睾丸特异蛋白Y基因(TSPY)对奶牛早期胚胎性别的鉴定

为方便性别鉴定方法在现场应用,利用睾丸特异蛋白基因(TSPY)建立了奶牛早期胚胎的非电泳性别鉴定方法.设计并合成了TSPY雄性特异和雌、雄共有基因引物,并利用已知性别的奶牛血液DNA为模板,初步建立了性别鉴定的PCR反应体系和非电泳的性别鉴定方法.灵敏度试验结果显示,雄性特异引物和共有基因引物对在模板10～60 Pg时,其性别鉴定的准确率为100%,提示TSPY基因具备鉴定胚胎性别的可能;同时采用非电泳法和环介导的等温扩增(LAMP)法鉴定6枚胚胎的性别,两者结果完全一致;用非电泳法检测TSPY基因鉴定了43枚胚胎的性别,对其中鉴定为雌性的21枚胚胎分别移植给自然发情后6～8天的受体,结果9头出生的犊牛均为母牛.结果表明.TSPY基因是一个很好的雄性特异标记,非电泳检测TSPY基因对奶牛早期胚胎性别的鉴定结果准确可靠.     

饲料中霉菌毒素污染--奶牛的一个应激因子

霉菌毒素是由真菌类产生的具有毒性的二级代谢产物。霉菌毒素的种类很多，但进行过深入研究的不多。许多真菌可在饲料中产生毒素，并通过饲料或食品进入动物体并发挥其生物学效应，如肝肾毒性、中枢神经系统异常、雌激素样反应等。本文主要综述了常见的霉菌毒素对奶牛的影响及其作用机理和霉菌毒素的防治措施。     

美丽的南岭荛花

坐落在闽西的国家级风景名胜区冠豸山,是一处野生动植物王国。在这充满神奇色彩的深邃大山里,生长着许多山花野卉,南岭荛花就是其中一种,当地人称之为红灯笼。     

全基因组选择及其在奶牛育种中的应用进展

试验结果表明,奶牛育种中基于GEBV的遗传评估可靠性在20%～67%之间,如以之代替常规后裔测定体系,可节省92%的育种成本。由于可以提高育种值估计准确性、利于早期选种、显著缩短世代间隔、减少育种成本,全基因组选择作为一项新的育种策略在奶牛育种中逐渐得到应用,并将拥有良好的前景。本文综述了全基因组选择的基本原理、计算方法、影响因素及其在奶牛育种中的应用现状和所面临的问题。     

牛Src基因三个内含子单核苷酸多态性

采用巢式PCR、DNA测序、创造酶切位点法PCR(Created restriction site-PCR,CRS-PCR)及PCR-RFLP(Poly-merase chain reaction-restriction fragment length polymorphism assay)方法,研究中国荷斯坦牛、鲁西黄牛及渤海黑牛的Src基因内含子6,8,9的单核苷酸多态性(SNPs),发现了14062(C/T)、17302(G/A)和18107(T/C)共3个SNPs,均为首次报道的位点。Src基因14062(C/T)、17302(G/A)和18107(T/C)3个位点在中国荷斯坦牛和鲁西黄牛两个群体中的优势等位基因相同,分别为C、G、C,其等位基因频率分别为0.671/0.647、0.583/0.640、0.558/0.577,而渤海黑牛在这三个位点的优势等位基因分别为T、G、C,其等位基因频率分别为0.525,0.913,0.763。经χ2适合性检验,中国荷斯坦牛、鲁西黄牛和渤海黑牛三个群体在14062(C/T)位点均达到Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05);在17302(G/A)位点则均未达到Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05);中国荷斯坦牛和鲁西黄牛在18107(T/C)位点均达到Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05),而渤海黑牛未达到Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05)。中国荷斯坦牛和鲁西黄牛在14062(C/T)和18107(T/C)位点均表现为中度多态(0.25PIC0.5);渤海黑牛在17302(G/A)位点表现为低度多态,而其他2个品种牛表现为中度多态。     

牛Nramp 1基因5'调控区序列的克隆及序列分析

采用LA-PCR技术扩增牛Nrampl基因2 515 bp的5'调控区序列,构建了重组克隆载体pEASY-T3-Nrampl,对阳性克隆进行了PCR扩增、限制性酶切鉴定,DNA测序及生物信息学分析.结果表明,试验成功构建了包含Nrampl基因5'调控区的重组质粒.经同源性比对发现,Nrampl基因5'调控区在不同物种中具有一定的保守性,在转录起始位点近端的启动子区域,牛与人、鼠、猪、羊的同源性分别是60.50%.58.52%,72.18%,81.95%.经预测,该调控区富含GR、SP1、c-Ets-1、NF-W2等转录因子结合位点.本研究为进一步确定牛Nrampl基因核心启动子区域及该基因的表达调控奠定了理论基础.     

利用TSPY基因鉴定奶牛早期胚胎性别的研究

TSPY（testis—specific protein）是Y染色体上特异的基因。公牛Y染色体上的TSPY基因的拷贝数达200个。本研究主要探讨利用TPSY基因鉴定胚胎性别的可能性。利用TSPY特异引物,通过PCR技术扩增牛血样DNA的结果为公牛血样均为阳性,母牛为阴性。结果表明,TSPY基因是一个很好的雄性特异标记。PCR扩增TSPY特异序列鉴定牛性别的灵敏度试验表明,DNA的最低需要量为20pg/μL,提示,TSPY特异基因具有鉴定牛早期胚胎性别的可能。     

青年荷斯坦牛的超数排卵试验

采用不同剂量的FSH PG的超排处理方法对 75头澳大利亚牛分别在冬、春季进行超数排卵试验。结果显示 :春季的超排反应率比冬季提高 4 77个百分点 ,春季的直检黄体数、回收卵数和可用胚数分别增加 4 2 1(P <0 0 1)、4 5 3 (P <0 0 1)和 3 13 (P <0 0 5 )枚 ,可用胚率则减少 2 3 2个百分点 ;10mgFSH组的超排反应率比 7 5mgFSH组提高 3 7个百分点 ,直检黄体数、回收卵数和可用胚数分别增加 4 71(P <0 0 1)、5 0 9(P <0 0 1)、3 78(P <0 0 1)枚 ,可用胚率增加 0 3 1个百分点 ;在供体牛发情周期的第 812天对其进行超排处理 ,结果直检黄体数、回收卵数、可用胚、可用胚率均无显著差异 ,但 910天的直检黄体数、回收卵数和可用胚数量最多。     

共培养消除次黄嘌呤对胚胎发育的抑制作用

将昆明小鼠原核胚分别与不同贴壁程度的山羊原代输卵管上皮细胞（oviductal epithelial cells，OECs）共培养，确定体细胞的贴壁程度对共培养胚胎发育的影响。然后，采用高压液相色谱仪（HPLC）测定培养液中次黄嘌呤（hypoxanthine，HX）浓度，确定不同贴壁程度体细胞降解HX的能力。结果表明：与山羊原代0ECs共培养，能很好地促进小鼠胚胎发育，发育到囊胚的比例约为60％，其中贴满1d组的胚胎发育效果最好。在此基础上，检测培养液中HX浓度，发现贴满1d组培养液中HX浓度显著低于贴满3d和5d组（P〈0．05），表明体细胞降解HX的能力随培养时间的延长而下降。     

LAMP法鉴定奶牛早期胚胎性别的效果研究

本试验利用Lamp法对28枚鲜胚进行了性别鉴定，将其中13枚雌性胚和3枚雄性胚胎给受体牛移植，妊娠率达45．5％，性别鉴定的准确率为100％。说明Lamp法用于奶牛早期胚胎性别鉴定是切实可行的。