调控民猪ZBED6基因转录元件的筛选与分析

ZBED6是锌指蛋白家族的一员,在胎盘哺乳动物中极其保守,可通过对IGF2的调控参与骨骼肌生长。为进一步探究ZBED6基因自身的表达调控机制,本研究以民猪基因组DNA为模板,通过常规PCR扩增ZBED6基因启动子区系列截短片段,构建克隆质粒,通过双酶切和连接反应定向连入pGL3-basic载体,利用PK15细胞和双荧光素酶检测系统测定重组质粒的相对荧光素酶活性;利用在线软件预测启动子区的转录因子结合位点,使用重叠PCR定点缺失转录因子结合位点,构建突变载体并在PK15细胞中检测突变载体的相对荧光素酶活性。结果表明:ZBED6基因启动子区-2053^-1777 bp存在多个转录因子结合位点,尤其是-1808^-1777 bp,该片段缺失造成启动子活性下降(P<0.01);利用在线软件在该区间预测到3个转录因子HINFP、Adf-1和CREB3,经实验验证后发现这3个转录因子均可调控ZBED6基因的转录,其中Adf-1效果最为明显。据此推测,民猪ZBED6基因的转录调控机制较为复杂,其启动子区存在HINFP、Adf-1和CREB3等多个调控元件的结合位点。     

低温对猪肌肉和肝脏组织线粒体数量的影响

为了研究低温环境对线粒体能量代谢的影响,以及民猪和大白猪对低温环境耐受能力的差异,试验选择6头民猪和6头大白猪进行试验,常温对照组置于(18±2)℃的供热舍内饲养,冷处理组置于(8±2)℃的无供热舍内饲养,试验期为15 d;试验结束时屠宰试验猪只,取背最长肌、股四头肌和肝脏组织,采用实时定量PCR法对线粒体数量进行测定。结果表明:无论民猪还是大白猪,在颤栗性产热中,背最长肌占优势,而肝脏内线粒体数量无显著变化。推测在8℃左右的低温环境下,民猪和大白猪无论是颤栗性产热还是非颤栗性产热均无明显差异,两者之间的差异可能发生在更低的环境温度下。     

犬、猫泌尿生殖器官疾病的X线诊断

1检查方法目前,X线检查主要用于犬、猫等小动物。检查方法是普通腹部平片检查和造影检查。腹部平片在腹背位和侧位拍摄,应包括盆腔在内,这种检查可以诊断泌尿道的结石、肾的钙化、妊娠,死胎及某些肿瘤与子宫蓄脓等。造影检查有静脉肾盂造影和膀胱造影。静脉肾盂造影能使肾盲囊、肾盂、输尿管显现,最     

鳡鱼苗种池塘培育技术研究

在面积分别为1000m2和870m2的两口鱼苗池中,采取彻底清塘消毒,鱼苗清水下塘,主要投喂豆浆和粉状饲料以及适口饵料鱼的综合技术模式培育鳡鱼苗种.经两个阶段的培育,4～5cm和6～7cm夏花鱼种的成活率分别为82.5%和61.3%;9～16cm和7～13cm大鱼种的成活率分别为37.5%和27.8%.     

民猪和大白猪不同肌球蛋白重链表达差异

为揭示民猪与大白猪肌纤维类型组成差异,试验应用Real-time PCR法检测了民猪和大白猪背最长肌中肌球蛋白重链(MyHC)Ⅰ、Ⅱa、Ⅱx、Ⅱb 4种亚型mRNA表达差异。结果表明:同日龄民猪和大白猪、同体重民猪和大白猪相比,民猪Ⅰ、Ⅱa、Ⅱx型MyHC mRNA相对表达量显著高于大白猪(P0.05),而Ⅱb型MyHC mRNA相对表达量显著低于大白猪(P0.05)。说明民猪肌肉中氧化型和中间型肌纤维含量高于大白猪,而酵解型肌纤维含量低于大白猪。     

民猪脂肪细胞分化过程中抗寒相关基因表达规律研究

旨在探究民猪脂肪细胞分化过程中产热基因和米色脂肪标记基因的表达变化规律，为进一步研究民猪脂肪细胞向米色脂肪细胞分化的分子机制提供依据。本研究采集1月龄民猪的背部脂肪组织，分离前体脂肪细胞进行培养及成脂诱导，观察分化过程中细胞形态并进行油红O染色鉴定；检测产热基因UCP3、PGC-1α、PPARα和米色脂肪标记基因EBF2、CD81、PDGFRα在诱导分化第0、2、4、6、8天的表达量。结果表明，随着诱导分化的时间增加，细胞中的脂滴逐渐增多，在分化第8天时进行油红O染色，多数细胞达到成熟脂肪细胞阶段。以第0天为对照，PGC-1α、EBF2、PDGFRα在第2天时表达量极显著升高（P<0.01），且达到最高，第4、6、8天呈下降趋势。UCP3在第4、6、8天表达量极显著升高（P<0.01），第8天有所下降。PPARα和CD81在第2天时表达量极显著升高（P<0.01），且在第4和6天表达量与第2天相比变化不大。综上表明，本研究成功进行了民猪前体脂肪细胞的成脂诱导分化，揭示了分化过程中产热和米色脂肪标记基因的表达规律，为进一步研究民猪前体脂肪细胞向米色脂肪细胞分化的分子机制和民猪抗寒能力奠定基础。     

民猪细胞色素C氧化酶Ⅰ基因的克隆、多态性检测及冷诱导研究

采用克隆测序和PCR- SSCP方法对民猪COX Ⅰ基因序列及多态性进行了检测与分析,采用实时荧光定量PCR法对同一饲养水平下经冷诱导处理的民猪和长白猪肌肉、肝脏组织中COX Ⅰ基因的表达变化进行分析.结果表明:民猪的COX Ⅰ基因序列与其他猪种相比,存在18个核苷酸突变,导致5个氨基酸发生变化;C260T、G275A和C1253T位点民猪以B等位基因占优势,大白猪、长白猪、北京黑猪、野猪则是A等位基因占优势;冷诱导后低温组民猪COX Ⅰ基因的表达量与常温组民猪和低温组长白猪相比,均显著下降(P＜0.05).据此推测冷诱导可导致COX Ⅰ基因表达量降低从而产生更多的ATP为机体提供能量抵御寒冷,COX Ⅰ基因可能是一个与猪的抗寒性显著相关的候选基因.     

MC4R与Leptin、MC3R和CCKAR基因的互作研究

为了研究4个与采食量相关功能基因可能存在的互作关系,采用基因重组的方法构建了黑素皮质激素受体-4(MC4R)基因的真核表达载体,采用脂质体法将该表达载体转染入成纤维细胞,瞬时转染24 h后,采用Real-timePCR的方法检测和分析了Leptin、黑素皮质激素受体-3(MC3R)和猪缩胆囊素受体(CCKAR)基因mRNA的表达变化情况。结果表明,在成纤维细胞中,过表达MC4R基因后,Leptin、MC3R和CCKAR基因的mRNA水平均无显著变化。据此推测,MC4R基因与其他3个基因虽都参与调节动物的采食量,但很可能是通过不同的调控路径来发挥功能的。     

水分胁迫对新单29玉米种子萌发和生长的影响

为了研究玉米品种新单29种子萌发期的抗旱性,采用发芽试验,研究了水分胁迫对新单29种子萌发和生长的影响。结果表明,除5%PEG胁迫外,其余水分胁迫处理下,新单29侧根条数均显著低于正常水分处理,根冠比则显著高于正常水分处理。各水分胁迫条件下,新单29的发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数、根长、株高、根系和地上部质量均显著低于正常水平,相对伤害率则显著高于正常水平。说明水分胁迫对新单29种子的萌发和生长具有显著影响。     

斑点叉尾鮰亲鱼池塘培育关键技术的研究

斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)繁育亲鱼筛选可量参数:体长为头长的3.88~4.17倍、体长为体高的4.59~5.26倍、体长为尾柄长的5.73~6.73倍、体长为尾柄高的11.05~11.95倍、尾柄长为尾柄高的1.78~1.94倍。亲鱼培育产卵池塘适宜面积为0.20~0.53hm2,单位面积池塘内亲鱼承载量为2400~2550kg/hm2,3~6龄亲鱼放养密度为375~450组/hm2。投喂亲鱼饵料以含蛋白质36%人工配合饵料与动物性饲料相结合。亲鱼培育池塘水体昼夜变化的溶氧量为4.0mg/L以上、pH值为6.8~7.6、氨氮小于0.3mg/L、亚硝酸盐为0.01mg/L以下,亲鱼产卵率为80%以上。