大口黑鲈IGF-I基因内含子1、3和4序列多态性研究

根据大口黑鲈IGF-I基因的cDNA序列设计引物,克隆IGFI基因内含子核苷酸序列,采用PCR产物直接测序方法,在中国养殖群体和美国野生群体中筛选IGF-I基因内含子上的多态位点。应用RFLP、CRS—RFLP和SSCP技术建立多态位点的检测方法,同时比较分析其中4个多态位点在两个群体中基因频率分布。结果表明：（1）IGF-I基因内含子1、3和4序列长分别为1317bp、712bp和1941bp;（2）在3个内含子上共发现7个多态位点,其中在内含子1的208和1070位为G—A突变;内含子3的第40个碱基为一个“A”的插入-缺失突变,第307位为C—T突变,683位是G—A突变;内含子4上的696碱基处有一个20bp的插入-缺失突变,在1563位为G—A突变,表明大口黑鲈IGF-I基因序列上存在较多的SNPs;（3）内含子1上SNPG1070A的A等位基因能为HindIII限制性内切酶识别,采用RFLP技术分型。根据内含子1上SNPG208A侧翼序列,设计错配引物,使错配碱基和A等位基因共同形成TaqI酶切位点,建立CRS—RFLP检测方法。内含子4上SNPG1563A采用SSCP检测方法,同时对内含子4上的插入-缺失突变进行PAGE电泳分型。试验结果显示,RFLP、CRS—RFLP和SSCP三种SNP检测方法简单易行,适于在水产动物SNP标记研究中推广应用;（4）在中国养殖群体中,只有内含子1上的SNPG1070A具有多态性,其它3个多态位点只在美国野生群体中存在多态,证实中国养殖群体的遗传多样性相对较低。     

用线粒体DNA D-loop区序列探讨盘丽鱼属鱼类系统分类

迄今盘丽鱼属鱼类主要根据形态学特征进行分类，该属仅有一个种还是两个不同的种存在着争议。为了研究几种盘丽鱼属鱼类的亲缘关系，从分子水平探讨它们的分类地位，对绿盘丽鱼（Symphysodon aequifasciata aequifasciata）、褐盘丽鱼（S．a．axelrodi）和盘丽鱼（S．discus）共12个个体的线粒体DNA控制区（mtDNA D-loop）部分序列进行了分析，用邻接法和非加权组平均法构建了分子系统树，得到相同的拓扑结构。结果表明：盘丽鱼种内个体间的遗传距离为0．004～0．015；绿盘丽鱼与盘丽鱼间的遗传距离为0．042～0．050，褐盘丽鱼与盘丽鱼间的遗传距离为0.034～0．038，绿盘丽鱼与褐盘丽鱼间的遗传距离为0．050。盘丽鱼和绿盘丽鱼、褐盘丽鱼种间差异与绿盘丽鱼和褐盘丽鱼亚种间差异接近，推测盘丽鱼可能还没有分化到种的水平。     

团头鲂和广东鲂生长激素cDAN的分子克隆和序列分析

从团头鲂（Megalobrama amblycephala）和广东鲂（Megalobrama hoffmanni）的脑垂体组织提取总RNA,采用3′－RACE－PCR的方法,从中扩增出编码两种鲂生长激素（growth hormone,GH）成熟肽的cDNA序列,克隆到pGEM-T Easy Vector载体上。克隆的团头鲂和广东鲂GHcDNA均包括编码188个氨基酸残基的GH成熟肽序列和3′端的非翻译区,但不含信号肽序列和5′端非编码区。序列分析结果表明,团头鲂和广东鲂GH的碱基序列和推测的氨基酸序列的同源性分别为99％和100％。     

广东鲂(♀)×团头鲂(♂)杂交子一代及其双亲染色体组型的分析

采用活体肾细胞直接制片法制作了广东鲂(Megalobramahoffmanni)♀和团头鲂(Megalobrama aamblycephala)♂及其杂交子一代的染色体.广东鲂、团头鲂和其杂交子一代的染色体数目均为2n=48,最大的染色体对均在SM组.广东鲂的染色体组型为26m+18sm+4st,总臂数NF=92;团头鲂的染色体组型为26m+22sm,总臂数NF=96;杂交子一代的染色体组型及总臂数与母本广东鲂的相同.广东鲂和团头鲂的染色体组型较相似,从细胞遗传学的角度解释了广东鲂与团头鲂杂交成功、杂种后代可育的原因.     

中国养殖大口黑鲈的亚种分类地位探讨

采用形态学方法和微卫星特异分子标记两种方法鉴定了中国养殖大口黑鲈Micropterus salmoides的分类地位。结果表明：中国养殖大口黑鲈的侧线鳞为58～68片,肋骨数为15对,这与原产地大口黑鲈北方亚种较一致;选择鉴别两亚种的特异性微卫星标记（Md06、Msal21）对中国养殖大口黑鲈进行特异性扩增,并以原产地大口黑鲈佛罗里达亚种和大口黑鲈北方亚种样品作为对照,结果为中国养殖大口黑鲈的特异性扩增片段大小和原产地北方亚种扩增条带相同。综合形态学和分子标记两方面的结果,表明中国养殖大口黑鲈应属于大口黑鲈北方亚种Micropterus salmoides salmoides。     

橙色莫桑比克罗非鱼微卫星遗传多样性分析及其与尼罗罗非鱼差异位点的筛选

用33对在尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）中能有效扩增的微卫星引物,对橙色莫桑比克罗非鱼（Oreochromis mossambicus）进行PCR扩增,结果有32对引物能获得稳定的特异性条带,占总数的97．0％,其中15个微卫星位点具多态性,表明大部分尼罗罗非鱼的微卫星位点存在于橙色莫桑比克罗非鱼中。用具多态性的15个微卫星位点,对橙色莫桑比克罗非鱼30尾个体进行扩增分析,结果共检测到44个等位基因,大小在113～232bp之间,平均多态信息含量（PIC）为0．4308,平均观测杂合度（鼠）为0．5489,平均期望杂合度（垃）为0．5248,个体间平均遗传距离为0.3132,表明所选橙色莫桑比克罗非鱼群体遗传多样性较丰富,种群结构比较合理。本研究还对尼罗罗非鱼和橙色莫桑比克罗非鱼间特异位点进行了分析,发现有7个位点（UNH899、UNH208、UNH853、UNH876、UNH222、UNH933、UNH773）可有效区分莫桑比克罗非鱼和尼罗罗非鱼,可作为罗非鱼种质鉴定的分子标记。[中国水产科学,2008,15（3）：400-406]     

外源性红色荧光蛋白基因(RFP)在转基因唐鱼中的整合分析

转红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)基因唐鱼(Tanichthys albonubes)的遗传符合孟德尔分离定律,为进一步了解RFP基因在转基因唐鱼基因组上的整合特点,采用PCR和Southern印迹检测转植基因的拷贝数和连接方式.结果表明,转植基因是以单位点、多拷贝(2～3个拷贝)、头尾相接(head-to-tail)的串联体形式整合.应用基因组步移技术分别克隆出1.0和1.2 kb的转植基因整合位点5'和3'侧翼区序列.序列分析表明,5'侧翼区为宿主唐鱼基因组序列,在GenBank数据库中经BLAST分析后未发现有同源序列;3'侧翼序列与P1噬菌体部分基因组序列同源性达到99%,非转基因唐鱼基因组中未检测到该侧翼序列.研究结果为转红色荧光蛋白基因唐鱼的遗传稳定提供了评价依据.     

金鱼品系的遗传多样性分析及亲缘关系初探

采用RAPD技术对草金(Grassgoldfish)、红龙睛(Red dragoneye goldfish)、鹤顶红(Red-head wen goldfish)、水泡(Blisters-eye goldfish)、黑寿(White-head oval goldfish)等5个金鱼代表品种的遗传多样性及其亲缘关系进行研究。用14个引物在5个金鱼群体中共检测出116个位点,其中多态性位点27个。金鱼群体总的DNA多态位点百分率为23.3%。结果表明,5种金鱼群体间的遗传相似性指数均在0.8759￣0.818之间,存在一定的差异,但未达到显著水平,群体间遗传多样性差异不明显。群体间遗传相似性度最小的为草金和黑寿(0.8759),其遗传距离最大(0.1241),说明这2种群体亲缘关系最远;鹤顶红与黑寿的遗传相似性度最大(0.9182),其遗传距离最小(0.0818),可推断两者的亲缘关系较近。UPGMA法和NJ法的聚类分析显示,草金和红龙睛,鹤顶红和黑寿有较近的亲缘关系,这与传统金鱼品种演化关系的观点一致。研究金鱼遗传多样性对保护金鱼的种质资源有重要意义。     

5个罗非鱼群体的遗传分析与分子标记

采用经过筛选的15条随机引物对奥利亚罗非鱼Oreochromis aureus(Au)和4个尼罗罗非鱼群体Oreochromis niloticus即尼罗美国群体Ⅰ(AnⅠ)、美国群体Ⅱ(AnⅡ)、美国群体Ⅲ(AnⅢ)、“吉富”群体(GF)进行RAPD分析。结果发现：1)各罗非鱼群体内的平均遗传相似度依次为Au(0．9236)、AnⅠ(0．8158)、AnⅡ(0．7813)、AnⅢ(0．7853)、GF(0．7458);Au与AnⅠ、AnⅡ、AnⅢ及GF的种群间平均遗传距离分别为0．3154、0．2755、0．2685和0．2392。2)用引物S509、S506、S471扩增出具有群体特异性的带,其中用S509扩增的1600bp、2000bp两片段为4个尼罗群体所特有,可作为区别Au的分子标记;用S506扩增的2000bp片段为AnⅠ、AnⅡ、GF所特有,可以作为与AnⅢ区别的分子标记;用S471扩增的150bp片段为AnⅡ所特有,可作为区别GF和AnⅠ的分子标记。     

大口黑鲈开口摄食与转食人工配合饲料期消化系统发育特征

本研究利用组织切片和扫描电镜技术,观察和研究了2~30日龄大口黑鲈(Micropterus salmoides)仔鱼消化系统的发育过程及组织学变化。结果显示,在水温为(23±1)℃条件下,0~4日龄仔鱼消化道初步分化,为内源性营养期;4~6日龄仔鱼消化道逐渐分化形成食道、胃和肠,胃和肠黏膜褶形成,肝胰脏细胞团出现,仔鱼具备基本摄食能力,进入混合性营养期;10~16日仔鱼消化道和消化腺结构分明,胃、幽门盲囊、肠道紧密排列,肝脏和胰脏独立,进入外源性营养期,此阶段后可逐步转食人工配合饲料。20~30日仔鱼胃腺发达,胃和肠道出现次级黏膜褶,幽门盲囊黏膜褶显著增多、增长,肝脏逐渐出现脂肪积累区,胰脏可见酶原分泌颗粒,肝胰脏组织结构近似成鱼。扫描电镜显示,30日仔鱼胃部内表皮具有丰富的网状黏膜褶,胃小凹间分布着密集的分泌孔;幽门盲囊和肠道内表面结构相似,无固定形态的黏膜褶上布满黏液细胞和分泌孔。20日龄后仔鱼具备转食人工配合饲料的能力。此外,在仔鱼开口和转食人工配合饲料过程中,部分死亡个体的胃肠组织表现出腔体扩大或皱缩,内表皮无成型的黏膜褶或黏膜层脱落,胃和肠道组织损伤。本研究可为大口黑鲈仔鱼开口和转食人工配合饲料条件的优化提供组织学基础资料。