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71.
含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒的构建 总被引:6,自引:2,他引:6
将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入转移载体质粒pPI-2.EGFP中,构建了含PPV VP2基因及其EGFP报告基因的PRV基因缺失表达载体质粒pPI-2.EGFP.VP2。采用磷酸钙转染系统,将pPI-2.EGFP.VP2 DNA和PRV DNA共转染Vero细胞后通过直接荧光观察、Dot-blot核酸杂交筛选得到几株重组病毒,将其中一株(命名为SA215-B)DNA用BamHI酶切和Southern转印杂交进一步验证重组病毒构建成功,并通过SDS-PAGE电泳和Western免疫印迹检测表明PPV VP2基因在重组病毒内获得表达,产生大小约93ku的融合蛋白,同时融合蛋白中的PPV VP2结构蛋白仍然保持了原有的反应原性,表明成功构建了含绿色荧光蛋白基因的猪细小病毒病-伪狂犬病重组病毒。 相似文献
72.
日本脑炎病毒及其疫苗的研究 总被引:9,自引:0,他引:9
乙型脑炎病毒又称日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV),简称乙脑病毒,属于黄病毒科(Flaviridae)黄病毒属。由乙脑病毒引起的疾病乙型脑炎(简称乙脑)是严重威胁人畜健康的一种中枢神经系统的急性传染病。以蚊为媒介而传播,以高热和狂暴或沉郁等神经症状为特征。具有明显的季节性和一定的地理分布区,多发生于蚊虫较多的夏秋季节,属于自然疫源性疾病,病毒通常在蚊-猪-蚊等动物间循环。猪被认为是JEV最重要的自然增殖动物。怀孕母猪感染后导致流产和死胎,公猪感染后睾丸有急性炎症反应。 相似文献
73.
74.
ORF3基因缺失对猪圆环病毒Ⅱ型感染复制能力的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
设计1对特异性引物AF-P1/AF-P2,从疑似PCV2感染的病料中扩增获得1 767 bp的PCV2全基因组(命名为PCV2-CD),克隆至pMD18-T Simple载体构建重组质粒pTS-PCV2-CD.序列分析表明:PCV2-CD与GenBank中公布的12个PCV2毒株间的同源性高达95.0%~100%.用Nco Ⅰ酶切pTS-PCV2-CD获得4 459 bp线性目的DNA片段,补平CATG 4个碱基、连接环化构建ORF3基因插入缺失重组质粒pTS-PCV2-CD-C并测序.用Sac Ⅱ酶切pTS-PCV2-CD-C.回收1 771 bp线性目的片段,体外连接环化构建了ORF3基因缺失突变毒株mPCV2-C.PCR-RFLP检测表明,在脂质体转染法转染mPCV2-C、培养并盲传4代的IBRS-2细胞中(PCVl阴性),特异性检测到mPCV2-C的DNA;电镜观察发现,在盲传6代的IBRS-2细胞胞核内观察到突变毒株的病毒颗粒.试验结果表明:ORF3基因缺失突变毒株mPCV2-C具有感染性,能够在IBRS-2细胞中复制增殖,证实ORF3基因不是PCV2复制的必需基因. 相似文献
75.
试验以49日龄的仙湖鸭为对象,以樱桃谷鸭为参照。对其肌肉的常规生化成分及氨基酸分析的结果表明:仙湖鸭和樱桃谷鸭的必需氨基酸含量为34.32%±0.81%和33.84%±0.62%,其中精氨酸含量最高,苏氨酸含量最低;非必需氨基酸含量为25.96%±0.65%和25.71%±0.73%,其中谷氨酸含量最高,胱氨酸含量最低;总氨基酸含量为60.28%±1.18%和59.55%±1.09%。上述各项指标在2个品种之间,差异都不显著(P>0.05)。鲜味氨基酸总含量为20.14%±1.49%和19.71%±1.36%,其中谷氨酸含量最高。天冬氨酸、谷氨酸和缬氨酸及鲜味氨基酸总量在2组中均呈显著性差异(0.01
相似文献
76.
猪圆环病毒Ⅱ型ORF3基因缺失突变毒株对仔猪的致病性及免疫原性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
15头28~30日龄健康仔猪分成A、B、C3组(5头/组),分别肌注接种PCV2ORF3基因缺失突变毒株mPCV2-C、亲本毒株PCV2-CD以及生理盐水。用PCR-RFLP和PCR方法,分别从A组和B组屠宰仔猪的腹股沟淋巴结中特异性检测到mPCV2-C和PCV2-CDDNA,发现mPCV2-C能够在仔猪体内复制增殖。组织病理学结果表明;A组和B组腹股沟淋巴结、肝细胞及肺泡壁上皮细胞呈现病变,其中B组病变较严重,证实ORF3基因缺失未改变PCV2的组织嗜性。外周血T淋巴细胞亚群含量动态检测结果表明:与C组相比,A组、B组外周血CD3^+、CD4^+细胞百分含量降低,而A组CD8^+细胞于免疫后第14天回升,高于B组和C组,表明ORF3基因缺失使病毒对T淋巴细胞亚群的影响有所减弱,并有诱导仔猪细胞免疫应答的趋势。上述结果提示ORF3缺失致使病毒的致病力有降低的趋势。PCV2抗体动态检测发现:mPCV2-C明显诱导了仔猪的体液免疫,具有良好的免疫原性。mPCV2-C可作为PCV2基因缺失疫苗候选毒株。 相似文献
77.
通过鸡胚接种、MDCK细胞培养、血凝及血凝抑制试验、RT-PCR等方法,笔者在四川首次分离并鉴定了1株既能在鸡胚上稳定传代又能在MDCK细胞上稳定产生CPE的H3N2亚型猪流感病毒,命名为A/swine/Sichuan/01/2006(H3N2);NS基因的测序结果表明:该病毒分离株与A/swine/HongKong/4361/99(H3N2)、A/NewYork/429/2003(H3N2)、A/Queensland/6/2000(H3N2)、A/New South Wales/4/1999(H3N2)等具有代表性的标准毒株的同源性都达到99%;从MDCK细胞中抽提流感病毒基因组进行全基因克隆,构建了11个包含全基因8个基因片段的文库。全基因测序结果表明,A/swine/Siehuan/01/2006(H3N2)共8个节段,全基因序列共计13577bp;基于HA、NA推导蛋白的无根进化树结果显示,四川分离株与人流感标准株A/Queensland/6/2000(H3N2)、A/South Australia/81/2000(H3N2)有较近的亲缘关系,而与猪流感标准株A/swine/Spain/42386/2002(H3N2)的亲缘关系较远。 相似文献
78.
79.
伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)是疱疹病毒科a疱疹病毒亚科的成员,临床上引起Aujeszky氏病(Aujeszky's disease,AD)。根据该病毒感染细胞后DNA转录、表达时间的先后可将PRV基因分为立即早期基因(immediate—early gene,IE),早期基因(earlygene)和晚期基因(late gene),这3种基因产物以瀑布方式调节。现已证实伪狂犬病病毒只含一个立即早期基因——IE180基因,该基因对病毒在动物体内的复制至关重要,只有IE180基因开放转录、并翻译成IE180蛋白,其下游的基因才能在IE180蛋白的激活作用下得以完全开放转录,否则病毒复制将不能完成。IE180基因的表达产物IE180蛋白是一个多功能蛋白,不仅能激活同源蛋白基因启动子,而且能激活某些异源蛋白基因启动子。此外,IE180蛋白还具有诱导机体产生免疫保护的功能。IE180的转基因小鼠能够抵抗PRV的攻击,但最近发现IE180在小鼠体内的表达会导致小鼠小脑发育异常,表现出共济失调、震颤等症状。 相似文献
80.
猪传染性胃肠炎病毒SC-1株的分离与基因7的克隆分析 总被引:1,自引:0,他引:1
从四川某猪场采集疑似病例的腹泻粪样中分离到1株病毒,该病毒经过ST细胞传代培养盲传至第4代时出现病变。通过荧光抗体染色、病毒中和试验、TCID50试验、核酸类型鉴定,结合样品正染后在电镜下的观察结果,确定该毒株为猪传染性胃肠炎病毒,命名为TGEV SC-1株。参照GenBank中收录的TGEV基因7的序列设计了1对特异性引物,以SC-1株的细胞增殖毒的总RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得了大小约为303 bp的基因片段,包括完整的基因7序列片段(237 bp),在GenBank上的登录号为DQ437507。核苷酸和推导的氨基酸序列比较分析结果表明,该毒株与其他毒株的同源性均在92.4%以上,TGEV SC-1株与美国的PURDUE和中国的TH-98毒株亲缘关系最近;与日本各分离毒株、中国TS株、美国Miller株、中国台湾TFI株和英国96-1933株的同源性较低。TGEV基因7在密码子使用的选择上,存在较大的偏向性;基因7编码蛋白在两端存在有明显的疏水性区域,在2~24和56~75位氨基酸残基处存在跨膜结构。 相似文献