DNA Barcoding:An Effective Tool for Species Identification of Lepidopteran Oak Pests

[Objective] The paper was to improve the efficiency and accuracy of early forecast of Lepidopteran oak-infesting pests.[Method] DNA barcoding technique was established for quick species identification using mitochondrial cytochrome C oxidase subunit Ⅰ(COⅠ) as the standard gene.This barcoding technique was used to amplify and sequence genomic DNA samples from eggs and pupae of 11 species of Lepidopteran pests collected from oak.[Result] The DNA barcoding standard genes of 594-708 bp were determined from eggs and pupae of Lepidopteran insects.There were differences of 0-2 bases in DNA barcode sequences between conspecific eggs and pupae,with the sequence identity of 99.7%-100%.The average content of A,T,G and C of DNA barcode sequences from Lepidopteran insects were 30.7%,38.5%,14.9% and 15.9%,respectively.The obtained DNA barcode sequences had 91.4%-100% identity and 0-8.6% difference degree with GenBank-deposited DNA barcode sequences from organisms of the genetically-closest relationship.Among them,DNA barcode sequences from egg and pupa samples of 10 Lepidopteran insects(No.1-20) had 99%-100% identity and 0-1.0% difference degree with homologous sequences in GenBank database,while the remaining samples(No.21-22) had high difference degree(8.6%) with homologous sequences.[Conclusion] The established DNA barcoding technique is an effeetive tool for species identification of Lepidopteran pests using genomic DNA from eggs and pupae of Lepidopteran insects.     

鸭绿江茴鱼人工繁殖技术的研究

鸭绿江茴鱼目前已经濒临绝迹,为保护这一濒危物种,并扩大其种群数量,根据该鱼的生物学特性,对鸭绿江茴鱼亲鱼的驯化方法,性成熟年龄,繁殖季节,人工授精方法,孵化方法,鱼苗培育,饵料投喂等进行了研究。结果表明:鸭绿江茴鱼性成熟年龄为2龄;产卵期在4月中旬至5月末;卵在水温8℃经17 d左右,累积温度达135度日开始发眼;25 d左右,累积温度达200度日开始破膜;32 d左右,累积温度达250度日开始上浮;经36 d左右,累积温度达290度日开始驯化摄食;开口摄食时投喂适合鱼苗吞咽的活饵料(小型枝角类、桡足类);1个月后体长达2.5 cm时,投喂大型枝角类、桡足类和适合摄食的鸡蛋羹。研究结果显示,鸭绿江茴鱼可以通过人工手段进行繁殖。     

高龄大熊猫多器官衰竭的病理学观察

本文观察了1只38岁高龄的大熊猫多器官衰竭的病理学变化。病理剖检显示，该熊猫主要表现为实质器官充血、水肿和出血性变化；组织病理学检查发现，全身实质器官（除心、肺、脑外）均发生明显萎缩，胃、肠、肝、胰、肾等发生水肿变性或出血；此外，还观察到心肌纤维坏死后的瘢痕形成。结果表明，老龄大熊猫的多器官衰竭的病理学变化与其他动物相似；高龄大熊猫也易患心血管系统疾病，且具有较经的组织修复能力。     

南阳牛IGF2基因第2外显子多态性及其与生长发育相关性研究

以126头纯种南阳黄牛为研究材料，利用PCR-RFLPs技术对胰岛素样生长因子2（IGF2）第2外显子的多态性及其与生长发育的相关性进行了分析。结果表明：南阳牛在该位点的遗传多态性丰富。检测到2种等位基因A和B，频率分别为0．6865和0．3135，A等位基因在群体中是优势等位基因；BB型个体的6、12、18、24月龄体斜长和胸围，12、18和24月龄的坐骨端宽，初生、6月龄和24月龄体重等体征性状显著地优于AA型；6月龄体斜长、12月龄的胸围、18月龄和24月龄坐骨端宽也显著优于杂合型。初步推断JGF2基因是非常有价值的辅助选择标记，可为南阳牛肉用型方向选择提供理论依据。     

人工养殖下金钱龟常见疾病及防治模式

在金钱龟的人工养殖过程中,观察到部分个体发生了腐皮、肺炎、腹泻等疾病。通过对细菌的实验室诊断和生化特性鉴定,发现引起金钱龟腐皮和腹泻的病原体为嗜水气单胞菌,而肺炎则是由温度突变引起的感冒造成。因此,进一步研究了人工养殖条件下金钱龟的常见疾病与一些环境因子的关系。研究表明,温度差异对金钱龟的生理机能有显著的影响,而水质条件和养殖密度的调控也关系到金钱龟的健康生长,这也为金钱龟防治疾病及健康养殖模式提供一些参考依据。     

从动物毛中提取DNA研究初探

利用蛋白酶Ｋ分解毛发蛋白，并使用酚和氧仿除去蛋白质杂质方法提取毛中ＤＮＡ。结果测量获得的数据和曲线表明：动物脱落毛发以及从保存多年标本获得的毛发均可用来提取到具有一定纯度和数量的ＤＮＡ，完全可以满足聚合酶链式反应（ＰＣＲ）所需。     

犬瘟热、犬细小病毒胶体金二联检测卡研制

本研究通过细胞融合、间接ELISA方法筛选出4株可稳定分泌犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)和犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以此为基础研制了一种可同时检测CDV和CPV的胶体金二联检测卡,并对其特异性、灵敏度及准确性进行了测试。结果显示：4株杂交瘤细胞可稳定传代,分泌的单克隆抗体纯度高,效价均在1:320以上。制备的胶体金二联检测卡特异性强,只与CDV和CPV产生特异性条带,而不与其他犬类病毒反应;灵敏度高,最低检测限可达到10²拷贝/μL;准确性好,与荧光定量PCR结果的符合率高于88.0%,与市面上单一病毒检测卡的符合率高于97.2%。结果表明,本研究制备的CDV、CPV胶体金二联检测卡特异性强、灵敏度高、准确性好,兼具操作简便、肉眼可判读、结果易保存和无需特殊仪器设备等优势,可用于两种疾病的临床快速诊断和大规模检测工作。     

Ge—132在蛋鸡体内的药代动力学

给24只蛋鸡单剂量灌服Ge-132,分别于0.25～12小时采集血液、肝脏、肾脏、脾脏、卵巢和卵子,用石墨炉原子吸收分光光度法测定样品锗含量,进行药时曲线拟合和动力学参数分析。结果表明,血液中锗有2只鸡符合一级吸收单室开放模型,药代动力学参数为T_(1/2ka)0.2562±0.0302h,T_(1/2k) 3.9657±0.7075h,Tp1.1556±0.1332h,Cmax 2.1621±0.4165uσ/ml,AUC10.6164±0.1748mg/L.o;另4只鸡符合一级吸收双室开放模型,参数为T_(1/2k) 0.3996±0.2606h,T_(1/2α) 0.8513±0.1626h,T_(1/2β)4.7368±0.3652h,Tp1.0116±0.4574h,Cmax 2.6134±0.4574μg/ml,AUC13.3926±3.4651mg/Lh,在各种组织器官中均呈现一级吸收单室开放模型,其消除速率以脾脏最快,依次为脾>肝>肾>卵巢>卵子,表明了蛋鸡体内的Ge-132代谢在个体和不同器官隔室间存在很大差异。     

鱼类神经坏死病毒纳米探针的制备与特征分析

为了快速检测鱼类神经坏死病毒,本研究设计了病毒特异性的发夹型探针,经硫醇修饰后与纳米银溶胶结合,制备了鱼类神经坏死病毒纳米探针（Ag-NNV）,并使用透射电镜、多功能酶标仪、表面增强拉曼光谱仪等对纳米探针Ag-NNV的表征及发夹型探针在纳米银粒子表面的覆盖率进行了测定和分析。结果表明,裸露的纳米银粒子为球形,平均直径50 nm;制备的纳米探针颗粒为球形,平均直径90 nm。纳米银粒子和纳米探针在溶液中均具有良好的分散性。平均每个纳米银粒子表面结合发夹型探针约100条,单位表面积的探针覆盖量为0.56 pmol/cm2。该纳米探针制备简便,适合用于表面增强拉曼散射法对鱼类神经坏死病毒进行快速检测。     

马立克氏病毒强毒GD0908株感染性克隆的构建

为研究马立克氏病毒(MDV)新型疫苗及MDV致病机理,将MDV强毒GD0908株的全基因组作为细菌人工染色体(BAC)转化进大肠杆菌,构建GD0908株的感染性克隆.利用同源重组将BAC载体插入MDV基因组的US2区,将包含BAC载体的MDV DNA电转化入大肠杆菌菌株DH10B,最后将鉴定成功包含GD0908株全基因组的BAC DNA转染鸡胚成纤维细胞(CEF),成功拯救出重组病毒,命名为rGD0908,其与父代病毒GD0908株在CEF细胞上的生长速度没有差异.该感染性克隆将为MDV的相关研究提供技术平台.