拟穴青蟹致病性副溶血弧菌分离鉴定及药敏试验

[目的]确定引起拟穴青蟹发病死亡的病原菌,并了解其致病性及药敏特性,为该病的临床诊断及科学防控提供理论依据,同时为保障拟穴青蟹养殖业的健康发展打下基础.[方法]采用常规细菌分离纯化方法从患病拟穴青蟹的病料组织中分离优势菌株,通过形态特征观察、生理生化特性鉴定及16S rDNA序列分析进行分类学鉴定,并进行人工感染试验、组织病理学观察及药敏特性分析.[结果]从患病拟穴青蟹肝胰腺中分离得到1株优势菌株(编号NS1SP18),菌株NS1SP18感染拟穴青蟹48 h的半数致死剂量(LD50)为3.18×104 CFU/g,感染发病拟穴青蟹呈现出多体液、偶有黑鳃及肝胰腺暗黄等症状,与自然发病拟穴青蟹的症状相似.综合菌株NS1SP18的形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析结果,可鉴定为副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus).患病拟穴青蟹的肝胰腺细胞发生变性;心肌纤维肿大,细胞坏死,有血淋巴浸润;网状鳃腔结构消失,脱落细胞阻塞鳃腔;肌纤维形变、断裂,局部坏死.菌株NS1SP18对氟苯尼考、恩诺沙星、四环素、多四环素、诺氟沙星、复方新诺明和庆大霉素等7种抗生素敏感,对麦迪霉素、万古霉素和阿莫西林已产生耐药性;对诃子、乌梅、苏木和八角茴香等4味中药极敏,对地榆、女贞子、山楂、五倍子、黄连、半枝莲、赤芍和救必应等8味中药高敏,对应的最小抑菌浓度(MIC)为7.81~31.25 mg/mL,最小杀菌浓度(MBC)为15.62~125.00 mg/mL.[结论]从患病拟穴青蟹分离获得的副溶血弧菌具有较强致病性,能造成严重的组织损伤而导致拟穴青蟹发病死亡.在拟穴青蟹养殖生产中,可适度选用氟苯尼考和恩诺沙星等抗生素抑制副溶血弧菌病暴发流行,或以诃子、乌梅、苏木和八角茴香等中药进行副溶血弧菌病防治.     

斑节对虾养殖池塘藻-菌关系初探

本研究通过对斑节对虾养殖系统中的异养细菌、浮游微藻进行为期3个月的监测，发现浮游微藻和异养细菌的总量都表现为养殖后期高于养殖前期，其中浮游微藻增加了2个数量级，异养细菌增加了1个数量级，施放有益芽孢杆菌群对池塘菌群和藻群的变动有明显的影响。施放有益芽孢杆菌群的池塘，异养细菌总数略低，弧菌数量维持在10^3 CFU／mL以下，浮游微藻平稳增长，蓝藻占20％以下；对照池异养细菌的总数略高，弧菌数量达到10^3 CFU／mL，浮游微藻数量波动，养殖后期蓝藻占60％，为绝对优势种群。表明有益芽孢杆菌群有促进浮游微藻平稳繁殖的作用，但对浮游蓝藻和弧菌的繁殖起抑制作用，浮游蓝藻与弧菌之间具有一定的繁殖相关性。     

方斑东风螺“急性死亡症”的病原病理研究

对海南发生的方斑东风螺（Babylonia areolata）“急性死亡症”进行了病原分离纯化、人工感染试验,以及病原16SrDNA分析和生理生化鉴定。结果显示病原菌为哈维弧菌（Vibrioharveyi）;药敏试验结果显示,该病原菌对常见的抗菌药物如恩诺沙星、复合磺胺等敏感,而对青霉素表现为耐药;组织病理结果显示鳃叶、腹足、肝胰腺、消化道、肾等器官的细胞出现变性、坏死、血细胞浸润等现象。     

三聚体自转运粘附素研究进展

粘附是病原菌感染宿主的第一步,而粘附素在细菌的粘附过程中起着重要的作用,是病原菌一个重要毒力因子。随着对病原菌致病机理研究的不断深入,人们在革兰阴性菌中发现了一类新的粘附素——三聚体自转运粘附素（trimeric autotransporter adhesions,TAAs）。这类粘附素广泛存在于变形菌门,是一类多功能的蛋白,经由细菌的Ⅴ型分泌系统分泌到菌体表面。被分泌到菌体表面的TAAs在大小和氨基序列上存在高度差异,但是它们在结构上却存在惊人的相似,即构成了一个头部-颈部-锚定区这样三聚化的类似于＂棒棒糖＂式的表面结构。文章就其结构、分泌机制和各区域功能进行了描述,以期为进一步的深入研究提供参考。     

军曹鱼MHC-Ⅱα基因全长cDNA的克隆及其组织表达分析

本研究根据其他鱼类MHC-Ⅱα基因的保守序列设计兼并引物,运用同源克隆和末端快速扩增方法扩增了军曹鱼MHC-Ⅱα基因的全长cDNA序列,并对cDNA及其氨基酸序列进行了分析,比较了军曹鱼和其他物种的MHC-Ⅱα氨基酸序列的差异,分析了军曹鱼MHC-Ⅱα基因的组织分布及经LPS刺激后头肾组织中MHC-Ⅱα基因的表达变化。结果表明,军曹鱼MHC-Ⅱα cDNA全长998 bp,包括53 bp的5′末端非编码区（5′UTR）、234 bp的3′末端非编码区（3′UTR）及711 bp的开放阅读框（ORF）,编码236个氮基酸,其蛋白质分子质量约为25.94 ku,等电点为4.39;军曹鱼MHC-Ⅱα蛋白质序列具有一些重要的特征,包括前导肽、α1、α2、CP/TM/CYT区和保守的半胱氨酸等;军曹鱼MHC-Ⅱα与鼠、人及其它鱼类的氨基酸同源性在25.0%～69.5%之间。Real-time PCR检测结果显示,MHC-Ⅱα基因在正常军曹鱼组织中均有表达,但其表达量在各种组织中存在差异,其中较强表达于头肾、鳃,中等程度表达于脾脏、肠,在心脏、脑、肌肉中表达较弱;经LPS刺激后,头肾中MHC-Ⅱα基因表达下调。     

硝态氮对凡纳滨对虾血清免疫相关酶活性的影响

以体质量(8.68±1.62)g、体长(9.31±0.65)cm的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为研究对象,通过48h胁迫,研究了不同质量浓度(4.24 mg·L-1、35 mg·L-1、70 mg·L-1、105 mg·L-1和140 mg·L-1,以氮质量浓度计)硝态氮(NO-3-N)对对虾血清中酚氧化酶(PO)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LSZ)、一氧化氮合酶(NOS)等活性的影响,探讨凡纳滨对虾养殖中NO-3-N的安全质量浓度。结果表明,质量浓度不高于140 mg·L-1的NO-3-N对凡纳滨对虾血清中SOD、PO、AKP、ACP、i NOS、TNOS、LSZ等酶活性的作用主要表现为短期影响;随实验时间增加,组间差异减小;第48小时除35 mg·L-1组外,其他组的诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)活性差异并不显著。     

盐度变化对军曹鱼稚鱼相关免疫因子及其生长的影响

研究了盐度(5、10、20、30及对照37)对军曹鱼(Rachycentron canadum)稚鱼生长及其血清溶菌酶、碱性磷酸酶(ALP)、旁路途径补体(ACP)溶血活性(ACH50)和总免疫球蛋白(T-Ig)含量等免疫因子的影响。实验周期为14 d。结果表明,在逐渐达到设定盐度后养殖14 d,盐度30组稚鱼特定生长率(SGR)最高(5.77%/d),而盐度5和10组的SGR(分别为4.24%/d和4.38%/d)显著低于其他组(P<0.05)。在低盐度环境中血清溶菌酶活性在第7天各组都有不同程度升高,其中以盐度20组升高最为显著,其次为盐度10和30组,但第14天各组溶菌酶活性又都回落至对照组水平;而稚鱼在低盐度环境中血清ALP活性受到明显抑制,且活性与盐度呈一定正相关;各组间ACP活性在第7天各盐度组间无明显差异,但实验结束时盐度5和10两组出现显著升高;而T-Ig含量在盐度10组中始终明显高于其他组。研究显示,军曹鱼稚鱼在盐度20~37范围内都可正常生长,尽管稚鱼有较强的低盐度耐受能力,但过低盐度明显影响其生长率并导致体色变黑、蛀鳍和应激增强等异常表现。此外,盐度变化还影响稚鱼多种免疫相关因子。[中国水产科学,2007,14(1):120-125]     

方斑东风螺急性死亡症的病原病理研究

对海南发生的方斑东风螺（Babylonia areolata）急性死亡症进行了病原分离纯化、人工感染试验,以及病原16S rDNA分析和生理生化鉴定。结果显示病原菌为哈维弧菌（Vibrio harveyi）;药敏试验结果显示,该病原菌对常见的抗菌药物如恩诺沙星、复合磺胺等敏感,而对青霉素表现为耐药;组织病理结果显示鳃叶、腹足、肝胰腺、消化道、肾等器官的细胞出现变性、坏死、血细胞浸润等现象。     

氨氮对拟穴青蟹的急性毒性及对其血清免疫相关酶活力的影响

采用静水法研究氨氮对拟穴青蟹(Scylla paramamosain)的急性毒性及在氨氮初始浓度分别为0(C0,对照组)、10(C10组)、20(C20组)、30(C30组)、40(C40组)、50 mg/L(C50组),胁迫时间分别为0、6、24、48、72 h的条件下对其血清中碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)和酚氧化酶(PO)活力的影响。结果显示,总氨氮对拟穴青蟹24 h和48 h的半致死浓度分别为104.793、66.124 mg/L,安全浓度为7.90 mg/L,非离子氨对拟穴青蟹24 h和48 h的半致死浓度分别为8.396、5.298 mg/L,安全浓度为0.63 mg/L。在胁迫6、24、48与72 h时,各实验组的LZM活力均显著低于对照组(P0.01)。相较于对照组,C10、C20及C40组在24 h的AKP、ACP活力均显著升高(P0.05)。C20组在24 h的SOD活力则显著低于其他胁迫时间点(P0.05)。胁迫72 h时,C30、C40及C50组的PO活力显著高于对照组(P0.05)。该实验条件下,不高于40 mg/L的氨氮可在24 h内使拟穴青蟹血清中的AKP与ACP活力显著升高,而50 mg/L的氨氮则对其具有抑制作用;各实验组浓度氨氮均在72 h内对拟穴青蟹血清中的LZM活力具有显著的抑制作用,对PO活力具有明显的刺激作用,对SOD活力无显著影响。     

益生菌对凡纳滨对虾生长和全虾营养组成的影响

研究了芽孢杆菌制剂（Bacillus sp．,10^9CFU·g^-1）对凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei（初始体重0．03g·尾^-1）生长性能、全虾营养成分和氨基酸的影响。7种试验饲料中芽孢杆菌制剂的添加量分别为0,0．5,1．0,1．5,2．0,2．5和3．0g·kg^-1饲料。芽孢杆菌制剂对凡纳滨对虾的成活率没有显著影响。摄食添加益生菌1．0和1．5g·kg^-1饲料的凡纳滨对虾的增重率高并且饲料系数低于对照组,特别是添加量为1．0g·kg^-1时,差异显著;然而,其它添加量并不存在显著性差异。添加益生菌对凡纳滨对虾全虾的水分、蛋白质和灰分含量的影响不显著;投喂添加益生菌1．0和1．5g·kg^-1饲料,脂肪含量高于对照组。饲料中添加益生菌可以改变凡纳滨对虾全虾中部分氨基酸的含量。