分析可知,根际与非根际土壤中微生物量碳和微生物量氮与全磷、全氮和有机碳之间均呈极显著正相关关系（P<0.01）。综上所述,草地退化过程中土壤的有效养分和微生物量在植物根际存在富集和活化现象,这对于人们进一步认识和调控根际的养分循环具有重要意义。