犬瘟热病毒自然感染宠物犬不同部位检出率的分析

本试验利用RT-PCR检测方法对犬瘟热病毒(CDV)自然感染宠物犬的不同部位样品进行检测,确定CDV在感染犬组织中的分布情况。对14只CDV阳性犬的血液、眼分泌物、鼻液、唾液、粪便和尿液进行检测,RT-PCR方法检出的阳性率分别为92.9%、85.7%、100%、85.7%、100%和66.7%,结果显示粪便和鼻液样品的检出率最高,检出率达100%,宜于作为检测对象取材。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的严重繁殖障碍和呼吸道疾病。PRRSV为动脉炎病毒属的不分节段的单股正链RNA病毒,含有8个开放阅读框(ORFs),其中ORF6编码的非糖基化膜蛋白(M)为其优势结构蛋白,是PRRSV中较保守的蛋白,具有良好的免疫原性,可作为疫苗候选基因研究和建立诊断方法。论文阐述了PRRSV M基因的研究进展,并对基于M基因工程疫苗和检测技术等进行综述。     

PRRS检测技术的研究进展

猪繁殖日常呼吸综合征是引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状及死亡为主要特征的一种高度接触性传染病。及时发现和日常监测对本病的防治和根除有重要意义。除病毒分离、鉴定的经典方法外,更多的分子生物学检测、诊断技术得到广泛应用,本文就各种检测技术的研究进展做一综述。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒SCQ株M蛋白基因截断片段原核表达载体构建及其表达的初步研究

为表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)M蛋白主要抗原表位基因序列,参照GenBank中发表的PRRSV SCQ株M蛋白基因设计并合成一对特异性引物,通过PCR方法从重组质粒pMD18-T-M扩增得到缺失N端跨膜区的M蛋白基因片段dM(deleting M),将其与pMD19-T simple vector连接,经测序正确后克隆至高效原核表达载体pGEX-4T-1,得到重组表达载体pGEX-4T-1-dM,并将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG于37℃诱导,PRRSV M基因获得表达。经SDS-PAGE分析,所表达的融合蛋白分子量约为35 kDa。以纯化的重组蛋白作为抗原,经Western Blot分析结果表明该重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别,可用于PRRSV的检测。     

圈养林麝养殖场内铜绿假单胞菌的分布及其耐药性分析

从陕西镇坪、四川宝兴两个林麝养殖中心共采集124份样品进行铜绿假单胞菌的分离鉴定,并采用微量肉汤稀释法检测其耐药情况。结果显示,共分离出60株铜绿假单胞菌,其中镇坪34株,宝兴26株。两个养殖场铜绿假单胞菌检出率由高到低依次为伤口脓汁>死亡林麝组织器官>伤皮>鼻拭子>土壤>粪便>尿液>空气,且镇坪比宝兴的总检出率高。所分离的60株铜绿假单胞菌耐药表型趋于一致,都对阿米卡星、庆大霉素、环丙沙星敏感,对亚胺培南中等敏感,对多西环素、四环素、磺胺异恶唑严重耐药。     

PRRSV-SCQ株结构蛋白基因核酸序列分析及其氨基酸序列推导

以重庆分离病毒株PRRSV-SCQ构建的包含SCQ株ORF2、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7 6个结构蛋白基因的cDNA文库质粒pRSF2、pRSF3、pRSF4、pRSF5、pRSF6和pRSF7为基础材料,通过Sanger′s双脱氧末端终止法进行核酸序列分析。测序结果表明,文库质粒DNA中分别含有PRRSV-SCQ株中为结构蛋白编码的阅读框ORF2、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7的完全序列,其起始密码子均为ATG,终止密码子分别为TGA、TAG、TGA、TAG、TAA和TGA。阅读框ORF2的cDNA片段长度为721 bp,ORF3的cDNA片段长度为764 bp,ORF4的cDNA片段长度为547 bp,ORF5的cDNA片段长度为621 bp,ORF6的cDNA片段长度为509 bp,ORF7的cDNA片段长度为436 bp。推导的蛋白质序列中,GP2、GP3、GP4、GP5、M和N蛋白的氨基酸数量分别为258,254,178,200,174 aa和123aa。每条多肽链都以甲硫氨酸为起始氨基酸。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒SCMS株MN蛋白基因的克隆与序列分析

根据GenBank中登录的美洲株ATCC VR-2332的MN蛋白基因序列,利用Oligo6.0设计一对特异性引物,以抽提的PRRSV-SCMS病毒感染细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增出长约1.0 kb的基因片段,将其克隆入pMD 18-T载体,测序结果显示SCMS MN基因全长886 bp,包含完整的MN基因的开放阅读框,共编码297个氨基酸。PRRSV-SCMS MN基因序列与VR2332和LV株进行同源性分析结果显示,PRRSV-SCMS与VR2332和LV株之间的核苷酸序列同源性分别为99.7%和61.6%,根据M基因推导的氨基酸序列同源性分别为98.9%和78.7%,根据N基因推导的氨基酸序列同源性分别为100%和52.8%。结果表明,SCMS地方分离株与VR2332株在基因型上具有更近的亲缘关系,推测本次分离的PRRSV属于美洲型。     

乙型脑炎病毒的分离与鉴定

通过收集母猪流产死胎和蚊子为病料 ,用乳鼠脑内接毒和细胞接毒相结合的方法盲传并分离出病毒 ,进而采用血凝 (HA)实验、荧光抗体染色技术 (间接法 )、电镜实验、血清学实验及RT -PCR方法对所分离的病毒进行鉴定 ,结果表明所分离的病毒SC株为乙脑病毒 ,其PrM/E的同源性与JEV强毒株SA14相比达 98%。     

鱼类传染性胰腺坏死病的病毒学特征、诊断及防治研究

传染性胰腺坏死(Infectious pancreatic necrosis,IPN)主要是鲑科鱼类鱼苗、鱼种的一种病毒性传染病,分为急性、亚急性和慢性3种,其病原为传染性胰腺坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virus,IPNV),死亡率高,给鲑科鱼类特别是大西洋鲑(Salmon salar)、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)的养殖业造成了严重的经济损失.我国在20世纪80年代中期至90年代初曾报道过此病的爆发,而后国内的流行情况偶见报道;鉴于此病在世界上其他养殖鲑鳟鱼类的国家大面积发生且危害巨大,笔者综述了国内外学者的相关研究,讨论了存在的一些问题与展望.     

大熊猫血液标本放置时间对全血细胞计数的影响

为了探讨血液标本放置时间对大熊猫全血细胞计数的影响,试验采用平行试验的方法测定了28只健康成年大熊猫静脉血在120 min内放置不同时间时,红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)、红细胞比容(HCT)平均值的差异。结果表明:血液标本放置60分钟时RBC、HGB、WBC基本无变化,与即检结果相比差异不显著(P>0.05),放置15,30,45,90,120分钟时与即检结果相比差异显著(P<0.05)。PLT随着放置时间的延长有上升趋势,但差异不显著(P>0.05)。HCT在血液标本放置30 min以内均无显著差异(P>0.05),放置45 min后均呈显著性差异(P<0.05)。综合分析各项细胞计数测定结果认为,经乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝的大熊猫全血标本,若采血后不能及时检测,应在放置60 min后再进行测定,可提高结果的准确性。