卵形鲳鲹Tf、TNFα和C-Lys的组织分布及对美人鱼发光杆菌感染的响应

研究了卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)中免疫相关因子转铁蛋白(Tf)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、C-型溶菌酶(C-Lys)的组织表达分布,并分析了这3种基因在人工感染美人鱼发光杆菌杀鱼亚种(Photobacterium damselae subsp.piscicida)后在卵形鲳鲹肾脏中的表达变化,探讨其对美人鱼发光杆菌感染的反应。结果显示,感染后第48小时卵形鲳鲹累计死亡率最高(76.4%);卵形鲳鲹肾脏中细菌数量从第3~第96小时一直处于下降趋势,从1.07×106CFU·g~(-1)下降到1.29×103CFU·g~(-1)。健康卵形鲳鲹中Tf和TNFα在肝脏中表达量最高,CLys在头肾中表达量最高。美人鱼发光杆菌感染后卵形鲳鲹肾脏中Tf表达量在第3~第12小时实验组高于对照组,其中第6小时的表达量最高,是对照组的17.99倍;TNFα在感染后的第3、第6、第24小时实验组的表达量高于对照组,第24小时组相对于对照组的表达量最高,是对照组的6.05倍。C-Lys在感染后感染组表达量均低于对照组。以上结果表明,美人鱼发光杆菌感染能促进卵形鲳鲹肾脏组织中Tf、TNFα的表达,而抑制C-Lys的表达。     

抗对虾白斑综合症病毒(WSSV)中草药的筛选及番石榴叶水提取物对WSSV致病性的影响

通过人工感染试验,比较了11种中草药水提取物对对虾白斑综合症病毒(WSSV)致病性的影响,在此基础上,研究了番石榴叶水提取物的浓度和处理时间对WSSV的消毒效果。结果表明,在11种中草药提取液中,仅有番石榴叶水提取物对WSSV有显著的杀灭作用,处理时间超过12 h可使WSSV失活,消毒效果与药物和病毒的相对浓度相关。     

从珍珠龙趸体内分离的1株创伤弧菌的鉴定及耐药性分析

为研究创伤弧菌Vibrio vulnificus对药物的敏感性,减少珍珠龙趸养殖业中的病害影响,从患病珍珠龙趸(pearl gentian)(棕点石斑鱼Epinephelus fuscoguttatus♀×鞍带石斑鱼E.lanceolatus♂)肝肾中分离出一株病原菌,编号为X11XC26,并对其进行了鉴定及耐药性分析。经攻毒试验证明,该菌对斜带石斑鱼E.coioides有较强的致病性,半数致死浓度(LD_(50))为1.70×10~5CFU/g,呈急性感染型;对该菌株进行常规生理生化试验、API(32E)系统鉴定和16S r DNA、rct B、top A、mre B、rpo D等5种管家基因序列分析,可将该菌株鉴定为创伤弧菌;通过纸片扩散K-B法测试了该菌株对16种药物的敏感性,结果显示,该菌株对氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星和阿莫西林5种药物敏感,对多粘菌素B等11种药物不敏感。本研究中从患病珍珠龙趸体内分离出创伤弧菌在国内属首次报道,而该菌株较强的耐药性应引起人们的关注。     

维氏气单胞菌重要致病因子基因对环境条件的响应

鞭毛蛋白(Flagellin)、密度感应系统(Quorum sensing, QS)和Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ secretion system, T3SS)是与维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)致病性相关的重要因子,且受多种环境条件的共同调控。为研究外界环境因子变化对维氏气单胞菌致病因子的影响,以2株维氏气单胞菌的ascF、fliE和luxR致病因子为研究对象,通过实时荧光定量PCR技术从转录水平上探究了ascF、fliE和luxR基因对温度、pH、无机盐离子和培养转速等环境因子的响应。结果表明,维氏气单胞菌的3个基因对偏酸性环境(pH 6.5～7.0)、中低培养转速(150～210 r·min^-1)和锌离子(Zn²⁺)、镁离子(Mg²⁺)为正响应;2株不同分子分型的维氏气单胞菌的3个基因的响应模式各有不同,说明了2株不同分子分型的维氏气单胞菌的致病机制可能有所差异;另外,维氏气单胞菌的重要致病因子受环境条件的调控,而呈现不同的变化规律,为进一步分析维氏气单胞菌的发病机制提供参考。     

养殖池塘14株芽孢杆菌的分离鉴定及抑菌效果

为了研究芽孢杆菌（Bacillus spp.）的抑菌效果,以40株水产病原菌作为指示菌,用平板法分析14株芽孢杆菌（来自养殖池塘水体,命名为SCS-158～SCS-171）的抑菌效果。结果发现：14株芽孢杆菌的24 h培养的全菌液对水产病原菌的抑菌率最高,达20.00%,其中,芽孢杆菌SCS-160、SCS-162、SCS-170对病原菌中的全部维氏气单胞菌（Aeromonas viridis）都有抑菌作用。14株芽孢杆菌中,有10株对白葡萄球菌（Staphylococcus albicans）18QW206有抑制效果。以白葡萄菌（S. albicans）18QW206为指示菌,与24 h培养的全菌液相比,芽孢杆菌的24 h培养的上清液及48 h培养的全菌液的抑菌效果均有所下降。其中,芽孢杆菌SCS-162上清液抑菌效果下降最明显,抑菌圈直径下降28.55%,芽孢杆菌SCS-164上清液抑菌圈直径下降幅度最小,为5.35%;48 h培养液抑菌效果中,芽孢杆菌SCS-160抑菌圈直径下降幅度最大（42.86%）,芽孢杆菌SCS-163抑菌圈直径下降幅度最小（4.19%）。说明芽孢杆菌对水...     

军曹鱼Ig κ轻链cDNA克隆及组织表达分析

应用同源克隆和RACE技术克隆了军曹鱼(Rachycentron canadium Linnaeus)Igκ轻链的cDNA全序列,并分析其在组织中的表达.军曹鱼Igκ的cDNA全长969 bp,3'端的非编码区域(UTR)为188 bp,5'UTR为52 bp,开放阅读框为729 bp,编码242个氨基酸,分子量约为26.255 kD,理论等电点7.52.推测的军曹鱼Igκ恒定区氨基酸序列同鰤(Seriola quinqueradiata)、大西洋鲑(Salmo salar)的Ig轻链同源性最高,达77%以上,可变区氨基酸序列与鰤的相应序列同源性最高,达87%.通过构建系统进化树可以看出,军曹鱼Igκ恒定区氨基酸序列同鰤、大西洋鲑的L3、斑点叉尾鲴(Ictalurus punctatus)的G等鱼的轻链均为κ型的聚为一支,同大西洋鲑的L2、斑马鱼(Danio rerios)的L2、鲤(Cyprinus carpio)的L2等均为λ型的明显不同,由此可推断此序列属于Igκ型.利用半定量PCR技术,发现在健康鱼体中κ链基因在肝脏和鳃中的表达量较高,在肠和脑组织中几乎没有表达.经鲨鱼弧菌(Vibrio carchariae)JT2刺激192 h后,κ链基因在采样的各个组织中均有表达,尤其在头肾、肠、鳃和脾中的表达量较正常水平明显升高,而肝的表达量有所下降,脑组织有κ链基因的少量表达.说明经刺激后头肾、脾脏、肠、鳃是免疫球蛋白的主要表达场所,在抵御病原感染过程中发挥着重要作用.     

苍术和番石榴的不同炮制方法及部位对水产病原菌抑制效果的影响

采用微量稀释法,以溶珊瑚弧菌（Vibrio coralliilyticus）、哈维弧菌（旷harveyi）、美人鱼发光杆菌杀鱼亚种（Photobacterium damselae subsp piscicida）、副溶血弧菌（V.parahaemolyticus）、摩氏摩根氏菌（Morganellafulton）、创伤弧菌（V.vulnificus）6种病原菌共7株为受试菌,研究苍术（Atractylodeslancea）不同炮制品和番石榴（Psidiumguajava）不同部位的抑菌作用,并进一步测定其最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。结果显示,番石榴叶和枝果部位以及苍术不同炮制品对溶珊瑚弧菌、美人鱼发光杆菌杀鱼亚种和哈维弧菌抑菌效果较明显,MIC和MBC分别为10^-3g·mL^-1和10^-1g·mL^-1,抑菌效果由高至低依次为番石榴叶〉番石榴果〉番石榴枝,麸炒苍术〉盐炙苍术〉苍术〉醋炙苍术。     

军曹鱼消化系统的形态及组织学研究

利用活体解剖和光镜技术对军曹鱼Rachycentron canadum消化系统进行形态及组织学研究。结果显示,军曹鱼消化道由口咽腔、食道、胃、幽门盲囊、前肠、中肠和后肠几部分组成。口咽腔大,粘膜上皮为复层鳞状上皮,内含少量杯状细胞。食道很短,但上皮包括复层鳞状上皮区和单层柱状上皮区。胃膨大,呈Y形,在贵门和幽门部可观测到杯状细胞,胃体粘膜层下有大量的胃腺细胞。幽门盲囊发达,肠短但分3部分,前肠、中肠和后肠,肠道系数为0．43,肠道由前向后杯状细胞和粘膜皱褶不断减少。消化腺包括肝脏和胰腺,肝小叶分界不明显,肝细胞内脂肪含量丰富,胰腺属于散在性的,其外分泌部有许多腺泡组成,胰岛分散于外分泌部间。     

军曹鱼稚鱼外周血细胞及其形态学观察

以出膜后第60天的军曹鱼外周血液为材料,利用光镜显微技术研究了其血细胞的种类和形态。外周血液包括5种类型的血细胞,红细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞和血栓细胞。血细胞计数测得红细胞密度为(2.97±0.82)×109ind.mL-1,白细胞密度为(1.39±0.94)×106ind.mL-1,淋巴细胞、嗜中性粒细胞、单核细胞和血栓细胞在白细胞中所占的比例分别为(53.00±8.51)%、(17.59±4.28)%、(4.78±1.37)%和(24.63±4.08)%。未见到嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。血细胞计数结果表明,红细胞数量远远大于白细胞,白细胞中淋巴细胞数量最多,单核细胞数量最少。实验还观察到处于分裂状态的红细胞、细胞表面有伪足样胞突的小淋巴细胞和细胞表面有许多微绒毛突起的大淋巴细胞、核呈多种形态的单核细胞和中性粒细胞及不同形态的血栓细胞等。     

几种中草药混合剂对军曹鱼稚鱼生长性能、全鱼营养组成及免疫的影响

供试中草药制剂(TCM)由烘干的板蓝根、大青叶、连翘、黄芪、藿香和沙打旺等6种原料药等量组成,5种供试饲料中TCM的添加量分别为0、0.1%、0.2%、0.4%、0.8%,研究了TCM对军曹鱼生长性能、全鱼营养组成及免疫的影响。结果表明:(1)养殖4周后,各组除了成活率没有显著性差异外,0.1%TCM添加组军曹鱼的增重率和饲料利用率显著优于其他组,且随着TCM添加量的升高,增重率呈下降的趋势而饲料系数升高。试验8周结束时,增重率与前4周的结果相似,对照组的成活率显著低于其他组。(2)投喂不同剂量TCM的军曹鱼肥满度没有显著差异,但肝体比和脏体比随着剂量的增加而呈下降趋势;饲料中添加TCM对军曹鱼全鱼的的水分、粗蛋白和灰分没有显著影响,但0.4%、0.8%TCM添加组的全鱼脂肪含量显著降低。(3)添加TCM可有效提高鱼体的溶菌酶活力和白细胞杀菌活力,随着TCM添加量的升高,溶菌酶活力呈上升趋势,白细胞杀菌活力投喂组显著高于对照组,但不同剂量的TCM添加组影响不显著。添加TCM可有效降低鲨鱼弧菌对军曹鱼的致死率。