猪pBluescript KS+文库构建、微卫星DNA克隆及序列测定

利用ＡｌｕⅠ和ＨａｅⅢ识别４个碱基的限制性内切酶消化猪基因组ＤＮＡ,以ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＫＳ＾＋噬菌粒为载体,构建了猪的小插入片段（２５０￣６００ｂｐ）基因组文库。以（ＴＧ）１０为探针筛选得到１４个阳性克隆,对２个阳性克隆测序发现其中均含有（ＴＧ）ｎ微卫星。     

应用微卫星标记对中国10个品种猪遗传变异的研究

对我国7个地方猪品种(二花脸、通城、清平、阳新、皖南花、赣东黑、万安)和3个引进品种(长白、大白、杜洛克)的4个微卫星位点的多态性进行了检测,并对品种内和品种间的遗传变异进行了群体遗传学分析。结果初步表明,地方品种中二花脸、赣东黑、通城的品种内遗传变异较高,万安的品种内遗传变异最低。除万安猪外,其它地方品种的品种内变异均大于引进品种。品种间的聚类结果基本符合品种的地缘分布。     

种鸭笼养的关键技术

目前,我国大部分种(蛋)鸭采用传统的地面平养方式饲养,种(蛋)鸭饲养在鸭舍内,外设陆地运动场和水上运动场,种鸭配种则主要采用自然交配方式.采用地面平养方式,种(蛋)鸭活动量大,种蛋受精率高,但占地较大,另外由于种蛋易受粪便污染,合格率低,孵出的雏鸭时有病原微生物污染.随着我国养鸭业的快速发展,环境污染、畜牧用地紧张、疫病难以控制等问题日益突出,已成为制约养鸭业进一步发展的瓶颈.鉴于上述情况,我们于2006年在汉口精武农业发展有限公司种鸭场结合肉鸭育种开展了种鸭笼养技术研究,在笼养设施、饲养管理、人工授精、疫病综合防治等方面取得了一些经验,现总结如下,供种(蛋)鸭养殖场参考.     

提高鸭蛋孵化率的几点体会

据报道,鸭的受精蛋孵化率最高为82%左右,这与鸡相比有很大差距,说明在提高鸭蛋孵化率方面还有较大的潜力.下面就笔者在鸭蛋孵化过程的一些体会进行总结,供鸭蛋孵化工作者参考.     

鸭MHCⅡα基因的表达纯化与抗体制备

根据NCBI上已发表的序列自行设计引物,通过RT-PCR从北京鸭脾脏的总RNA中扩增得到鸭MHCⅡα基因,将其克隆至pMD18-T,经酶切分析及序列测定鉴定后,进一步亚克隆至原核表达载体pET-28a.转化大肠杆菌BL21中诱导表达.电洗脱纯化蛋白,用于免疫昆明小鼠制备多克隆抗体.结果表明:克隆了鸭MHCⅡα基因,大小为633 bp,经核苷酸测序与已登录的基因序列同源性为99%;成功构建了原核表达载体,融合蛋白得到了高效表达且纯化后纯度可达90%,制备的鼠抗鸭MHCⅡα多克隆抗体经酶联免疫吸附试验(ELISA)与免疫印迹法(Western-blot)证实了抗体的效价高、特异性强,研究结果为研究鸭MHCⅡ分子奠定了基础.     

上市日龄和羽色对文昌鸡肉质特性的影响

测定了75只110日龄和170日龄上市母鸡的胸、腿肌肉样的理化特性、常量化学成分和脂肪酸组成等指标。170日龄母鸡肌肉的pH值、烹饪损失、剪切力和肌内脂肪含量显著高于110日龄母鸡,粗蛋白含量显著低于110日龄母鸡（P〈0．05）。不同上市鸡母鸡同一部位肌肉的脂肪酸相对含量并无太大差异,但脂肪酸组成有一定差异。170日龄母鸡和110日龄母鸡相比。腿肌增加了C16：2和C22：6两种不饱和脂肪酸,但未检测出C20：2脂肪酸组分,胸肌增加了C18：3、C20：4和C22：6脂肪酸组分。除了珍珠色鸡的失水率和剪切力比其他羽色鸡稍高外,不同羽色鸡在其他理化特性和常量化学成分上均无显著差异。     

鸡胚性分化早期性别差异表达miRNAs的表达谱分析

为研究microRNA(miRNA)在鸡胚早期性分化过程中的表达,探讨miRNA在性腺早期发育中的作用,本研究从前期以3.5～6.5 d的雌、雄鸡(Gallus gallus)胚胎性腺为材料的miRNA芯片表达谱中筛选出6个性别差异表达的miRNAs(其中miR-551b和miR-612为鸡新miRNAs),采用RNA加尾以及引物延伸的半定量RT-PCR方法研究这些差异表达miRNAs在3.5～6.5 d雌、雄鸡胚性腺中的表达,并验证其中新miRNAs的茎环前体结构.RNA folding软件折叠结果表明,预测的鸡miR-612和miR-551b均具有茎环状的前体结构.半定量结果表明,这6个miRNAs均存在不同程度的性别差异表达.除4.5 d外,gga-miR-612和gga-miR-1456在其它检测时期的表达为雌性高于雄性;在4.5～6.5 d鸡胚性腺中,gga-miR-551b在雄性中表达显著高于雌性(P<0.05);gga-miR-126在3.5和6.5 d雌性性腺中的表达低于雄性,而4.5和5.5 d则相反;gga-miR-1599在所检测时期中均为雄性中高表达且在4.5 d达极显著水平(P<0.01),gga-miR-10b的表达与之相反.根据表达谱结果推测gga-miR-551b以及gga-miR-1599可能涉及早期鸡胚性腺发育过程.     

鸡HDLBP基因SNP鉴定及其与蛋用性能关联分析

从HDLBP转录本(NM₂05096.2)中鉴定6个同义突变的SNPs,在欣华鸡的关联分析发现C3381T和T387C与开产日龄(AFE)和蛋重(EW)显著关联(P<0.05),表明该基因可能是蛋用性状相关的候选基因。从小白卵泡(SWF)到小黄卵泡(SYF)中,HDLBP表达水平在膜层和颗粒层中逐渐升高。在排卵前期,F3到F2的颗粒层中HDLBP mRNA水平显著下降(P<0.05)。此外,EGF、VEGF、FSH在不同颗粒细胞生长阶段对HDLBP调控具有剂量依赖性,Follistatin对HDLBP mRNA表达没有明显影响。     

鸭MHCⅡα融合蛋白表达条件的优化

构建了鸭MHCⅡα的融合表达载体PET-28a,对融合蛋白在大肠杆菌中表达量的影响因素进行了研究.SDS-PAGE分析表明,诱导温度22℃,时间3 h,IPTG浓度0.05 mmol/L,OD600m值0.45,通气量90%和pH 7.2时MHCⅡα融合蛋白的表达量最高,占菌体总蛋白的23.4%,比优化前提高了16.7%.蛋白经纯化后纯度可达90%.Western blot分析表明,该蛋白可被鼠抗鸭MHCⅡα阳性血清识别,具有较好的免疫学活性.