益生菌对凡纳滨对虾生长和全虾营养组成的影响

研究了芽孢杆菌制剂（Bacillus sp．,10^9CFU·g^-1）对凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei（初始体重0．03g·尾^-1）生长性能、全虾营养成分和氨基酸的影响。7种试验饲料中芽孢杆菌制剂的添加量分别为0,0．5,1．0,1．5,2．0,2．5和3．0g·kg^-1饲料。芽孢杆菌制剂对凡纳滨对虾的成活率没有显著影响。摄食添加益生菌1．0和1．5g·kg^-1饲料的凡纳滨对虾的增重率高并且饲料系数低于对照组,特别是添加量为1．0g·kg^-1时,差异显著;然而,其它添加量并不存在显著性差异。添加益生菌对凡纳滨对虾全虾的水分、蛋白质和灰分含量的影响不显著;投喂添加益生菌1．0和1．5g·kg^-1饲料,脂肪含量高于对照组。饲料中添加益生菌可以改变凡纳滨对虾全虾中部分氨基酸的含量。     

石斑鱼育苗场传染性病原（病毒）传入途径风险评估指标体系的构建

该研究通过调查、分析主要病毒性传染性病原传入石斑鱼(Epinephelinae)育苗场的风险途径,邀请18位专家,运用德尔菲法进行两轮咨询,对选定病原不同传入途径风险提供重要性评价。初步构建了石斑鱼育苗场传染性病原传入途径风险评估指标体系,其中一级指标4个、二级指标21个。一级指标包含活鱼及卵活动、饵料投喂、水暴露、机械传播共4种风险主题;二级指标包括新引入鱼苗是否隔离检测、饵料鱼虾带毒、养殖供水类型和员工手鞋类消毒等,共同构成传染性病原传入途径的风险因子。该次的德尔菲法专家积极系数及权威程度均较高,第二轮咨询专家的意见已趋于一致,形成的石斑鱼育苗场传染性病原传入途径风险评估指标体系结果可信。     

鲨鱼弧菌LAMP检测方法的建立

采用环介导等温扩增技术(LAMP)成功构建了一种鲨鱼弧菌的检测方法。根据鲨鱼弧菌的rpoA基因序列设计4条引物(内引物F3和B3,外引物FIP和BIP),并对LAMP扩增反应的各物质浓度和反应条件进行优化,确定最佳反应温度为65°C,最佳反应时间为55 min。该法对鲨鱼弧菌纯菌培养物的检测浓度约为2.4×102CFU/mL,结果比PCR法具有相似或更高的灵敏度,而且操作简单,反应后体系变浑浊,肉眼可辨;加入SRYB Gold荧光染料,阳性反应为绿色,阴性对照为浅橘色,更便于观察,有望发展成为快速检测鲨鱼弧菌的一种有效方法。     

神经坏死病毒对卵形鲳鲹的致病性及外壳蛋白基因序列分析

2008年5月,湛江市某网箱养殖场的卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)幼鱼发生大规模死亡,调查发现病鱼呈现体色发黑、反应迟钝、呈螺旋状或旋转游动等典型的病毒性神经坏死症症状,在鱼体没有发现寄生虫或细菌感染,PCR检测发现病鱼感染了鱼类神经坏死病毒(NNV)。利用已经发表的NNV核酸序列设计引物,克隆外壳蛋白基因并测序,根据同源性比较和系统进化分析,该病毒与斜带石斑神经坏死病毒(ECNNV)碱基相似率达99.2%,属于赤点石斑鱼神经坏死病毒基因型(RGNNV)。同时进行人工感染试验,采用4种方法感染该病毒,累计死亡率均达100%,并对感染样品进行克隆测序鉴定,证明导致此次湛江卵形鲳鲹大规模死亡的病原为神经坏死病毒。     

3种美人鱼发光杆菌疫苗对卵形鲳鲹的免疫效果

用美人鱼发光杆菌Photobacterium damselae subsp.piscicida制备外膜蛋白(OMP)、脂多糖(LPS)及甲醛灭活全菌(FKC)3种疫苗,分别腹腔注射卵形鲳鲹Trachinotus ovatus,在免疫后第7、14、21、28天进行尾静脉采血,检测试验鱼的白细胞吞噬活性、溶菌酶活力以及血清...     

低剂量对虾白斑综合征病毒粗提液对斑节对虾体内潜伏期病毒及血细胞的影响

利用含3×103、6×102、2×102copies/mL的对虾白斑综合征病毒(white spot syndromevirus,WSSV)粗提液和PBS液人工注射感染携带病毒量约1×105copies/g的斑节对虾,通过实时定量PCR法、显微镜观察法研究了感染后斑节对虾发病死亡率、肌肉内WSSV含量及总血淋巴细胞数和不同种类血细胞的比例组成变化。结果表明,3种浓度下斑节对虾累积死亡率分别为93.33%±2.89%、56.67%±5.77%和45.00%±5.00%,对照组没有发生死亡。注射3×103copies/mL的浓度组,在注射后30 min时,对虾肌肉内的病毒含量达到最低值(3.54×104copies/g),而后持续上升至48 h时达到最高值(3.12×108copies/g)后再次下降;另两个感染组,在注射后1 h时,肌肉内病毒含量达到最低值(分别为1.11×105、9.54×104copies/g),在感染后6 h时出现一个次高值(分别为1.58×105、1.11×105copies/g),而后又降低,在48 h时达到最高值(分别为1.48×107、5.46×106copies/g)后下降;对照组对虾肌肉内病毒含量没有出现显著变化。不同感染浓度组,斑节对虾总血淋巴细胞数波动幅度和出现峰值的时间不同,特别是注射3×103copies/mL组,对虾总血淋巴细胞数在12和48 h时出现极低值(分别为3.48×106、4.05×106/mL);3个感染组除个别时间点外,对虾总血淋巴细胞数的变化规律与肌肉中WSSV的扩增规律成负相关。4个处理组,半颗粒细胞比例在感染初期呈现明显上升的趋势,后期比例虽有起伏但均维持在较高水平;颗粒细胞和透明细胞比例在感染初期均呈现明显下降的趋势,中期均略有上升,但后期颗粒细胞比例显著低于初期,而透明细胞比例则与初期无显著性差异。     

中草药对海水动物致病菌体外抑制作用的初步研究

以扩散法和稀释法研究了31种中草药对6株海水养殖致病菌的体外抑制作用。结果表明,稀释法比扩散法更适用于中草药体外抑菌研究,扩散法由于受培养基等影响,误差较大,故实验以稀释法结果为主进行分析。同种中草药对不同致病菌抑制作用差异大,其中番石榴（Psidium guajava）、苍术（Atractylodes lancea）、黄芩（Scutellaria）和丁香（Eugenia caryophyllata）对美人鱼发光杆菌杀鱼亚种（Photobacterium damselae subsp．piscicida）,肉桂（Cinnamomum cassia）和火炭母（Polygonum chinense）对副溶血弧菌（Vibrio parahemolyticus）均有强杀灭作用;其次板蓝根（Lsatis tinctoria）、女贞子（Ligustrum lucidum）和白术（Atractylodes macrocephala）的抑菌效果较好,其余中草药抑菌效果差（仅在高浓度下才轻微抑菌）甚至完全无效;同菌株对不同种类中草药的敏感性差异也很明显,且抑菌药物种类少,可见药物筛选试验对针对性用药具有重要意义。稀释法结果显示,相同浓度下同种中草药的药粉比水提取物抑菌效果更好。     

有益微生物的应用对海水对虾养殖池塘中细菌数量动态变化的影响

2001年5~7月,在深圳东海岸水产公司南澳半封闭式斑节对虾Penaeus monodom精养基地,进行了有益微生物的应用对虾塘总异养细菌和弧菌数量影响的调查研究。结果表明,对虾养成过程中,施用有益微生物的实验组虾塘水体中总异养细菌和弧菌数量明显较未施用的对照组虾塘低,但各虾塘水体中总异养细菌和弧菌数量的变化特征基本相同,即在养殖前期,虾塘水体中总异养细菌和弧菌数量均较稳定,并处于相对较低的水平;而在养殖中、后期,总异养细菌和弧菌数量均急剧升高,尤以对照组虾塘的升幅最大,其弧菌数量甚至超过100×102CFU.mL-1的对虾发病之弧菌数量临界值。实验组与对照组虾塘中表层沉积物中,总异养细菌和弧菌数量差异不大,总异养细菌和弧菌数量变化特征也基本相同,但实验组与对照组之间有所差异,其中实验组表现为双峰型的变化特征,峰值出现在养殖前期或中期和养殖将结束时;对照组则呈单峰型变化,峰值均出现在养殖中期。有益微生物的应用对虾塘水体中总异养细菌和弧菌数量的抑制效果较对沉积环境中的效果明显。     

军曹鱼淋巴器官发育的形态学研究

运用组织学及组织化学的染色方法,对出膜后第1～44天(Days post-hatch,dph)的军曹鱼Rachycentron canadum头肾、脾脏和胸腺发育过程进行研究.首先观察到前肾管,3 d后,在肾管附近发现原始的造血千细胞,逐渐有红细胞和大淋巴细胞产生.之后,脾脏出现,其内毛细血管和红细胞丰富,还分布少量巨噬细胞.胸腺虽然是最后出现的淋巴器官,但是发育的非常快,内外分区明显.可以得出其淋巴器官出现顺序是头肾、脾脏和胸腺.在小淋巴细胞出现前,发现各淋巴器官内存在一些与非特异免疫机制相关的细胞,如巨噬细胞和网状细胞等.淋巴器官原基出现后开始淋巴化,其顺序是胸腺、头肾和脾脏.在采样的时间段里未观察到浆细胞,可能军曹鱼淋巴器官至此仍未发育成熟.     

复方中草药添加浓度和投喂策略对凡纳滨对虾抗WSSV能力的影响

为了研究复方中草药添加浓度和投喂方式对凡纳滨对虾抗白斑综合征病毒(WSSV)的影响,试验对连续饲喂添加不同浓度(0%、0.1%、0.2%、0.4%、0.8%)复方中草药饲料12 d、26 d、41 d,饲喂复方中草药饲料9 d后停药17 d,饲喂复方中草药饲料9 d后停药料17 d再恢复复方中草药饲料14 d的对虾分别...