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一步法实时定量RT-PCR检测小反刍兽疫病毒方法的建立 总被引:1,自引:3,他引:1
建立了检测小反刍兽疫病毒的快速、特异的基于Taqman的一步法实时定量RT-PCR方法。通过对GenBank已公布的小反刍兽疫病毒N基因序列进行序列比较分析,设计了一对特异性引物和一条Taqman探针。利用这对引物和探针对来自不同疫源地的小反刍兽疫病毒RNA样本进行检测,都获得了特异性扩增,但是,不与牛瘟病毒、海豚麻疹病毒等其他种的麻疹病毒属病毒发生交叉反应。本方法具有高度灵敏性,最低可检测到810拷贝的RNA模板。在模板浓度为8.1×102到8.1×108拷贝范围内,都呈现良好的线性关系,而且无论是组内和或组间重复的变异系数都很低。 相似文献
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文章分析了3种方式(剪毛、直接拔毛和药物拔毛)对皖系长毛兔采毛前、采毛后0、4、8、24、48 h血清蛋白及含氮代谢物变化规律的影响.结果发现:3种采毛方式均显著上调血清总蛋白和肌酐水平,而血清白蛋白仅受药物拔毛影响而显著上调;药物拔毛显著上调血清总胆红素和直接胆红素水平,同时直接胆红素还受其他两种采毛方式影响而显著下调;两种拔毛方式(直接拔毛和药物拔毛)显著上调血清尿素和尿酸水平,但剪毛对这两个指标没有影响.长毛兔在采毛后48 h内,多数血清指标可恢复到采毛前水平,或呈恢复趋势;该研究筛选获得采毛应激指标血清总蛋白和肌酐,拔毛应激指标尿素和尿酸,同时发现肌酐、白蛋白和胆红素受地塞米松的显著影响.该研究结果可为初步揭示不同采毛方式应激生化机制提供参考. 相似文献
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为研制均匀、稳定的猪瘟病毒(CSFV)核酸标准物质,选择CSFV C株接种于PK-15细胞并收获病毒液,然后经过病毒灭活、分装、冻干,最终形成核酸标准物质。用微滴式数字PCR对制备的CSFV标准物质进行均匀性和稳定性评估、标准物质合作定值,在评定不确定度后计算得出最终量值结果,并开展临床试用。结果显示,该标准物质均匀,4 ℃条件下可稳定存放4周,25 ℃可稳定存放1周,-20 ℃可稳定存放11个月,量值结果为(5.1±0.7)×105 copies/mg;临床试用显示,所制备的标准物质与临床样本的互通性良好。本研究制备的CSFV C株国家核酸标准物质均一性良好、稳定、量值准确度高,并通过了全国标准物质管理委员会评定,可用于动物及动物产品质量安全检测,从而有效保障猪瘟防治工作的开展。 相似文献
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对2个猪场的母猪血清、扁桃体、全血样品和公猪精液分别应用荧光抗体染色法、RT-PCR、CS-FV抗原ELISA、CSFV糖蛋白Erns ELISA 4种方法进行CSFV对应检测和比较。结果显示,荧光抗体染色法检出率最高,但与其他3种方法存在较大差异,RT-PCR方法检出率和重复性次之;猪瘟抗原ELISA方法检出率第3,重复性第1;CSFV糖蛋白Erns检出率和重复性均最低,但可筛选是否感染猪瘟病毒野毒。在母猪3种样品中扁桃体的检出率最高,全血样品次之,血清检出率最低。4种样品中公猪精液重复性最好,其次是母猪全血样品,母猪扁桃体第3;母猪血清样品最差。 相似文献
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