一种高效制备慢病毒表达载体的方法

慢病毒表达载体具有感染宿主广和基因组整合效率高的优点,因此在转基因动物的制备中得到广泛应用.本研究构建了含有红色荧光和绿色荧光的慢病毒表达载体,用磷酸钙转染法将三质粒慢病毒载体转染293T细胞,转染效率达72%,降低了慢病毒的生产成本.在进行慢病毒的浓缩与纯化时,通过超速度离心和超滤相结合的方法,在150 mL的慢病毒原液中经纯化后得到80 μL效价为2.38×109 TU/mL的慢病毒颗粒.获得的高效价双荧光慢病毒表达载体可为后续双基因转基因动物的制备提供可靠的制作途径与检测基础.     

Screening of danofloxacin residue in bovine tissue by terbium-sensitized luminescence on c18 sorbent strips

Danofloxacin (DANO) residue in bovine muscle was screened at 200 ng/g by terbium-sensitized luminescence (TSL) directly measured on 10 × 6 mm C18 sorbent strips. The analyte was first adsorbed on sorbent surface by immersion in defatted homogenates. After reagent application and desiccation, TSL was directly measured on sorbent surfaces at λ(ex) = 273 nm and λ(em) = 546 nm. The luminescence intensity was linearly dependent on DANO concentration in the 0-1000 ng/g range (R(2) = 0.9967). A threshold was established at x(200) - 3σ(200), where x(200) and σ(200) are the mean and standard deviation, respectively, of the DANO signals at 200 ng/g. Among 48 blind samples randomly fortified at 0-1000 ng/g, 45 were screened correctly and 3 negative samples were presumed positive. This simple screening protocol has the potential to significantly reduce sample numbers and hence improve sample throughput and save assay costs.     

Monothiol glutaredoxin cDNA from Taiwanofungus camphorata: a novel CGFS-type glutaredoxin possessing glutathione reductase activity

Glutaredoxins (Grxs) play important roles in the redox system via reduced glutathione as a reductant. A TcmonoGrx cDNA (1039 bp, EU158772) encoding a putative monothiol Grx was cloned from Taiwanofungus camphorata (formerly named Antrodia camphorata). The deduced amino acid sequence is conserved among the reported monothiol Grxs. Two 3-D homology structures of the TcmonoGrx based on known structures of human Grx3 (pdb: 2DIY_A) and Mus musculus Grx3 (pdb: 1WIK_A) have been created. To characterize the TcmonoGrx protein, the coding region was subcloned into an expression vector pET-20b(+) and transformed into E. coli C41(DE3). The recombinant His6-tagged TcmonoGrx was overexpressed and purified by Ni(2+)-nitrilotriacetic acid Sepharose. The purified enzyme showed a predominant band on 10% sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The enzyme exhibited glutathione reductase (GR) activity via dithionitrobenzoate (DTNB) assay. The Michaelis constant (K(M)) values for GSSG and NADPH were 0.064 and 0.041 mM, respectively. The enzyme's half-life of deactivation at 60 °C was 10.5 min, and its thermal inactivation rate constant (k(d)) was 5.37 × 10(-2) min(-1). The enzyme was active under a broad pH range from 6 to 8. The enzyme retained 50% activity after trypsin digestion at 37 °C for 40 min. Both mutants C(40)→S(40) and C(165)→S(165) lost 40-50% GR activity, whereas the mutant S(168)→C(168) showed a 20% increase in its GR activity.     

空间诱变育成水稻品种航香糯的SSR标记分析

＂航香糯＂是经空间诱变育成的籼型香糯稻品种。与原种南丰糯相比,航香糯的产量和稻瘟病抗性有明显提高,粒形变细长,并带有香味。为深入了解空间诱变的机理以及初步鉴定与性状变异相关的区间,本研究用SSR标记对航香糯与南丰糯进行等位基因变异分析。结果表明,在12条染色体上选取的156个标记位点中检测到45个变异位点,变异频率为2...     

重金属锌对猪粪堆肥过程中氧化还原类酶活性的影响

以猪粪和秸秆为主要试验材料,添加不同浓度重金属Zn,采取发酵罐处理方法,在好氧高温条件下研究了重金属Zn对猪粪堆肥过程中多酚氧化酶、脱氢酶活性的变化,以及堆腐过程堆体温度、堆料pH值、胡敏酸E4/E6值的变化。结果表明：（1）低量重金属Zn处理（L）较不添加重金属Zn（CK）和添加高量重金属Zn（H）堆料升温快、温度高、高温持续时间长。（2）重金属Zn的加入对堆料的pH值影响不大,不是影响堆肥进程的直接原因。（3）H处理在整个堆肥过程中E4/E6值均高于L和CK,表明高浓度Zn处理抑制腐殖质的缩合和芳构化。（4）L处理的多酚氧化酶活性大多数时间高于H处理的活性,说明低量重金属Zn更好地促进了木质素的降解及其产物的转化。（5）从整个堆肥过程来看,3个不同处理的脱氢酶活性表现出一定的不稳定性,可能是重金属对脱氢酶活性有抑制作用的同时发生＂抗性酶活性＂现象。     

锌污染对猪粪堆腐过程中微生物群落的影响

利用Biolog微平板技术,对不同浓度重金属Zn影响下堆料微生物群落多样性进行了研究。结果表明,较低浓度Zn处理（Zn含量为400mg·kg^-1）的堆料升温快,高温持续时间长。微生物群落多样性指数和微生物群落主成分分析（PCA）指标均表明不同浓度重金属处理的堆料微生物群落有明显不同,Zn含量为400mg·kg^-1的堆料微生物活性高,有利于增加群落的丰富度和功能多样性,与Zn含量为1000mg·kg^-1的堆料、对照组堆料起分异作用的碳源主要为多聚物类和糖类。     

稻田沟渠-湿地系统的碳氮稳定同位素组成特征

由于稳定同位素在特定污染源中具有特定的组成,在污染物质迁移转化过程中作为示踪剂而广泛应用。针对目前农业面源污染较为严重的现状,该文利用碳氮稳定同位素研究了灌区内外源物输入对稻田沟渠-湿地系统的贡献。结果表明,水中颗粒性有机物(particulate organic matter,POM)由于受到光照、营养物质不同导致POM在各采样点组成不同,δ13C变化范围较大,均值为-27.8‰,与大型水生植物和浮游植物接近,此类植物可能是POM的主要来源。水中δ13CDIC(dissolved inorganic carbon,DIC)与浮游植物呈线性相关,浮游动物δ13C与浮游植物存在一定相关性,而浮游植物与POM之间不存在显著性差异,说明研究区内浮游动物对內源有机碳的利用主要是取食浮游植物低持斜聿愠粱?δ13C值变化范围在-27.2‰～-21.8‰之间,明显高于水体POM含量,说明表层沉积物存在比颗粒有机物更富集碳的藻类与陆源碎屑等物质。各采样点颗粒有机物δ15N值的范围3.1‰～4.2‰,平均值为3.6‰,其中湿地δ15N高于其他采样点。沉积物δ15N平均值为-0.6‰,与大气中N2较为接近。     

石灰、活性炭对镉污染土壤的修复效果研究

通过模拟铬(Cr,0～300 mg kg-1)污染土壤盆栽试验,研究石灰、活性炭及石灰+活性炭对铬胁迫下小白菜生长状况的影响及对铬污染土壤的修复效果。结果表明:受铬污染的土壤明显使小白菜受到毒害,但经石灰(L1、L2)、活性炭(C2、C3)及石灰+活性炭(L1C1、L2C2)处理均缓解了重金属的毒害症状,显著促进小白菜的生长,生物量较对照提高1～2倍(p<0.05)。3种改良剂相比,在相同Cr浓度处理下,活性炭对降低污染土壤中有效态铬的效果最好,与CK相比,有效态铬的含量降低至0.086 mg kg-1,降幅达77.36%。相关分析表明:小白菜叶部铬含量和根部铬含量与土壤有效态铬含量表现出显著的正相关(p<0.01),土壤pH与土壤有效态铬含量之间呈负相关(p<0.05),所以在铬污染的土壤中,可以提高土壤的pH,以减小土壤铬的植物有效性,使其向植物迁移的风险减小。     

生物能源植物小桐子功能基因及基因组研究进展

为缓解能源需求与原油价格不断上涨以及有限的化石燃料储备之间的矛盾,人们得寻找更加生态、可持续再生的替代能源。利用能源植物生产生物柴油与生物酒精类燃料已成为发展的方向。其中,大戟科的小桐子以其强抗逆性、高含油量等特点而受到了广泛的关注。本文综述了能源植物小桐子油脂含量与质量、生物代谢以及抗逆性等方面的相关功能基因、细胞学染色体核型、核基因组以及叶绿体基因组的研究进展,以期为能源植物小桐子的遗传改良提供参考。     

基于T-S模糊模型的TDR土壤水分传感器标定方法研究

利用TDR土壤水分传感器实现土壤水分数值的精确采集具有现实意义[1-3]。为了获得TDR土壤水分传感器水分含量测量所对应输出电压与实际土壤含水量的良好对应关系,在采用取土实验测量法获得实际水分含量数值与对应输出电压数值的基础上,利用Takagi-Sugeno模型逼进精度高、后件参数线性化等优点[2,4]对TDR土壤水分传感器