鸡胚外泌体miRNAs功能分析

旨在基于鸡胚外泌体及所含有的miRNAs解析其产生生理功效的活性物质基础及作用机制。本研究收集13胚龄惠阳胡须鸡胚蛋18枚（3组,每组6枚）,采用酶消化、蔗糖密度梯度和差速超速离心等方法分离鸡胚组织来源的外泌体,经透射电镜、纳米流式和标志蛋白流式检测等方法鉴定其特征。利用高通量测序方法研究外泌体样本中miRNAs表达谱,对各样本top 10且共表达的miRNAs进行靶基因预测与功能分析。结果表明,分别获得了3个浮力密度范围（S1：1.13 g·mL^-1、S2：1.21 g·mL^-1和S3：1.32 g·mL^-1）具有外泌体典型特征的胞外囊泡;与miRBase V21进行比对发现,S1、S2和S3样品中分别含有675、661和845个已知的miRNAs,这些miRNAs中有488个（52.6%）三者共有,包括了广泛参与细胞增殖、分化和免疫应答等过程的功能性miRNAs。TargetScan 7.2和miRDB预测得到3个样本中top 10且共表达的56个miRNAs的靶基因,获得的3 650个靶基因经DAVID分析,显著富集了24个与机体生长、发育、免疫等有关的生物学通路（P<0.05）,包括MAPK信号通路、mTOR信号通路、Notch信号通路、Wnt信号通路和GnRH信号通路等。本研究建立了鸡胚组织中有效分离外泌体的方法,发现鸡胚组织来源的外泌体miRNAs会影响机体生长发育和免疫调节有关的生物学通路。     

胸腺嘧啶依赖型金黄色葡萄球菌小菌落突变株的分离鉴定

本试验对由患慢性奶牛乳房炎奶样中分离出的1株疑似金黄色葡萄球菌小菌落突变株(SCVs)进行形态观察、金黄色葡萄球菌相关保守基因片段(nuc、nucA、16S rDNA) 多重PCR扩增鉴定、药敏试验、生理生化特性研究及补偿试验。结果显示分离出1株金黄色葡萄球菌SCVs,该菌含有金黄色葡萄球菌菌种特异性基因nuc和nucA;与金黄色葡萄球菌质控菌株ATCC 25923的抑菌圈大小明显不同;菌落形态主要表现为菌落细小、生长缓慢、溶血能力下降;凝固酶活性下降;耐盐能力降低;革兰氏染色为革兰氏阳性球菌,呈葡萄状排列;补偿试验鉴定该金黄色葡萄球菌SCVs为胸腺嘧啶依赖型。结果表明成功分离鉴定出1株胸腺嘧啶依赖型金黄色葡萄球菌SCVs,为由金黄色葡萄球菌SCVs引起的奶牛慢性乳房炎的预防和控制及其致病机制的研究奠定前期基础。     

Association of tumor budding with tumor-infiltrating lymphocytes and prognosis in breast cancer patients

AIM: To investigate the relationship of tumor budding with clinicopathologic parameters, tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) of tumor microenvironment and the prognosis in breast cancer patients.METHODS: A total of 178 HE section samples were collected from the breast cancer patients treated with surgery in the First Affilated Hospital of Jinan University during Jan. 2012 to Dec. 2016. The tumor budding and stromal tumor-infiltrating lymphocytes were observed under light microscope. The correlation of tumor budding with the clinicopathologic status and TILs were analyzed by χ² test. Kaplan-Meier survival analysis and Log-rank test were used to estimate the disease-free survival (DFS) and overall survival (OS).RESULTS: High tumor budding level was associated with more positive lymph nodes, higher grade, and more lymphovascular invasion. In addition, the patients with higher tumor budding level showed fewer TILs, while the patients with lower tumor budding level had more TILs. Furthermore, the patients with higher tumor budding level had a worse disease-free survival and overall survival than those with lower tumor budding level.CONCLUSION: Tumor budding is significantly associated with adverse clinicopathological characteristics of breast cancer and negatively correlated with TILs. Therefore, tumor budding may serve as a potential biomarker to predict the prognosis of breast cancer.     

"石河子大学农作物害虫标本数据库"的研究与实践

结合本校实际,对石河子大学农作物害虫标本信息进行系统、科学的整理和有序化存储。开发研制出图文并茂的“石河子大学农作物害虫标本数据库”。全库采用国际流行的全息检索技术,具有多种运算方式,检索速度快捷、用户界面友好,是农作物害虫的准确识别与正确防治信息的工具。本数据库的研制与开发对图书馆特色数据库的建设进行了有意义的实践。     

旱地矮化苹果园当季氮肥在土壤剖面的累积与淋溶效应

为研究旱地矮化苹果树当季肥料氮在土壤中的累积与淋溶效应,采用土钻采样法与¹⁵N同位素示踪技术,测定了6 a生晚熟矮化‘延长红’苹果园土壤剖面（0~300 cm）的氮素累积分布特征与当季氮肥残留。结果表明：土壤含水率与硝态氮含量变化表现出较强的一致性,不施肥CK、减氮施肥N400与常规施肥N800处理硝态氮在80~140 cm土层存在明显富集现象,其含量峰值分别为174.9、194.8 mg·kg^-1与211.1 mg·kg^-1。CK、N400与N800处理0~300 cm土壤剖面中,全氮累积量分别为10 927.3、13 734.8 kg·hm^-2与15 645.4 kg·hm^-2,硝态氮累积量分别为1 873.5、2 353.9 kg·hm^-2与2 892.7 kg·hm^-2,铵态氮累积量分别为12.2、42.6 kg·hm^-2与44.4 kg·hm^-2。N400和N800处理下果园土壤中各土层（0~300 cm）氮素来自当季氮肥的比例分别为0.10%~1.50%和0.18%~2.03%。当季氮肥在0~300 cm深度各土层均有残留且主要集中在0~140 cm土层;80~100 cm土层的全氮来自当季氮肥的比例（减氮施肥N400和常规施肥N800分别为1.50%与2.03%）显著高于其他土层。N400处理下TN-¹⁵N、NO^-₃-¹⁵N、NH⁺₄-¹⁵N的残留率分别为21.6%、19.2%、0.2%,N800处理分别为48.8%、39.3%、0.3%,土壤中氮的残留率随着施氮量的增加显著增加,且以硝态氮为主。100~300 cm土层中减氮施肥N400与常规施肥N800处理NO^-₃-¹⁵N残留率分别为8.5%与25.0%,当季氮肥淋溶出根区（0~80 cm）现象明显。最佳施肥量及施肥量对产量的影响在N400的基础上仍有待进一步研究确定。     

瓜类蔬菜组织培养与遗传转化研究进展

概述了瓜类蔬菜组织培养过程中的主要影响因素—基因型、外植体类型,部位与生理状态、培养基、生长调节物质、碳源及其他添加物质对植株再生的影响,以及根癌农杆菌介导的瓜类蔬菜遗传转化的影响因素与研究进展。     

山羊痘病毒ORF8～ORF18缺失重组毒株的构建和鉴定

本研究旨在通过敲除山羊痘病毒(GTPV)大段基因组片段尝试构建安全性更好的基因工程减毒株和病毒表达载体.采用PCR方法,克隆了GTPV AV41株基因组ORF7～ORF8间1 242 bp的基因片段,以及ORF18～ORF19间1 355 bp的片段.接着分别以上述2片段作为左、右侧同源重组臂,构建了包含报道基因EGFP和抗性基因gpt的GTPV重组转移载体pCF-Eg.然后采用脂质体介导法,将重组转移载体pCF-Eg与GTPV AV41株共转染原代羊睾丸细胞,通过空斑纯化筛选阳性重组病毒,并鉴定重组病毒的遗传稳定性和生长特性.结果成功获得1株敲除掉ORF8～ORF18间9个ORF、长达7 kb基因组片段的重组病毒vCF-Eg.该重组病毒能稳定表达绿色荧光蛋白至少10代,并且其增殖滴度与亲本毒株基本相同.表明上述区域是GTPV的复制非必需区.     

白花蛇舌草多糖提取与纯化工艺研究进展

白花蛇舌草多糖具有抗肿瘤、抗菌等多种生物活性。目前,白花蛇舌草多糖的提取方法有超声波法、微波法、热水提取法等,此外,其纯化主要体现在脱蛋白、除色素等。笔者等就近年来国内的白花蛇舌草多糖提取与纯化的研究进展进行综述,并对其提取与纯化方法进行展望。     

桑叶粗多糖最佳提取工艺研究

为探究桑叶粗多糖最佳提取工艺,利用正交试验设计对桑叶粗多糖的提取工艺进行优化。以桑叶粗多糖得率为评价指标,以加水倍数、煎煮时间、煎煮次数为考察因素,设计3因素3水平正交试验,采用苯酚一硫酸比色法进行桑叶粗多糖含量测定,比较得出桑叶水提物的最佳制备工艺,并在此基础上考察不同浓度乙醇对桑叶粗多糖提取的影响。结果显示,煎煮次数对桑叶粗多糖提取率影响最大,当加水倍数为25倍,煎煮时间为2 h,煎煮2次时桑叶水提物中桑叶粗多糖提取率最高,为4.94%。但结合影响因素分析,最终确定桑叶水提物的最佳提取工艺为加25倍水,煎煮2 h,煎煮3次。乙醇浓度对桑叶粗多糖的含量及得率影响很大,70%乙醇醇沉所得水提物中桑叶粗多糖质量最大,40%乙醇醇沉所得桑叶粗多糖含量最高,平均含量达41.5%,显著高于其他乙醇浓度（P < 0.05）,提示乙醇浓度越高,桑叶粗多糖含量越低,但得率越高。桑叶粗多糖最佳提取工艺为：加水倍数为25倍,煎煮时间2 h,煎煮3次,采用70%乙醇醇沉。     

鸡马立克氏病病毒在鸡淋巴细胞和羽髓中的复制动力学分析

马立克氏病（MD）是由鸡马立克氏病病毒血清1型（MDV1）引起的鸡高度接触性淋巴细胞增生性疾病,MDV1在体内的复制状况与其致病性强弱及传播能力直接相关。本实验选择近几年从国内不同地区MD暴发鸡场分离的6株MDV1强毒株、弱毒疫苗“814”株和国内标准MDV1强毒J-1株,分别人工感染SPF鸡,采用双重实时荧光定量PCR（FQ—PCR）方法,检测感染后1d～28d病毒在淋巴细胞和羽髓中的复制状况。结果显示,接种1d后即可在淋巴细胞中检测到MDV1（10^2.6 copies～10^5.2 copies／10^6 cells）;在检测期间,淋巴细胞中病毒载量略有上升的趋势,总体呈现不规律变化,而且变化并不明显。接种7d后羽髓中病毒载量开始显著增加,14d～21d达到峰值,超强毒株峰值处病毒载量可达到10^7 copies／10^6 cells,峰值期病毒载量是感染前期（1d～7d）的100～10000倍。强毒株在体内的病毒载量高于弱毒株,即复制能力高于弱毒株。研究表明,MDV1国内流行的毒株有增殖速度快,病毒载量高的新特点;MDV1致病性的高低与在其在体内的复制能力的高低呈正相关。