天然草地放牧牦牛采食行为及食性选择的研究

对青南地区玉树县境内2牧场的草地植被及成年母牦牛的采食行为和选择性采食习性及其关系进行了探讨,结果表明：B牧场禁牧区的生物量显著高于A牧场的禁牧区及A,B牧场的放牧区（P〈0.05）,B牧场的可食植物量显著高于A牧场（P〈0.05）,A牧场的可食植物量只占地上生物量的一半以下;B牧场分别以小嵩草,矮嵩草,披碱草,针茅,蒲公英等优良牧草为优势种,次优势种,而A牧场以线叶嵩草为优势种,凤毛菊,狼毒,黄帚橐吾等毒杂草及早熟禾等为次优势种;B牧场以小嵩草、矮嵩草等莎草科和为主要采食植物,而在A牧场除以莎草科植物为主要采食植物外,由于可食牧草量的不足,还采食一些本不喜食的植物。矮嵩草和小嵩草是牦牛最喜食,选择性最高的植物;斑块内采食口数A牧场为50.6 bite/patch显著少于B牧场的81.1 bite/patch（P〈0.01）;斑块内采食站数A牧场为8.4 FS/patch显著多于B牧场的5.2 FS/patch（P〈0.001）;采食站内采食口数A牧场为6.6 bite/FS显著少于B牧场的17.4 bite/FS（P〈0.001）;采食速度A牧场为1.32 bites/sec显著慢于B牧场的1.46 bites/sec（P〈0.01）。放牧草地的食物资源的匮乏,使放牧牦牛的食物选择性降低,采食行为的内容变劣,A牧场草地处于严重退化状态;牦牛处于缺营养状态,草地的退化对牦牛的生产性能有很大的影响。     

PRRSV国内流行毒株的分离鉴定及结构基因的分析

从国内发病猪场采集的猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）病料中,分离到8株猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）。病毒分离培养表明,JS1-JS5第1代即可适应Marc-145细胞。GD1-GD3经Marc-145细胞3次-4次传代后出现明显的细胞病变。间接免疫荧光试验表明,8个分离毒株与抗PRRSV抗体均可出现特异性的胞浆荧光。它们对氯仿、甲醛、酸和碱均敏感。5-溴-2′-脱氧尿核苷对其无抑制作用。参照GenBank中已发表的PRRSV的序列设计了两对特异性引物,分别对所分离毒株进行部分nsp2基因和结构基因的扩增。发现JS1-JS5nsp2基因发生了部分缺失。选择JS1、JS5、GD3进行nsp2基因和结构基因的扩增和测序。序列分析结果表明,JS1、JS5和2006年以后国内分离到的高致病性PRRSV高度同源。GD3的Nsp2基因虽然没有发生第534位-第562位氨基酸的缺失,但与2006年以后分离的毒株一样,发生了第482位氨基酸的缺失。通过对3个分离毒株与其他国内分离毒株的结构基因序列进行系统进化分析发现,我国的PRRSV流行毒株可大致划分为两个亚型,JS1、JS5、GD3、CH-1a、JXA1、HUN4、SHH等属于一个亚型,BJ-4、CC-1属于另一个亚型。亚型间核苷酸序列同源性为91.2%-91.8%。     

饲料中氯霉素气相色谱-质谱检测方法的研究

对饲料样品中氯霉素的检测方法进行了试验研究。用乙酸乙酯和磷酸盐缓冲溶液提取饲料中的氯霉素,固相萃取柱对乙酸乙酯提取物进行净化和富集。净化后的提取物用BSTFA衍生化和气相色谱-质谱-负化学电离源选择离子定量检测。通过对提取、净化富集条件的优化,建立了饲料中氯霉素检测方法。该法加标回收率为87.5±5.8%,检出限为0.1μg/kg。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒R98弱毒株的分离鉴定与ORFs3～7基因特性研究

应用特异性引物从猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）中扩增出S1蛋白基因,PCR产物纯化后克隆入pGEM-T载体中,得到重组质粒pTS1。用EcoRI和Not I双酶切pTS1,回收目的基因S1片段将其定向克隆到pPICZαA中,构建重组质粒pPICZαAS1。用BstXI酶切pPICZαAS1使其线性化,并电转至感受态毕赤酵母细胞GS115。PCR法鉴定阳性重组子,用1%甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果显示,在酵母菌培养基上清中检测到相对分子质量为73000的重组蛋白,且该重组蛋白可与HEV多克隆抗体发生特异性血清学反应,表明HEV的S1蛋白片段在毕赤酵母中获得成功表达。     

羊痘病毒多重PCR检测方法的建立

根据羊痘病毒（CaPV）末端反向重复序列中的一段序列和P32基因序列,设计合成了2对引物,通过确定最佳的PCR反应条件,建立了检测羊痘病毒核酸的多重PCR方法。结果显示,用这2对引物均能扩增出羊痘病毒相应的特异性片段,而用此PCR方法检测口蹄疫病毒和羊口疮病毒,结果均为阴性。与中和试验比较,建立的PCR方法具有更好的敏感性。表明,该PCR方法可对组织病料中的CaPV进行快速检测。     

近年来我国新城疫免疫研究进展

新城疫是危害我国养禽业最严重的疾病之一。近年来随着弱毒疫苗和灭活疫苗的广泛应用,新城疫的暴发流行已明显受到控制,但由于我国广大农村养鸡散户的比例很大,且饲养环境多被病毒严重污染,给新城疫的防制增加了不少困难。目前,很多地方新城疫的免疫程序还比较混乱,经常出现一些鸡群的免疫水平参差不齐,     

应用于家蚕F2代分离群体的两种连锁作图方法的作图效果比较

构建精细的家蚕分子连锁图谱需要合适的作图方法。应用Mapmaker/EXP3.0和F2lnkgsilk两种作图方法,对家蚕F2代91个个体为分离群体的300个AFLP标记和69个个体为分离群体的470个RAPD标记数据进行了比较分析。用F2lnkgsilk作图方法分析得到的分群数与Mapmaker/EXP3.0作图方法相比有所增加,而总的图距却显著增加,平均图距也有较大的增加,但产生的二联体数基本相同。就单个连锁群而言,两种作图分析方法的连锁标记及其数目80%以上相同,但是标记间的排列顺序70%以上有差异;用F2lnkgsilk作图方法分析得到的单个连锁群的总图距和平均图距也相应增大。     

生鲜牛乳中产肠毒素大肠埃希菌环介导等温扩增技术的建立与应用

为了快速检测生鲜牛乳中的产肠毒素大肠埃希菌(enterotoxigenic E.coli,ETEC),防止食源性产肠毒素大肠埃希菌给人类造成的危害,建立快速检测不耐热型产肠毒素大肠埃希菌的环介导等温扩增方法(LAMP)。敏感性和特异性试验结果表明,该方法敏感性高,特异性强,能够从生鲜牛乳中检测到1pg产肠毒素大肠埃希菌DNA,与其他型大肠埃希菌及细菌不发生交叉反应。利用建立的LAMP技术对来自西宁市奶牛场及自由市场的21份生鲜牛乳样品进行检测,6份样品呈阳性,阳性检出率为28.6%,从分子水平为生鲜牛乳中产肠毒素大肠埃希菌的检测提供了一种快速、准确的手段,对保障生鲜牛乳的食品安全有重要意义。     

Genome-wide differences in DNA methylation changes in caprine ovaries between oestrous and dioestrous phases

Background: DNA methylation plays a vital role in reproduction.Entire genome DNA methylation changes during the oestrous phase(ES) and dioestrous phase(DS) in the ovaries of Guanzhong dairy goats were investigated using bisulphite sequencing to understand the molecular biological mechanisms of these goats' oestrous cycle.Results: We discovered distinct genome-wide DNA methylation patterns in ES and DS ovaries.A total of 26,910 differentially methylated regions were upregulated and 21,453 differentially methylated regions were downregulated in the ES samples compared with the DS samples(P-values ≤0.05 and fold change of methylation ratios ≥2).Differentially methylated region analysis showed hypomethylation in the gene body regions and hypermethylation in the joining region between upstream regions and gene bodies.The methylation ratios of the STAR,FGF2,FGF12,BMP5 and SMAD6 genes in the ES samples were lower than those of the DS samples(P-values≤0.05 and fold change of methylation ratios ≥2).Conversely,the methylation ratios of the EGFR,TGFBR2,IGF2 BP1 and MMD2 genes increased in the ES samples compared with the DS samples.In addition,223 differentially methylated genes were found in the GnRH signalling pathway(KO04912),ovarian steroidogenesis pathway(KO04913),oestrogen signalling pathway(KO04915),oxytocin signalling pathway(KO04921),insulin secretion pathway(KO04911) and MAPK signalling pathway(KO04010).Conclusions: This study is the first large-scale comparison of the high-resolution DNA methylation landscapes of oestrous and dioestrous ovaries from dairy goats.Previous studies and our investigations have shown that the NR5 A2,STAR,FGF2 and BMP5 genes might have potential application value in regulating caprine oestrus.     

rChlFN-γ对E.tenella卵囊免疫雏鸡肠道分泌型IgA+细胞数量的影响

本研究初步探讨了重组鸡γ干扰素(rChIFN-γ)对柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)卵囊免疫接种鸡肠道粘膜slgA+细胞数量的影响.分别给7和14日龄雏鸡予以E.tenella孢子化卵囊免疫接种并同时肌注5 000 urChlFN-γ后,于21日龄用同源E.tcnella攻虫.免疫组化检测结果表明rChIFN-γ加强免疫组在21日龄时十二指肠、空肠、盲肠和回肠的绒毛sIgA+细胞数量均高于免疫对照组,在28日龄时,均呈现显著性差异(α=0.05).结果表明rChIFN-γ可提高球虫卵囊免疫雏鸡肠道内的sIgA+细胞数量,增强粘膜免疫水平,具有明显的抗球虫免疫增强效果.