鸡传染性支气管炎病毒N蛋白的表达及ELISA诊断试剂盒的研制与应用

为了建立一种鸡传染性支气管炎抗体检测的ELISA方法,本研究根据GenBank中的传染性支气管炎病毒(IBV)山东分离株LC₂的N基因序列,设计一对引物,扩增N基因,将目的基因与载体pET-32a(+)连接,构建重组表达质粒pET-32a-N,转化E. coli BL21(DE3),诱导表达融合蛋白pET-32a-N,纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白为抗原建立鸡传染性支气管炎抗体检测的间接ELISA方法,并利用所建立的ELISA方法对临床血清样本进行检测。结果表明,IBV N基因可在大肠杆菌中稳定、高效地表达。Western-blot检测表明,表达的重组蛋白能与鸡传染性支气管炎阳性血清发生特异性反应。确定间接ELISA方法的抗原最佳包被浓度为2 μg·孔^-1,血清最佳稀释度为1:200,临界值为D₄₅₀值≥0.297,建立的ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性。该方法与进口IDEXX试剂盒的符合率为96.25%,初步临床应用结果表明该方法可用于雏鸡传染性支气管炎母源抗体和免疫后抗体的消长变化的检测。综上所述,本研究所建立的N-ELISA方法是一种有效的鸡传染性支气管炎病血清学诊断的方法,并为进一步研究IBV N蛋白的免疫原性和抗感染保护作用奠定了基础。     

南方稀土矿区植物根际与非根际土壤碳氮含量与pH值变化

[目的]揭示南方稀土矿区根际与非根际养分含量变化,为南方稀土矿区的生态恢复和侵蚀退化区的水土保持提供科学依据。[方法]以福建省长汀县稀土矿治理区为研究对象,采用野外调查与室内分析相结合的方法,选取3个稀土矿开采区进行植物样方调查及土壤取样,对研究区的主要水土保持植物(芒萁、枫香)根际与非根际土壤碳氮含量、pH值变化以及根际与非根际间土壤碳氮含量、pH值的差异性进行研究分析。[结果](1)随着治理年限的增加,芒萁根际土壤的有机碳、全氮含量逐渐升高,硝态氮含量逐渐减少,pH值先增加后减少,铵态氮含量无显著性差异;枫香根际土壤的硝态氮随着治理年限的增加而减少,而有机碳、全氮、铵态氮含量和pH值均无显著性差异。(2)随着治理年限的增加,芒萁非根际土壤的有机碳、全氮、铵态氮、硝态氮均无显著性差异,pH值先增加后减少;枫香非根际土壤的有机碳、全氮、铵态氮、硝态氮、pH值均无显著性差异。(3)芒萁根际土壤的有机碳含量显著高于非根际土壤的有机碳含量,全氮、铵态氮、硝态氮和pH值均无显著性差异;而枫香根际与非根际土壤养分含量均无显著性差异。[结论]植被能够改善土壤,但土壤肥力恢复却是一个长期的过程。     

鸡传染性腺胃炎相关的圆圈病毒3型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法的建立

本研究针对病毒基因组5'端非编码区的保守区域设计引物,建立了用于检测鸡传染性腺胃炎相关的圆圈病毒3型(Gyv3)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法.该方法具有较好的特异性,敏感性和重复性,对于鸡Gyv3以外的其他常见鸡病毒性病原的DNA或cDNA均无特异性扩增,灵敏度能达到30.76 copies/μL,组内和...     

禽类干扰素及其基因工程研究进展

干扰素是由干扰素诱生剂诱导生物细胞所产生的一类高活性多功能的糖蛋白。干扰素自被发现以来,由于其广谱抗病毒、抗肿瘤活性及其强大的免疫调节作用而受到研究者们的重视,在其基因结构、作用机理以及体外重组表达等方面都取得了巨大突破。作者综述了干扰素的基因结构、基因工程及重组干扰素的应用研究进展。     

鸭肝炎病毒单克隆抗体的研制

以反复冻融、氯仿处理、滤膜过滤、PEG反透析浓缩和分子筛层析的方法纯化DHV免疫BALB／c小鼠，同时作为包被抗原建立了筛选抗DHV阳性杂交瘤细胞株的间接ELISA方法，经特异性和重复性试验，效果良好。经一系列融合、筛选，成功获得阳性杂交瘤细胞株4株，并制备出了腹水，分别命名为285、2E8、5E6和6C11。特性鉴定结果表明4株单抗ELISA效价均比较高且特异性好，中和特性稍差，和两株Ⅰ型标准毒以及在山东分离到的几株病毒均有交叉反应。     

山东省主要水禽疾病状况及防制对策

我省集约化水禽养殖业始于20世纪80年代，南于水禽的抗病能力强，发病率低，水禽产品的营养学上低脂肪、低胆固醇、高蛋白特性，符合了广大消费者的需要，加之我省水禽业的得天独厚的品种资源、劳动力资源及一定水平的家禽生产和技术优势，使我省水禽养殖业在近年得到了迅速发展，尤其是集约化、规模化的水禽养殖企业不断增多，     

粟芒蝇的发生与防治

粟芒蝇是谷子的主要害虫之一,在河北省邯郸地区涉县、武安市、磁县山区半山区夏谷产区发生较重。一般干旱年份夏谷被害株率为8%~16%,而雨水较多年份或是低洼潮湿环境下生长的夏谷被害株率竟达47%以上。粟芒蝇以幼虫在谷子心叶内螺旋状食害幼嫩组织,被害株出现“炮捻状”枯心苗,     

目前山东省禽病流行情况及对策

1　呼吸道病仍然是影响养禽业发展的重大难题1 1　新城疫　 1 999年冬季与 2 0 0 0年春季 ,我省各地一些鸡场不同日龄的鸡群 ,发生以产蛋量大幅度下降和高死亡率为特征的新城疫。雏鸡、育成鸡发病后 ,多表现为神经症状 ,如瘫痪、斜颈、头颈扭转、震颤、无目的啄地。其剖检变化表现为腺胃乳头出血 ,腺胃与肌胃交界处粘膜有出血斑。肠粘膜上 ,肠道淋巴滤泡集中处有枣核状出血 ,直肠、泄殖腔粘膜有出血点。产蛋鸡卵泡充血、出血、变形 ,卵黄变稀 ,严重的形成卵黄性腹膜炎。造成新城疫流行的原因有的学者认为是新城疫病毒Ｆ基因发生变异 ,而出…     

传染性法氏囊病病毒在不同宿主系统中增殖的比较

传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)的病原为传染性法氏囊病病毒(IBDV)，IBDV可在不同宿主系统中增殖。本试验建立了简便、快速的多克隆AC—ELISA方法用于滴定不同宿主系统增殖的IBDV，并与滴定抗原的常规方法作了比较。     

饲料中脂肪与蛋白质比对大口黑鲈生长、体组成和非特异性免疫的影响

为探讨大口黑鲈饲料中不同脂肪与蛋白质含量比对其生长、体组成和非特异性免疫的影响,实验设计了8种(D1~D8)不同脂肪与蛋白质含量比的总能递增饲料。D1~D8饲料的脂肪水平递增(9.0%～26.5%),而蛋白质水平递减(52.0%～31.0%)。用上述饲料饲养体质量为(10.06±0.02)g的大口黑鲈88 d,每饲料设3重复,每重复30尾鱼。结果显示,特定生长率、饲料效率、蛋白质消化率、脂肪消化率和脂肪沉积率均以D2组最高,但随饲料中脂肪与蛋白质含量比的进一步升高呈现显著下降趋势。D3~D5组的蛋白质效率显著高于D1和D8组。D2、D3组与D4组间的蛋白质沉积率差异不显著,但显著高于其他各组。D1~D4组间的总能消化率差异不显著,但显著地高于其他各组。饲料中脂肪含量过高对鱼体组成产生显著的影响,使体脂的积蓄显著增高。随着饲料中脂肪与蛋白质含量比的升高,成活率呈显著下降趋势,D1和D2组的成活率显著高于D5~D8组。非特异性免疫分析显示,D4组血清溶菌酶活力和D2组血清补体活性及头肾白细胞呼吸爆发活性为最高。以饲料为单因子作单因素方差分析得出,满足大口黑鲈最适生长和饲料利用的饲料蛋白质和脂肪水平分别为49.30%和11.50%。以饲料中蛋白质和脂肪水平为自变量,分别以特定生长率和蛋白质沉积率为因变量进行二元二次回归分析得出,特定生长率最大时,饲料中蛋白质、脂肪和脂肪与蛋白质含量比分别为48.20%、12.44%和0.26;蛋白质沉积率最高时,饲料中蛋白质、脂肪和脂肪与蛋白质含量比分别为46.42%、13.96%和0.30。以饲料蛋能比为自变量作一元二次回归分析得出,蛋白质沉积率最大时,饲料的蛋能比、蛋白质、脂肪和脂肪与蛋白质含量比分别为23.72mg/kJ、46.16%、14.18%和0.31。研究认为,饲料的脂肪和蛋白质水平对大口黑鲈的生长、体组成、饲料效率和免疫力有着不同程度的影响;饲料中过高的脂肪会抑制蛋白质的消化与利用,表明脂肪对蛋白质的节约作用有限。建议大口黑鲈实用饲料的蛋白质和脂肪水平分别保持在46%~49%和11.5%~14%范围内较为适当。