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为建立一种可准确、快速鉴定畜禽临床病例中3种常见革兰氏阴性杆菌的多重PCR检测方法,本试验针对大肠埃希菌23S rRNA基因、巴氏杆菌KMT基因和沙门氏菌invA基因分别设计合成了1对特异性引物,构建可同时快速鉴别大肠埃希菌、巴氏杆菌和沙门氏菌的多重PCR反应体系,并进行反应条件优化及方法性能评估。结果显示,所建立的方法最佳引物浓度分别为1.0、1.5和1.0 μmol/L,最佳退火温度为56 ℃。性能评价结果显示,所建立的多重PCR检测方法具有较好的特异性和敏感性,其中对沙门氏菌检测敏感性最高,为1.44 pg/μL。对70株革兰氏阴性临床分离细菌进行检测,结果表明,所建立的多重PCR检测方法能实现3种临床分离细菌的快速准确鉴定。本方法的建立为相关临床病例快速诊断及流行病学调查提供了有效的技术支持。 相似文献
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为了探讨感染绵羊肺炎支原体(Mo)对贵州不同品种羊Toll样受体(TLRs)结构域衔接蛋白(TRIF)信号通路因子TRIF、TRAF6、IRF3、IRF7基因转录水平及干扰素(IFN)含量的影响,试验选择贵州地区的5个主要品种羊,每个品种随机分为对照组(2只)和感染组(3只),感染组试验羊人工感染Mo,用PCR方法检测不同品种羊感染Mo的情况,采用TaqMan RT-qPCR方法检测不同品种羊血液样本中TLRs TRIF信号通路因子基因转录水平,并用ELISA方法检测不同品种羊血液样本中的IFN含量。结果表明:从各品种羊鼻拭子中均检测出与预期大小相符的特异性条带。与对照组相比,相同品种羊在感染Mo后血液样本中TLRs TRIF信号通路因子基因转录水平均出现不同程度的上升,其中以TRIF、IRF7基因转录水平上调较明显(P<0.05或P<0.01);感染后96小时时贵州白山羊和贵州黑山羊TRIF基因转录水平极显著高于其余3个品种羊(P<0.01);感染后96小时时贵州黑山羊和波尔山羊TRAF6基因转录水平显著高于其余3个品种羊(P<0.05);感染后48,96小时... 相似文献
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感染细胞与痘疹样本中山羊痘病毒PCR检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
比较Trizol法和SDS-蛋白酶K法提取山羊痘病毒DNA后,根据山羊痘病毒P32基因设计引物,建立了能检测感染细胞培养物与组织病料的PCR方法,结果显示以SDS-蛋白酶K法提取的病毒DNA在含量与纯度上均明显高于Trizol法;该PCR方法对山羊痘标准毒株细胞感染物能扩增出特异性的DNA条带,最小检出量为40.625ng;且能检出山羊痘疫苗毒Y株、贵州现场分离毒LD株和QL株的细胞感染物以及山羊痘疹样本中病毒DNA,而对鸡痘疫苗毒株感染细胞、正常细胞及正常山羊皮肤均为阴性反应。这些结果表明,建立的PCR方法具有特异性强、可靠性好、灵敏度高等特点,可用于山羊痘的临床诊断。 相似文献
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