紫茎泽兰处理鸡柔嫩艾美耳球虫后差异基因筛选和分析

为获得紫茎泽兰处理鸡柔嫩艾美耳球虫后差异基因,将0.5%紫茎泽兰提取液作用于鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊孢子化过程,采用抑制消减杂交技术（SSH）筛选处理后卵囊的差异表达基因,通过GO和COG功能预测分析,并采用实时荧光定量PCR验证差异表达的基因。结果显示,采用SSH成功构建了紫茎泽兰处理前后鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊的cDNA消减文库,获得86条ESTs序列,经拼接和聚类后得到31条独立基因（Unigenes）,其中有23个基因有功能注释,8个基因没有功能注释,另外有4个基因没有同源性匹配。为进一步验证文库的特异性,从中随机选取3个差异表达基因,运用实时荧光定量PCR技术验证表面抗原13、3-羟酰辅酶A脱氢酶和细胞色素P450基因在紫茎泽兰处理前后的表达差异,结果显示,3个基因在经紫茎泽兰处理的鸡球虫孢子化卵囊中的表达量明显低于未处理组,说明紫茎泽兰对柔嫩艾美耳球虫卵囊具有一定的活性抑制作用。本试验获取了紫茎泽兰作用柔嫩艾美耳球虫卵囊的主要调控基因,为将紫茎泽兰研发成环境杀虫剂奠定了良好的理论基础,也可为球虫致弱疫苗或基因缺失疫苗的靶标筛选研究提供参考。     

鸡TRAF6和TIFA蛋白的序列分析与相互作用验证

旨在对鸡肿瘤坏死因子受体相关因子6（tumor necrosis factor（TNF）receptor-associated factor 6,TRAF6）和肿瘤坏死因子受体相关因子相互作用的具有叉形头相关结构域蛋白（TNF receptor associated factor（TRAF）-interacting protein with a forkhead-associated（FHA）domain,TIFA）进行序列分析,并进行蛋白质相互作用验证。本研究首先以鸡胚成纤维细胞提取的总RNA反转录产物为模板扩增鸡TRAF6和TIFA基因的CDS区,分别构建重组真核表达载体pCMV-HA-TRAF6和pEGFP-C1-TIFA;运用生物信息学软件ProtParam、SOPMA、SWISS-MODEL、MegAlign和PSORTⅡ分别对鸡TRAF6和TIFA蛋白理化性质、二级和三级结构、氨基酸同源性、功能结构域保守性和亚细胞定位进行分析。将重组真核表达载体共转染细胞,通过荧光共定位和免疫共沉淀（Co-IP）试验验证鸡TRAF6和TIFA蛋白之间的相互作用。结果,成功扩增鸡TRAF6和TIFA基因,并构建其重组真核表达载体pCMV-HA-TRAF6和pEGFP-C1-TIFA。序列分析结果显示,鸡TRAF6和TIFA基因CDS区分别为1 638和564 bp,共编码545和187个氨基酸,分子量约为62和22 ku。蛋白质二级和三级结构分析结果表明,鸡TRAF6和TIFA蛋白均以无规则卷曲和α螺旋为主。氨基酸同源性分析结果发现,鸡与人和其他哺乳动物TRAF6和TIFA蛋白的同源性分别为76.4%~80.3%和49.7%~53.3%,而与非洲爪蟾的同源性分别为69.4%和49.7%,并且鸡TRAF6和TIFA蛋白的功能结构域存在多个氨基酸位点变异。亚细胞定位预测结果表明,鸡TRAF6和TIFA蛋白主要定位在细胞核。荧光共定位和Co-IP试验结果显示,鸡TRAF6和TIFA蛋白在细胞核中具有共定位,并且存在相互作用。本研究结果显示,鸡与人和其他哺乳动物以及非洲爪蟾TRAF6和TIFA蛋白的同源性及功能结构域保守性均较低,但鸡TRAF6和TIFA蛋白能在细胞核中发生相互作用,这可为进一步研究鸡TRAF6和TIFA蛋白相互作用调控鸡相关病毒复制的作用机制奠定基础。     

转录因子Prm1和Mit1对毕赤酵母产外源蛋白的影响

【目的】研究转录因子Prm1和Mit1在毕赤酵母表达外源蛋白中的作用,为提高毕赤酵母中的外源蛋白产量提供参考。【方法】以毕赤酵母GS115为出发菌构建8种菌株,以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,过表达Prm1、Mit1或敲除Prm1、Mit1和Mxr1,以GFP的表达量为指标,分析其对毕赤酵母产外源蛋白的影响。在甲醇和甘油2种碳源下,利用实时定量PCR分析Prm1和Mit1在转录水平的表达情况,探究Prm1和Mit1的关系。【结果】成功构建了表达GFP的菌株、单因子过表达Prm1和Mit1的菌株及敲除Prm1、Mit1、Mxr1的菌株等8种菌株。利用P_AOX1诱导型过表达Prm1,毕赤酵母细胞内的GFP表达量极显著提高(P<0.01),而用P_GAP组成型过表达Prm1,GFP的表达量无明显变化;利用P_AOX1诱导型和P_GAP组成型过表达Mit1,GFP表达量均极显著提高(P<0.01),较对照分别提高3.2和2.5倍;敲除Prm1后,GFP的表达量显著下降(P<0.05);敲除M...     

PPARβ与哺乳动物生殖的关系

PPARβ是过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)核受体家族中的一员,在体内广泛表达于与脂类代谢有关的组织中。最近的研究发现,PPARβ除了参与脂肪细胞的增殖与分化外,还通过参与胚胎着床及其蜕膜化等过程来影响胚胎的发育。     

"二年种子"休眠与萌发的研究

对山楂、圆柏、蔷薇属、秤锤树、膀胱果、棱角山矾、大果冬青、大叶冬青、银钟花、青钱柳、长柄双花木10个种并1个属"二年种子"进行研究,对比分析破除"二年种子"的机械休眠和生理休眠的方法,总结生产中酸蚀和裂口处理种壳的操作程序,明确控制层积处理时间和条件的重要性.在上述研究基础上,重点展开对"二年种子"中濒危树种特性的研究.测试结果表明:"二年种子"的萌发性状既是其延续种性的一种遗传表现,也是在现今世界环境条件下,导致植物濒危的重要因素之一.研究结果表明,"二年种子"经酸蚀一裂口处理种壳后,层积时间可以由二冬一夏转为经一冬(4个月左右)层积后在春天正常萌发.     

大樱桃壮旺幼树不同修剪方法和促花技术试验

为了研究整形修剪对大樱桃早期丰产的影响,通过稀植园和密植园大樱桃壮旺幼树的修剪试验,明确长放修剪方法可节省用工,有利于树体生育,成花早、株产高,尤其适用于密植园的大樱桃栽培。开始采用长放修剪的树龄,密植园大樱桃树宜在2～3年生,稀植园樱桃树宜在株问粗距1．5～2m时进行,截放修剪方法适用于即需扩冠又要较早结果的大樱桃壮旺幼树。短截修剪方法修剪量大,不利于大樱桃壮旺幼树的生长发育,结果晚,株产低,且费工,但对栽后缓苗期树或衰弱树还是适用的。刻芽枝条上叶丛皲数量明显增加,花束状果枝增加。摘心的长枝花枝率和后下部叶丛枝的花枝率明显增加。     

温度对烟草黑胫病菌致病力及代谢表型的影响

为揭示温度对烟草黑胫病菌Phytophthora nicotianae致病力及代谢表型的影响,采用菌丝生长速率法和离体叶片法分别测定不同温度下烟草黑胫病菌的生长速率和致病力,同时采用Biolog代谢表型技术测定其在20、27、30和35℃下的渗透压和pH代谢表型。结果表明,烟草黑胫病菌在21~35℃范围内生长良好且具致病力,30℃时生长速率最快,为17.72 mm/d,30℃和35℃时致病力较强,叶片接种烟草黑胫病菌后24 h内便出现病斑,随温度升高病害的潜伏期缩短。温度影响烟草黑胫病菌的渗透压和pH适应性;27℃和30℃时烟草黑胫病菌的渗透压适应范围最广,其次为21℃,35℃时烟草黑胫病菌渗透压适应范围最窄;在20、27和30℃时,烟草黑胫病菌在pH 5.0~10.0范围内可正常代谢,在35℃时pH代谢范围为5.5~10.0。     

3类功能助剂对酥梨的安全性及其对重要害虫防效的影响

为明确3类不同功能助剂在酥梨园的安全使用技术及其对梨园重要害虫防效的影响,在田间梨树不同发育期,调查3类、共6种功能助剂对果实和叶片的药害率;调查3种安全助剂与4种农药混配后对梨小食心虫和梨木虱的防效.结果表明,6种功能助剂对梨果药害率从高到低依次为15 d幼果、45 d小果和75 d膨大期果实;6种助剂对叶片均安全....     

超声辅助双水相集成提取芒果核多酚工艺优化（英）

为了获得超声辅助双水相集成提取芒果核多酚的最佳条件,该文提出一种超声提取与丙醇-硫酸铵双水相分离体系集成提取芒果核多酚的新方法,利用5水平4因素的星点设计响应面方法研究提取条件对芒果核总多酚提取率的影响。当超声功率为400W、初始温度为45℃,获得的最佳条件是59.7%丙醇浓度,23.4%硫酸铵用量,27.3min超声提取时间和23.0mL/g的液固比,在该条件下,芒果核多酚提取率为6.67%,试验值与最佳预测值(6.82%)相符,超声辅助双水相集成法获得的提取物多酚含量高于常规超声提取法。试验结果说明利用超声辅助双水相集成的方法改善多酚提取是可行性。该研究可为芒果核的利用和植物多酚的提取技术提供参考。     

生物钾肥的增产作用及对土壤钾平衡的影响

生物钾肥是指具有高钾低氮磷养分组成的植物的绿色体或秸杆。生物钾肥作用的实质是:植物不断吸收并活化土壤钾,富集土壤和水体中钾,通过以绿色体或秸秆形式归还,促进土壤钾的良性循环和再利用。生物钾肥中钾的溶解度和利用率都较高,其供钾性能类似矿质钾肥。在等钾量下,各种生物钾肥的增产效果和矿质钾肥接近。