传染性法氏囊病病毒RT-LAMP检测方法的建立

为了建立传染性法氏囊病病毒RT-LAMP检测方法,用于快速检测传染性法氏囊病,从而评估禽类动物健康情况,试验针对传染性法氏囊病病毒VP3序列设计引物,优化反应时间、温度、体系等获取最佳反应参数,对建立的传染性法氏囊病病毒RT-LAMP检测方法的灵敏度、颜色变化、特异性进行研究并应用该方法检测临床疑似病料。结果表明:传染性法氏囊病病毒在60℃75 min和80℃10 min条件下目标核酸区段大量扩增,以此条件成功建立针对鸡传染性法氏囊病病毒的RTLAMP检测方法;在模板浓度为994.9 ng/μL并进行10倍稀释的情况下,所建立的RT-LAMP检测方法具有极高的灵敏性,可以检测到99.49 fg/μL的样品,比RT-PCR方法的灵敏度高100倍左右;在RT-LAMP的检测结果中加入Gene Finder可使阳性结果变为绿色;该方法只有鸡传染性法氏囊病病毒发生反应,表现出良好的特异性;在临床疑似病料检测中,RT-LAMP检测方法的检出率高达93.75%,比RT-PCR检测方法高25.00%。说明试验建立的传染性法氏囊病病毒RT-LAMP检测方法具有简便、灵敏、快速、强异性高等优点,可用于临床鸡传染性法氏囊病病毒的快速检测。     

麻鸡新城疫病毒SX-1株F和HN基因在真核细胞中共表达研究

以山西省农业科学院畜牧兽医研究所预防兽医研究室克隆的pG-F和pG-HN质粒为模板,PCR扩增麻鸡新城疫病毒SX-1株F基因和HN基因,并以由15个柔性氨基酸构成的柔性短肽作为Linker将F及HN基因片段体外连接,插人pCI-neo真核表达载体,构建麻鸡新城疫病毒SX-1株F基因和HN基因共表达载体pCI-F-HN,...     

新城疫病毒SX-1株F基因定点突变及真核表达研究

根据已发表的分离自麻鸡的新城疫病毒SX-1株F基因序列,采用PCR体外定点突变技术,设计2对引物,引物中含有突变位点.应用重叠PCR延伸法,分3次PCR扩增F基因,从而得到突变后的F基因,命名为F基因,使改造后的F基因编码的氨基酸裂解位点为112GlyArg-Gin-Gly-Arg-Leu117.在EeoR Ⅰ和Hind Ⅲ位点将F基因与转座载体pFastBac Ⅰ连接,获得重组质粒,并进行PCR、酶切鉴定,核苷酸序列测定正确的pFastBac-F'质粒转化到DH10Bac宿主茵,将目的基因定向插入到Bacmid质粒中,经筛选获得的重组Bacmid F'质粒转染Sf-9昆虫细胞,并进行表达检测,表达产物间接免疫荧光试验阳性,经SDS-PAGE、Western-blotting检测显示,获得分子量约63 ku的蛋白特异条带,说明F'重组蛋白表达成功.     

鸡大肠杆菌多价复合佐剂灭活苗的研制

鸡大肠杆菌多价复合佐剂灭活苗是采用山西省优势鸡致病性大肠杆菌的菌体碎片作为抗原物质,矿物油和黄芪多糖组成复合免疫增效佐剂研制而成的。通过免疫效果试验、免疫保护期试验及疫苗保存期试验等,结果表明,免疫后7 d,该疫苗即可产生坚强的免疫力,而常规疫苗(对照Ⅱ组)则需14 d;血清抗体滴度于接种后约6周时,O78达到1∶32(最高可达1∶53),并且维持6周以上,而常规疫苗的最高值为1∶18;该疫苗的免疫保护期为5个多月,常规疫苗为4个月;4～8℃贮藏,保存期不低于14个月。实验室和区域试验结果说明该疫苗具有产生循环抗体时间早、安全、免疫保护率高等特点。     

鸡新城疫—减蛋综合症—传染性支气管炎三联油佐剂灭活疫苗的研究及应用

用分离、鉴定、筛选出的病毒株 ,研制成鸡新城疫—减蛋综合症—传染性支气管炎三联油佐剂灭活疫苗。通过实验室免疫效力、安全性、免疫期、保存期和攻毒试验 ,该疫苗强毒攻击保护率为10 0 % ,免疫期 2 0 0d以上 ,保存期在 4 50d以上 ,经大范围应用 ,免疫效果良好。     

仔猪水肿病的分离鉴定与防治

仔猪水肿病是由溶血性大肠杆菌毒素所引起的断奶仔猪眼睑或其它部位水肿、出现神经症状为主要特征的疾病,试验对山西省吕梁地区某猪场送检的疑似仔猪水肿病的猪通过临床症状、病理剖检变化观察,细菌分离培养、生化试验、致病性试验、大肠杆菌O抗原血清型鉴定,结果显示,该病原菌是致病性大肠杆菌O138,通过药敏试验筛选出敏感药物头孢噻肟钠,和中药联用综合治疗,取得很好的疗效。     

H9N2亚型禽流感病毒株的分离和鉴定

用非免疫鸡胚从病死鸡的脑组织中分离到禽流感病毒。此病毒能凝集鸡红细胞,而且这种凝集可以被特异性抗血清所抑制。通过对分离株进行血清学试验、最小致死量致死鸡胚平均死亡时间测定、鸡致病力试验、回归试验,证明该分离株为H9N2亚型禽流感病毒。     

大麦虫绿脓杆菌的分离鉴定和耐药性分析

大麦虫是一种供动物食用的高蛋白虫体。本文就大麦虫突然大量死亡,通过对其体液的培养成功分离到病原菌,革兰氏染色呈红色、瑞氏和姬姆萨染色呈蓝色等着色特点,伊红美蓝琼脂培养呈红色及麦康凯琼脂培养不变色的生物学特性以及产酸、产气、糖发酵等49项生化试验,最终将分离到的细菌鉴定为绿脓杆菌。通过药敏试验,34种药物检测出其对磷霉素高敏、对庆大霉素等药物中敏,而对青霉素、红霉素等一些常见药物不敏感,旨在为临床药品的合理选用,消除动物性食品污染。     

山西猪链球菌的分离鉴定及药敏实验

猪链球菌是一种常见的病原菌,能引起动物和人类发生猪链球菌病,本实验通过在山西灵石某猪场发病猪群中取样,分离病原菌,并且对病原菌进行培养、镜检、生化鉴定以及PCR的技术扩增其gdh和16srRNA的序列,然后进行药敏实验。鉴定出分离菌能够在鲜血平板上形成溶血环、革兰氏染色阳性、43种生化试验结果以及扩增出特异性条带,表明分离到的病原菌为猪链球菌。药敏实验结果可见其对强力霉素等药物敏感,而对头孢曲松和磷霉素完全耐药。为山西地区猪链球菌的防治提供参考。     

山西省麻花鸡致病性大肠杆菌的分离与鉴定

为了弄清山西省麻花鸡大肠杆菌病的血清型，为有效防治奠定基础，我们进行了致病性大肠杆菌的分离和鉴定。