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991.
[目的]建立鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus, AngHV)的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法。[方法]利用PCR扩增出AngHV ORF49的序列,克隆至pET-32a载体,构建重组质粒pET-32a-ORF49,作为qPCR的标准品;根据ORF49序列设计引物,以梯度稀释的重组质粒为模版,进行SYBR Green Ⅰ qPCR扩增,制作标准曲线,建立AngHV的qPCR检测方法,并评价其灵敏性、特异性、重复性和应用效果。[结果]结果显示,qPCR的Ct值与标准品的拷贝数线性关系良好,且线性范围广,获得的标准曲线的相关系数(R2)达到0.999,扩增效率为100.855%;该方法特异性好,仅特异性检测AngHV,而对鲤疱疹病毒Ⅲ型(Cyprinid herpesvirus 3, CyHV-3)、蛙虹彩病毒(Rana grylio virus, RGV)和鳗鲡虹彩病毒(Eel iridovirus, EIV)无扩增;该方法重复性好,组内和组间变异系数均小于2%;该方法灵敏性高于普通PCR法,最低可检测到10个病毒拷贝,而普通PCR法为1000个病毒拷贝。应用分析结果表明,感染AngHV的欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)的主要组织器官内均可检测到AngHV,并且鳃、鳍和皮肤黏液内的病毒量明显高于其他组织器官;对保存的25份疑似鳗鲡“脱黏败血综合征”病料进行检测,阳性检出率为96%,而普通PCR法的阳性检出率仅为76%。[结论]本研究建立的AngHV SYBR Green Ⅰ qPCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于AngHV的快速和定量检测,对鳗鲡“脱黏败血综合征”的防控也具有重要意义。 相似文献
992.
猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型共感染对猪体内病毒动态及免疫反应的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)单感染和共感染6周龄健康仔猪,采用实时定量PCR(Real-time PCR)对血清、组织(心、肝、肺、肾、胰、脾、胸腺、扁桃体、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结)中的PRRSV和PCV2载量进行检测,分别采用间接ELISA和间接IFA对血清中的PRRSV和PCV2特异性抗体进行检测,采用MTT法对猪外周血淋巴细胞(PBLC)的增殖能力进行检测.结果,PRRSV/PCV2共感染组血清、组织中PRRSV的载量均显著高于PRRSV单感染组,PCV2的载量均显著高于PCV2单感染组;共感染组PRRSV和PCV2特异性抗体阳转的时间均晚于并且效价均显著低于PRRSV或PCV2单感染组;共感染组和单感染组PBLC的增殖能力均受到抑制,其严重程度依次为:PRRSV/PCV2组>PRRSV组>PCV2组.由此表明,PRRSV和PCV2在猪体内对彼此的增殖具有促进作用;PRRSV和PCV2共感染对猪的免疫抑制具有加重作用. 相似文献
993.
一株混合O血清型猪水肿病大肠杆菌的分离与鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
从具有典型临床症状和病理剖检变化的病死猪肠系膜淋巴结中分离到的1株革兰阴性细菌,通过菌体形态观察,染色、生化试验、SLT-Ⅱ e基因检测、O血清型鉴定、动物试验,其结果证明分离菌为O26、O139、O142混合血清型,产SLT-Ⅱ e大肠埃希氏杆菌.SLT-Ⅱ e基因序列与GenBank上发表的参考序列(序列号为AY368993)的同源性达100%.用粗提的毒素经腹腔注射小鼠后引起小鼠后肢麻痹、死亡和胃肠水肿. 相似文献
994.
猪传染性胸膜肺炎PCR诊断方法的建立与应用 总被引:1,自引:0,他引:1
为调查猪传染性胸膜肺炎的流行状况,本试验建立了检测胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneaumoniae, App)的PCR方法。对186份病死猪病变组织及545份无临床症状健康猪鼻拭子进行了App的PCR检测。结果186份病料中App阳性率占43.0%(80/186),545份猪鼻拭子中App阳性占9.4%(51/545)。该PCR方法可作为App临床诊断的重要手段之一。通过调查表明,聊城地区存在猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的隐性感染及流行。 相似文献
995.
皖西地区鸡球虫病流行情况调查 总被引:2,自引:1,他引:1
采用群体采样法分别从安徽省六安、寿县、霍邱三地调查点采集新鲜鸡粪,检查粪样.阳性粪样采用饱和食盐水漂浮和离心沉淀法进行卵囊分离.显微镜下观察卵囊进行虫种鉴定,并统计各调查点的鸡球虫感染率和感染强度等.调查结果:检查50份鸡的新鲜粪样.得出鸡球虫感染率为100%;共检出6种球虫,经鉴定均隶属于艾关耳属,分别为毒害艾美耳球虫(Eimeria rwcatrix)、堆型艾美耳球虫(E.acervulina)、巨型艾美耳球虫(Emaxima)、柔嫩艾美耳球虫(E.tenel-la)、缓艾美耳球虫(E.mitis)和早熟艾美耳球虫(E.praecox).调查结果说明:鸡球虫在皖西地区普遍存在,且有的调查点感染强度很高,养殖户的科学防治意识不强. 相似文献
996.
豫中黄土地区全新世黄土剖面成壤作用与古气候研究 总被引:3,自引:2,他引:1
通过对河南豫中黄土地区黄土剖面化学元素的深入研究认为:在该地区全新世中期风化成壤过程中,Al、Fe、K、Ti、Rb、Ba等元素在古土壤中相对富集,表现出残留富集的特征;而Si、Ca、Na、Sr等元素则在风化剖面中淋失。而Al、Na在成壤过程中因具有不同的地球化学行为,从而产生显著的分异现象,并且随着成壤作用的增强分异加剧。因此,Al/Na值在黄土剖面中的变化反映了风尘堆积物成壤强度的变化,能够作为成壤作用、气候变化的替代指标。 相似文献
997.
教学秘书是高等学校基层教学管理人员,在教学管理工程中发挥着重要的作用。拟对高校基层教学管理工作范畴、管理模块化内容及教学秘书工作性质和必备的素质要求进行概述分析,旨在提高教学秘书的整体素质及工作效率,促进基层教学管理更科学、更有序地进行。同时,针对不同模块化教学管理提出相应的建议,以供在此岗位上的广大同仁借鉴。 相似文献
998.
毕节市烟草黑胫病的发生情况及其病原菌鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
为有效地预防烟草黑胫病在毕节市的流行与发生,在2010-2012年对毕节市烟草黑胫病在不同品种和海拔高度的发生情况进行了调查,并应用形态学方法、分子试验和回接实验对病原菌进行了分类鉴定。结果表明:不同海拔烤烟种植区烟草黑胫病的发病情况差异较大,以毕节市东部地区的黑胫病发生较为普遍,而海拔较高的西部地区发病较少;不同烟草栽培品种对黑胫病的抗性差异较大,感病程度为云烟87>毕纳1号>云烟97;此外,已分离的病原菌鉴定结果为烟草疫霉烟草变种(Phytophthora nicotianae var. nicotianae)。 相似文献
999.
1000.
在单因素试验基础上,以发酵底物组成、水料比、硫酸铵含量和硫酸亚铁含量为试验因子,以游离棉酚脱毒率为响应值,进行L9(34)正交试验,研究棉籽粕发酵底物中各因素对游离棉酚降解效果的影响。结果表明:影响发酵棉籽粕游离棉酚含量的4个因素主次顺序为水料比、发酵底物组成、硫酸铵含量、硫酸亚铁含量。正交试验表明,最优脱毒棉籽粕组成条件为:发酵底物97.4%(其中棉籽粕70%、麸皮15%、玉米粉15%),硫酸铵含量2%,硫酸亚铁含量0.6%,水料比0.8。 相似文献