猴源环孢子虫巢式PCR检测方法的建立

环孢子虫是一类可引起人和动物腹泻的重要寄生性原虫。为建立猴源环孢子虫的巢式PCR检测方法,根据该环孢子虫18S rDNA基因序列,设计一对保守引物N18SA/N18SS和一对特异性引物CYJS/CYJA,通过阳性质粒摸索该检测方法的最佳反应条件,进行特异性和敏感性试验,并应用该方法对87份猴粪样本进行了临床检测。结果显示该巢式PCR能特异性地扩增出猴源环孢子虫目的片段,与微小隐孢子虫、阿米巴原虫等8种DNA无交叉反应,最低能检测0.2 fg的阳性质粒DNA,对临床样本的检出率比传统方法(饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法)提高2.3%~3.4%。可见,该巢式PCR方法具有较高的特异性和敏感性,对于环孢子虫病的诊断和分子流行病学调查具有重要的应用价值。     

H3亚型猪流感病毒荧光定量PCR检测方法的建立

通过RT-PCR方法克隆了H3亚型猪流感病毒HA基因一段靶序列,构建重组质粒作为标准阳性模板.根据GenBank中的H3亚型猪流感病毒HA基因保守序列设计了用于FQ-PCR的1对引物和1条TaqMan探针.通过条件优化,以10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增,并制作标准曲线,建立了检测H3亚型猪流感的荧光定量PCR方法.结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为109～100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×109、1.0×108、1.0×107拷贝/μL的标准品的最终实际测得值(Ct)分别为13.68,18.21和20.57;变异系数分别为0.31%、0.17%和0.12%,均小于5%,说明此方法具有良好的准确性和重现性.对阳性组织病料的检测表明,该方法的检测灵敏度高出常规PCR,与套式PCR具有相近的灵敏度.     

新疆绿洲干旱区不同棉种主要性状综合评价及分析

[目的]研究新疆绿洲干旱区不同棉种主要综合性状,综合评价南疆生产上推广应用的棉花品种,为南疆品种选择和提质增效栽培提供一定的理论依据.[方法]以新疆南疆棉区历来选育的有代表性的16个品种为材料,分析新疆干旱绿洲区栽培下棉花农艺形状、品质、根系、产量及产量构成因子等主要性状相关性和聚类分析.[结果]各品种铃重为4.5～6...     

茶树病虫害识别防治信息查询系统的开发

本文应用VB6.0开发茶树病虫害识别防治信息查询系统,该查询系统界面友好、使用方便、共收入茶树病虫害77种.其中病害24种,叶部病害11种,枝部病害8种,根部病害5种;虫害53种,食叶性害虫24种,刺吸式害虫18种,钻蛀性害虫7种,地下害虫4种.该系统通过安装向导创建安装程序后即可使用,适合基层农技推广人员、茶农及科研人员作信息查询使用.     

桑叶粗多糖最佳提取工艺研究

为探究桑叶粗多糖最佳提取工艺,利用正交试验设计对桑叶粗多糖的提取工艺进行优化。以桑叶粗多糖得率为评价指标,以加水倍数、煎煮时间、煎煮次数为考察因素,设计3因素3水平正交试验,采用苯酚一硫酸比色法进行桑叶粗多糖含量测定,比较得出桑叶水提物的最佳制备工艺,并在此基础上考察不同浓度乙醇对桑叶粗多糖提取的影响。结果显示,煎煮次数对桑叶粗多糖提取率影响最大,当加水倍数为25倍,煎煮时间为2 h,煎煮2次时桑叶水提物中桑叶粗多糖提取率最高,为4.94%。但结合影响因素分析,最终确定桑叶水提物的最佳提取工艺为加25倍水,煎煮2 h,煎煮3次。乙醇浓度对桑叶粗多糖的含量及得率影响很大,70%乙醇醇沉所得水提物中桑叶粗多糖质量最大,40%乙醇醇沉所得桑叶粗多糖含量最高,平均含量达41.5%,显著高于其他乙醇浓度（P < 0.05）,提示乙醇浓度越高,桑叶粗多糖含量越低,但得率越高。桑叶粗多糖最佳提取工艺为：加水倍数为25倍,煎煮时间2 h,煎煮3次,采用70%乙醇醇沉。     

活猪携带猪瘟病毒检测方法比较

对2个猪场的母猪血清、扁桃体、全血样品和公猪精液分别应用荧光抗体染色法、RT-PCR、CS-FV抗原ELISA、CSFV糖蛋白Erns ELISA 4种方法进行CSFV对应检测和比较。结果显示,荧光抗体染色法检出率最高,但与其他3种方法存在较大差异,RT-PCR方法检出率和重复性次之;猪瘟抗原ELISA方法检出率第3,重复性第1;CSFV糖蛋白Erns检出率和重复性均最低,但可筛选是否感染猪瘟病毒野毒。在母猪3种样品中扁桃体的检出率最高,全血样品次之,血清检出率最低。4种样品中公猪精液重复性最好,其次是母猪全血样品,母猪扁桃体第3;母猪血清样品最差。     

环境高温对两品种肉鸡生长、胴体性状及脂肪沉积的影响

选择体重相近、健康的5周龄AA肉鸡公鸡和北京油鸡公鸡各108只,评价持续高温对其生产性能、胴体组成、脂肪沉积的影响,比较其对高温耐受性的差异。试验设3个处理：34℃持续高温,自由采食（试验组,34AL）;21℃适温,自由采食（适温对照组,21AL）;21℃适温,采食量与34AL组相同（采食配对组,21PF）。所有仔鸡在人工环控舱饲养至8周龄试验结束。结果表明：AA肉鸡在持续高温下的采食量比适温对照组降低45%（P〈0.001）,日增重由61.45 g/d降至22.29 g/d（P〈0.001）,饲料利用率明显降低（P〈0.05）。对北京油鸡而言,热暴露虽然也使采食量大幅下降（下降幅度为20%,P〈0.001）,但日增重却没有受到高温的影响,饲料利用率明显提高（P〈0.05）。北京油鸡在试验期间无一死亡,而高温处理的AA肉鸡死亡率高达36%。与适温对照组相比,高温试验组AA肉鸡的胸肌率明显下降（P〈0.05）,肌间脂肪和皮下脂肪的沉积率明显降低（P〈0.01）,腹脂沉积率无明显变化（P〉0.05）。北京油鸡胸肌率未受到高温的影响,但热暴露北京油鸡腹脂沉积率明显高于适温对照组（P〈0.05）,肌间脂肪和皮下脂肪的沉积相对稳定（P〉0.05）。研究表明,北京油鸡对高温表现出极高的耐受性,在持续34℃高温下正常的生长、发育没有受到影响;AA肉鸡在持续34℃高温下,正常的生长、发育被极大程度地破坏,死亡率高。北京油鸡适应高温的调节机制可能与其在高温下腹脂沉积增加及饲料利用率提高有关。     

日粮蛋白质水平对多阶段周龄饲养肉鸡生产性能、胴体组成及氮排出的影响

试验选用768只1日龄肉公鸡,随机将其分为6个处理,每个处理8个重复。依据理想赖氨酸:蛋氨酸比例及赖氨酸需要量回归方程,研究每周赖氨酸需要量分别增加5%、10%以及降低5%、10%、15%后,日粮中不同蛋白质水平对肉鸡生产性能、胴体组成及氮排出的影响。试验结果表明:①氨基酸-蛋白质水平提高后可显著降低0～7周龄肉鸡腹脂含量(P0.05),对生产性能及胸肉、腿肉产量无显著影响;②降低氨基酸-蛋白质水平能显著降低粪氮排出(P0.05),当氨基酸水平降低10%～15%后,肉鸡腹脂量显著增加(P0.05),对0～7周龄肉鸡平均体重、体增重、采食量、饲料转化率及胸肉、腿肉产量没有显著影响(P0.05);③0～1周龄肉公鸡日粮中赖氨酸水平降低5%(蛋白水平降为21.47%)时,对其生产性能和胴体组成无任何不良影响,同时可最大程度地减少氮排出。     

The 16MΔvjbR as an ideal live attenuated vaccine candidate for differentiation between Brucella vaccination and infection

Brucellosis brings great economic burdens for developing countries. Live attenuated vaccines are the most efficient means for prevention and control of animal Brucellosis. However, the difficulties of differentiating of infection from vaccine immunization, which is essential for eradication programs, limit their applications. Therefore, the development of a vaccine that could differentiate infection from immunization will overcome the limitations and get extensive application. VjbR is a quorum sensing regulator involving in Brucella's intracellular survival. The vjbR∷Tn5 mutants have been proven effective against wild type strain challenge, implying its possibility of use in vaccine candidate development. To further evaluate this candidate gene, in the present study, the antigenicity of purified recombinant VjbR protein was analyzed. Antibodies to Brucella melitensis VjbR could be detected in sera from patients and animals with brucellosis but not in control ones, implying the potential use of this protein as a diagnostic antigen. Then a vjbR mutant of B. melitensis 16M was constructed by replacing the vjbR with kanamycin gene. The mutant showed reduced survival in macrophage and mice. Vaccination of BALB/c mice with 16MΔvjbR conferred significant protective immunity against B. melitensis strain 16M challenges, being equivalent to which induced by the license vaccine Rev.1. The vjbR deletion mutant elicited an anti-Brucella-specific immunoglobulin G response and induced the secretion of gamma interferon and interleukin-10. The most importance is that, the use of vjbR mutants as vaccines in association with diagnostic tests based on the VjbR antigen would allow the serological differentiation between infected and vaccinated animals. These results suggest that 16MΔvjbR is an ideal live attenuated vaccine candidate against B. melitensis and deserves further evaluation for vaccine development.     

牛结核γ-干扰素ELISA检测方法在检疫工作中的应用

为评价牛γ-干扰素ELISA检测方法检测牛结核的效果及国产试剂盒的检测效果,本试验首先将国产试剂盒与Prionics试剂盒对42份相对阳性的样品和105份相对阴性的样品进行对比研究。然后对5个规模化牛场的3000头奶牛首先进行国产单纯结核菌素颈部皮内变态反应试验,3天后选取皮内变态反应阳性和可疑及部分阴性牛共418头,进行牛γ-干扰素试验。结果国产试剂盒对阳性和阴性样品的检测敏感性和特异性分别为95.2%和100%,与Priobics试剂盒的符合率为99.3%。表明国产试剂盒与进口试剂盒的检测能力一致,牛γ-干扰素检测方法准确可靠。5个牛场的3000头奶牛单纯结核菌素颈部皮内变态反应试验阳性为138头,可疑105头。γ-干扰素试验对418头奶牛的检测,其中阳性74头,与颈部皮内变态反应（可疑牛暂时视为阴性）的符合率为60.5%。