透明颤菌血红蛋白基因(vgb)在大肠杆菌中的高效表达

利用PCR技术将透明颠菌血红蛋白基因（vgb）克隆到融合表达载体pET28a，在大肠杆菌BL21（DE3）表达。重组蛋白在30℃诱导获得可溶表达。利用Ni^2＋亲和层析对重组蛋白进行了纯化，得到重组的透明颠菌血红蛋白，蛋白呈红色。实验现象显示重组蛋白与血红索相结合。紫外光区和可见光区波长扫描分析显示：蛋白粗提物和纯化后的血红蛋白在230nm和413nm都有强吸收峰，初步表明，尽管重组蛋白比天然蛋白多36个氨基酸，重组蛋白仍然具有生理活性。诱导后4h和6h的培养液氨基乙酰丙酸含量分别达到17mg／L和21mg／L。说明重组蛋白的表达明显促进了体内heme合成途径。     

降低畜产公害的营养调控

畜牧生产中产生的恶臭气体以及粪尿中的氮、磷元素、微量矿物元素等,对空气、土壤和水体造成严重的环境污染,极大地影响人类的生存质量和身体健康。利用日粮营养调控可减少氮和磷的排泄量、减少微量矿物元素的排泄量和降低恶臭的排放量。     

中国野牦牛种质资源库体系的建立及利用

介绍构建野牦牛种质资源信息收集、整理及调查的方法;建立了野牦牛50头规模的可良性运作的遗传繁育基地，可年产2万支冷冻精液的动态保存库，以及0.1万～0.15万枚野牦牛冷冻胚胎动态保存库的条件与规模;创建了国内外相关野生动物保护组织、行业、协会等保护和利用野牦牛遗传资源的共享平台.     

sikFBA4基因启动子的克隆及低温表达模式分析

天山雪莲生长于常年积雪覆盖高海拔处的高山区域,具有很强的极端低温生境适应能力,属于研究植物低温适应的良好模式植物。前期的研究表明,sikFBA4基因可以显著提高番茄的抗寒能力。为进一步研究sikFBA4基因的耐寒响应模式,以天山雪莲为材料,采用实时荧光定量PCR分析sikFBA4在低温胁迫下的表达模式;利用高效热不对称PCR法(Hi-Tail PCR)克隆sikFBA4启动子序列并进行生物信息学分析。为分析PsikFBA4序列克隆的完整性及转录表达特性,将PsikFBA4与GUS基因融合在烟草中进行瞬时表达。结果表明,sikFBA4在低温胁迫条件下的表达发生瞬时显著上调,并在1 h达到峰值,而后表达下调。通过启动子克隆分析,在PsikFBA4序列-1648 bp位置处具有冷响应元件LTRE;进一步的GUS染色和酶活力测定结果表明,低温能够显著提高GUS基因的表达活性,说明sikFBA4属于低温诱导型基因。SikFBA4基因启动子的克隆、序列分析以及表达分析,为进一步探究雪莲果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(sikFBAs)基因的表达与调控机制奠定了基础。     

The effect of maternal obesity on fatty acid transporter expression and lipid metabolism in the full‐term placenta of lean breed swine

This study was conducted to evaluate the influence of back‐fat thickness (BF), at mating of sows, on the maternal and newborn circulating lipids, expression of placental fatty acids (FA) transporters and lipid accumulation in placenta. Full‐term placentas were obtained by vaginal delivery from BFI (9–14 mm; n = 37), BFII (15–19 mm; n = 43) and BFIII (20–27 mm; n = 38) sows according to BF at mating, and frozen placental sections were analysed for fat accumulation. Blood samples were collected from the sows of day 105 pregnancy and from cord blood at delivery. mRNA and protein expression levels were evaluated with real‐time RT‐PCR and Western blotting. Our results demonstrated that BFII females had significantly increased litter weight and placental efficiency, decreased maternal triglyceride (TG) and non‐esterified fatty acids (NEFA) levels, decreased maternal IL‐6, TNFα and leptin levels compared to BFIII females (p < .05). BFIII sows were associated with significantly decreased newborn TG levels, increased newborn glucose, IL‐6 and TNFα levels compared to BFI or BFII sows (p < .05). BFI and BFII females had significantly decreased placental TG, NEFA and cholesterol (CHOL) contents compared to BFIII females (p < .05). Moreover, decreased CD36, FATP1, FABP4, and FABP1 mRNA and protein and FATP4 protein expression, and increased LPL activity were also observed in BFIII group compared with BFII group (p < .05). PPARγ mRNA and protein and lipogenic genes such as SREBP‐1c, ACSL1, ACCα, FAS and SCD mRNA expression were downregulated or upregulated, respectively, in the placentas of BFIII sows compared to BFI or BFII sows (p < .05). Overall, this study demonstrated that there is no advantage, in terms of litter live size, litter weight and placental FA transport and metabolism, in performing the mating of sows with BF>19 mm.     

云贵川三省部分地区警犬狂犬病血清中和抗体调查

为评价警犬的狂犬病免疫效果,了解影响免疫效果的因素,2017年在云南、贵州、四川三省部分地区免疫狂犬病疫苗的警犬中随机抽样,采用荧光抗体病毒中和试验(FAVN),检测血清中狂犬病病毒中和抗体效价。结果显示,共抽检187只警犬,中和抗体阳性127只(≥0.50 IU/m L),总体免疫合格率为67.91%,其中云南、贵州、四川3省的免疫合格率分别为57.14%、68.33%、76.06%。结果分析表明,警犬狂犬病免疫合格率与犬的年龄、免疫次数、疫苗类型等因素有关,而与性别和品种无关。建议完善警犬免疫程序,加大血清中和抗体监测力度,对不合格警犬及时加强免疫;对每个影响因素进行连续性分析,以确定影响警犬狂犬病免疫合格率的具体因素。     

草鱼呼肠孤病毒生长特性研究

以草鱼呼肠孤病毒(GCRV)873毒株为试验材料,建立了GCRV荧光定量PCR检测方法;用GCRV873株感染CIK细胞及草鱼,通过对病毒RNA复制水平、子代病毒含量以及细胞病变等情况进行监测,研究其在CIK细胞及草鱼体内的生长特性。在CIK细胞中,GCRV感染后12 h即可检测到子代病毒,36 h时,所有细胞被感染;72 h时,病毒滴度达到最高,为10~(6.75) TCID_(50)/mL。在草鱼的肝、脾、肾中,均能检测到GCRV RNA,其中肾脏中含量最高,其次是肝脏,脾脏中最少。本试验为研究GCRV致病机理及制备细胞灭活疫苗奠定了试验基础。     

内蒙古羊屠宰场致泻性大肠杆菌和沙门氏菌污染状况分析

为了解内蒙古地区羊屠宰场各屠宰环节致泻性大肠杆菌和沙门氏菌的携带情况,评估是否存在污染风险,选取不同规模屠宰场,用棉拭子法分别采集不同屠宰环节样品349份,36 h内进行试验;应用PCR方法分离鉴定病原菌,对鉴定为致泻性大肠杆菌的分离株进行16S r DNA测序并构建系统发育树。结果显示:从刚宰杀的羊胴体表面和环境中共分离到致泻性大肠杆菌12株,其中11株携带毒力基因elt,1株携带毒力基因eae和elt;大中型屠宰场(1.21%)的致泻性大肠杆菌阳性率低于小型屠宰场(5.43%),不同规模屠宰场的预冷间均未检出致泻性大肠杆菌和沙门氏菌;从屠宰环境中分离出1株携带inv A基因的沙门氏菌,阳性率为0.29%;经高压冲洗和排酸预冷等屠宰工艺后,在羊胴体表面均未发现致泻性大肠杆菌和沙门氏菌。     

信号肽对溶血素在大肠杆菌中跨膜转运的影响

信号肽在引导外源蛋白的跨膜转运过程中具有重要作用。本试验通过PCR方法获得带有信号肽序列和不带有信号肽序列的溶血素基因,构建表达载体在大肠杆菌中进行诱导表达。经过溶血试验和免疫印迹试验证明缺失了信号肽的重组溶血素不能被跨膜转运至细胞外;带有信号肽的重组溶血素能够跨膜转运大肠杆菌细胞外。本试验为猪链球菌2型基因缺失弱毒疫苗的研究、细菌信号肽以及基因工程重组蛋白的可溶性表达进行了有益探索。