氟苯尼考对杂色鲍的急性毒性及组织毒理学

研究了氟苯尼考(florfen icol)对杂色鲍Haliotis diversicolorReeve稚鲍96 h的急性毒性,其LC50为(162.67±17.41)mg/L(95%置信限)。稚鲍中毒后的临床症状为:分泌大量黏液,附着力明显减弱,内脏团膨大,对外界刺激反应迟钝,呈麻痹状。组织切片观察结果表明:鲍消化腺和肾脏损伤严重,其它器官未见明显病变;随着浸浴时间和药物浓度的增加,消化腺中消化细胞空泡化,并与嗜碱性细胞逐渐从基膜脱落解体,管间结缔组织胶原纤维断裂,呈弥散状广泛坏死;肾腔上皮细胞萎缩,与基膜分离,腔体变小,微绒毛脱落,中毒严重时,肾上皮细胞融合,核解体消失。     

哈维弧菌rbsB基因的克隆与表达

哈维弧菌(Vibrio harveyi)是海水鱼养殖中一种重要的病原菌。该研究根据已知rbs B(核糖体结合蛋白)基因序列设计引物,扩增得到哈维弧菌354(V.harveyi 354)rbs B基因的全序列(Gen Bank序列号MF797015),预测该序列可编码292个氨基酸,分子量为30.7 k D,理论等电点为5.05,亲水性系数为0.043,为疏水性蛋白。根据Rbs B氨基酸构建的系统进化树可以发现哈维弧菌Rbs B蛋白和欧文弧菌(V.owensii CAIM 1854)的关系最近。构建了p GEX-4t-1-rbs B重组质粒并转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,得到的重组蛋白的相对分子量约59 k D,在37℃、IPTG浓度为0.6 mmol·L–1诱导8 h时表达量最高。     

中草药添加剂对杂色鲍生长影响的研究

杂色鲍（Hatiotis diversicolor Reeve）又名九孔鲍,其肉味鲜美,营养丰富,是我国著名的海产八珍之一。鲍壳又名石决明,具有药用价值,可镇肝清热,滋阴壮阳。鲍肉有降低血压功效,鲍肉中所含的鲍灵素I和鲍灵素II有较强的抑制癌细胞生长的作用。     

病毒感染后杂色鲍部分血清免疫因子的变化

对杂色鲍(HaliotisdiversicolorReeve)进行病毒悬液和PBS(对照)注射感染,研究其血清免疫因子SOD、ACP、AKP、MPO活性的变化,并对实验结果进行统计学分析。结果表明,(1)注射病毒悬液组SOD活性变化为逐渐上升,至8h后达到最高点,然后逐渐下降;对照组SOD活力呈下降趋势,8h后上升,12h后恢复至初始水平,二者结果差异均为显著或极显著(P<0 05或P<0 01)。(2)注射病毒悬液组ACP与AKP活性的变化为:36h前变化不大,48h后明显上升;对照组ACP和AKP活性变化不大,二者结果除了第48小时外,差异均不显著(P>0 05)。(3)注射病毒悬液组MPO活性在第1小时内上升,然后逐渐下降,第8小时下降到最低点,随后逐渐上升;对照组在第1小时内下降,然后逐渐上升,第12小时升至最高点,然后逐渐下降,48h后与正常鲍活性基本一致。t检验显示,这两组结果在第1、4、8、24、36、48h差异显著或极显著(P<0 05或P<0 01),在第2、12小时差异不显著。结果显示,在人工感染病毒48h内,杂色鲍体内的免疫因子发生了明显的变化,血清中SOD活性降低,ACP及AKP活性显著升高,MPO活性显著升高。     

鲍消化道及其养殖水体异养菌的耐药性研究

采用纸片扩散法对分离自福建省皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)消化道及其养殖水体中的284株异养细菌(其中消化道菌131株,水体菌153株)进行药物敏感测试,以期了解其耐药性概况。结果显示,皱纹盘鲍消化道与养殖水体异养菌对多种抗菌药物的耐药率差异不明显,大部分菌株对青霉素、卡那霉素、庆大霉素、利福平产生耐药性,耐药率最高达83.95%,而对诺氟沙星、恩诺沙星、氯霉素耐药率较低,受试的水体异养菌对诺氟沙星耐药率为0;不同来源菌株的多重耐药(multiple antibiotic resistance,MAR)现象普遍,消化道及其养殖水体异养菌的多重耐药率均值分别为59.15%和51.31%。该研究同时发现相同分离源的菌株对青霉素、卡那霉素、庆大霉素和利福平的耐药率呈现一定的季节波动规律,消化道异养菌于9月耐药率最低,而水体异养菌耐药率在6月最低。结果表明,皱纹盘鲍消化道及水体异养菌的多重耐药率较高,耐药状况较严重。     

杂色鲍幼苗大规模死亡与细菌数量的关系

对杂色鲍育苗过程中养殖池、附着板上的细菌数量进行了监测,当鲍苗出现大规模死亡前后,池水及附着板上细菌数量比养殖初期高2个数量级,利用臭氧处理养殖水后,附着板上的细菌数量没有发生根本变化,鲍苗同样出现死亡,鲍苗剥离后1周左右也出现大规模死亡。在鲍苗大规模死亡前后分离的细菌经过鉴定为塔式弧菌及Vibrio sp.     

杂色鲍血蓝蛋白的分离纯化及其酚氧化酶活性研究

利用超速离心和CsCl梯度离心的方法,从杂色鲍(Haliotis diversicolor Reeve)血淋巴中分离纯化血蓝蛋白(Hcs),SDS-PAGE检测提取的血蓝蛋白由1种亚基构成,分子量为400kD;Native-PAGE电泳检测2个亚基(Isoform)分别为HdH1、HdH2;透射电镜下其四级结构为圆柱体,以多十聚体、二十聚体和少量的十聚体形式存在于血淋巴中。杂色鲍血蓝蛋白在以邻苯二酚为底物的条件下表现出微弱的酚氧化酶活性(Km=25.66mmol/L),胰蛋白酶和SDS能使其酚氧化酶活性增强;以左旋多巴(L-DOPA)为底物则不表现出酚氧化酶活性。     

杂色鲍育苗中"掉板症"的药物防治研究

在循环水育苗系统中,针对近年来南方杂色鲍育苗中的"掉板症",使用新兽药氟苯尼考(Florfenicol)和自配药物"鲍健",40 d育苗期内分别获得71.2%和67.7%的成活率,体长为(1.39±0.27) mm和(1.97±0.21) mm,而未使用药物的对照组幼体附着后10～12 d内全部死亡,初步试验显示使用抗菌素可有效控制"掉板症".同时分离出1株毒力强、疑为致病菌的溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus).     

复方中草药对杂色鲍幼鲍血淋巴中几种酶活力的影响

将12种中草药按其不同的药理作用和药效进行配伍,形成5组复方中草药,分别编号为中草药1～5号。将以上中草药添加到杂色鲍幼鲍的人工配合饲料中,连续喂饲幼鲍,饲养47d后,测定幼鲍无细胞血淋巴中超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶茵酶(LSZ)活力。结果显示,所有添加中草药的sOD活力均比对照组降低,中草药1、5号可提高幼鲍血淋巴的ACP和LSZ活力,而对AKP则起到降低的作用;中草药3、4号可提高幼鲍血淋巴的LSZ活力,却降低幼鲍血淋巴的ACP和AKP活力,中草药2号对ACP、AKP和LSZ活力均有提高作用,具有较突出的促进杂色鲍幼鲍免疫酶活力的功能。     

陵水才女虫与威氏才女虫的比较和地理分布研究

采用形态学与分子生物学方法相结合,对陵水才女虫(Polydora lingshuiensis)和威氏才女虫(P.websteri)进行了比较与鉴定研究,并调查了它们的地理分布。在形态上,陵水才女虫的脑后脊上具中触角、粗足刺刚毛近末端具凹陷;而威氏才女虫无中触角、粗足刺刚毛具侧凸缘。遗传距离分析结果显示,基于核糖体18S基因、线粒体COⅠ基因、线粒体Cyt b基因的陵水才女虫和威氏才女虫的种间遗传距离明显大于其种内遗传距离。基于COⅠ、Cyt b的才女虫的种间种内遗传距离比率远大于基于18S的遗传距离比率。才女虫的COⅠ与Cyt b基因的条形码间隔比18S的更宽,分辨率更高,更适用于形态相似种的辅助鉴定。在中国海域,陵水才女虫和威氏才女虫均属于宿主特异性低、地理分布性广的才女虫种类,其传播途径可能与其宿主的养殖方式以及商业运输密切相关。