南京地区池塘水中嗜水气单胞菌的分离鉴定与相关毒力基因检测

嗜水气单胞菌在自然界广泛存在,是一种典型的人-兽-鱼共患病病原菌。本研究收集南京市多处湖泊池塘水样,采用增菌、平板分离培养、生化试验和种特异性16S rRNA基因扩增等进行嗜水气单胞菌的分离鉴定;采用PCR技术检测分离株毒力基因的分布,进一步通过动物试验确定是否为致病性菌株。结果,从28份水样中共检出嗜水气单胞菌7株,检出率达25%;其中致病性菌株4株,占被检嗜水气单胞菌总数的57.14%(4/7)。本研究有助于了解南京市水体环境中嗜水气单胞菌的污染情况,为进一步预防该菌所引起的相关疾病的发生和传播提供理论依据。     

浙江省肉猪生态足迹及饲养阈值分析

生态足迹（EF）是指生产已知人口所消费的所有资源和吸纳其产生的所有废弃物所需要的生物生产性土地面积,与之对应的生物承载力即是指区域内部生物生产性土地的面积。生态足迹方法由加拿大生态经济学家Rees于1992年提出,并经Wackernagel和Rees发展为生态足迹分析法。     

规摸猪场肥育室空气细菌总数测定

1材料与方法 1.1材料 1.1.1设备与器材:生化培养箱、高压灭菌器、放大镜、玻璃平皿等. 1.1.2试剂:营养琼脂购自杭州天和微生物试剂有限公司公司.     

基因组步移技术扩增嗜水气单胞菌J-1株脂酶基因全长及原核表达

根据已发表的引物序列合成一对引物,以嗜水气单胞菌J-1株基因组为模板扩增脂酶基因,得到一个保守的383 bp基因片段。进一步应用基因组步移技术扩增其两侧未知序列,分别以DraⅠ,EcoRⅤ,PvuⅡ,ScaⅠ,StuⅠ,SmaⅠ6个内切酶酶切的基因组构建6个不同的基因组步移文库,再以基因组步移文库为模板,设计引物向已获得的保守片段两侧进行PCR扩增,将扩增到的两侧序列与保守片段拼接后得到一个3 476 bp的片段,通过DNA Star软件分析,找到一个2 415 bp的开放阅读框,经Blast软件分析,其与嗜水气单胞菌ATCC 7966脂酶、嗜水气单胞菌AH-3磷脂酶A1、嗜水气单胞菌H3脂酶、嗜水气单胞菌Mcc-2脂酶、嗜水气单胞菌J MP636磷脂酶C的序列同源性分别为97%、97%、88%、83%和82%。将DNA序列翻译成氨基酸序列后,发现其包含一个多肽序列(VHFLGHSLGA),这个序列在脂酶中高度保守。     

猪带绦虫六钩蚴cDNA文库的构建与筛选

在体外将猪带绦虫虫卵孵化为有活力的六钩蚴。采用商品化试剂盒抽提六钩蚴总 RNA、m RNA,反转录为双链c DNA,再加 Eco R Adapter。在去除小片段后 ,dsc DNA与 λgt11噬菌体 DNA连接 ,经蛋白包装 ,构建了猪带绦虫六钩蚴λgt11c DNA文库。该文库效价为 3.5× 10 9pfu/ m L ,重组 DNA片段大小为 0 .5～ 3.2 kb,平均为 1.6 kb,蓝白斑比 1∶ 9。用抗体探针对文库进行免疫学筛选 ,在消除非特异性反应的基础上筛选约 10 6 重组子 ,共得到 118株强阳性克隆 ;应用 PCR鉴定上述部分阳性克隆 ,均扩增到 0 .5 kb以上的片段。结果显示 ,构建的文库合格 ,含六钩蚴所有抗原基因 ,可用于六钩蚴 c DNA克隆的筛选 ;用免疫学与 PCR联合筛选 c DNA文库 ,可消除假阳性     

从非法屠宰的猪肉中检出猪链球菌2型

从送检的非法屠宰的猪肉中分离到1株链球菌,结合其培养特性、生化特性、血清定型、PCR鉴定、动物实验等对其进行了鉴定。用国际通用的链球菌乳胶分型诊断液检测,结果表明其不属于链球菌兰氏分群的A～G群。但它凝集猪链球菌2型标准阳性血清,三重PCR扩增及测序结果表明其为猪链球菌2型。分离菌具有猪链球菌2型的CPS、MRP、EPF、SLY、ORF2五种主要毒力因子;将分离株人工静脉注射新西兰兔4只,均在12～24h均死亡,腹腔注射8只BALB/c小鼠后,3周内死亡5只,3只未死亡。     

前列腺素在畜牧业生产上的应用

前列腺是雄性家畜的一个副性腺,位于尿生殖道起始部背侧,开口于尿生殖道中。它分泌的物质为精液的组成部分。以前列腺命名的前列腺素最初是从精液中发现的,当时误认为是前列腺分泌的,故称其为前列腺素,英文缩写为PG．。后来研究证实,精液中的前列腺素其实是另一个副性腺精囊腺分泌的。进一步研究发现,不仅是精囊腺,家畜的心、脑、肺、肾、胃、肠、睾丸、卵巢、子宫等器官及多种组织也都能产生前列腺素,可以说前列腺素几乎存在于家畜的各种组织和体液中。     

免疫亲和-光化学柱后衍生高效液相色谱荧光法测定花生粕中黄曲霉毒素的研究

研究建立了光化学柱后衍生-高效液相色谱(HPLC)-荧光检测器测定花生粕中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的方法。甲醇/水提取样品中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2,Afla-P黄曲霉毒素免疫亲和柱净化,经高效液相色谱分离后,由光化学柱后衍生,通过荧光检测器测定。结果表明:在优化条件下,黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的检出限分别为1.0、0.3、1.0μg/kg和0.3μg/kg,回收率为67.0%～117%,相对标准偏差(RSD)低于18.2%。该方法简便快速、灵敏度高、重现性好,满足饲料用花生粕中黄曲霉毒素检测的需要。     

大肠杆菌热敏肠毒素B亚基的原核表达及生物学活性分析

从大肠杆菌K88（LT＋,ST＋）菌株中扩增热敏肠毒素B亚基基因（ltb）,得到454 bp片段,克隆至pMD18-T载体后,与pET32a（＋）定向连接,并转化入大肠杆菌BL21中,用IPTG 30℃诱导表达重组LTB蛋白。SDS-PAGE显示,重组蛋白分子量约为34 kDa,超声波裂解后,表达产物主要以包涵体形式存在。经鉴定,纯化复性后的LTB蛋白保留部分与GM1结合的生物学活性。     

几种抗菌药物对猪传染性胸膜肺炎的临床疗效试验

本试验分别以佳木斯市周边地区10个规模化生猪养殖场内经确诊为猪传染性胸膜肺炎的病猪为给药对象,进行抗菌药物单独使用与联合使用疗效比较试验。每场选择（80±6）头猪,随机分为4组,3个试验组每组20头,其余为对照组,进行药敏试验并根据试验结果选取敏感药物进行治疗试验。药敏试验结果表明,试验动物对氟苯尼考和盐酸多西环素敏感。临床治疗试验结果表明,在给药方案中氟苯尼考和盐酸多西环素联合用药组对猪传染性胸膜肺炎治愈率显著高于其单独用药组（P〈0．05）,治疗效果好。