优球蛋白法纯化欧鳗免疫球蛋白

采用优球蛋白法与饱和硫酸铵分步盐析法纯化欧洲鳗鲡血清免疫球蛋白(Ig),利用SDSPAGE分析其纯度.试验结果显示:优球蛋白法纯化的欧鳗血清免疫球蛋白出现清晰2条带,纯度高于饱和硫酸铵分步纯化法;ELISA分析优球蛋白法纯化的欧鳗血清效价高于饱和硫酸铵纯化结果;Western-blot结果亦显示纯化的优球蛋白具有抗体免疫学活性.     

番鸭细小病毒和鹅细小病毒二联弱毒细胞苗的研究

应用适应于番鸭胚成纤维细胞(MDEFC)上繁殖,并产生细胞病变的鹅细小病毒(GPV)弱毒疫苗株与番鸭细小病毒(MPV)弱毒疫苗,按适当比例混合,试制了MPV-GPV二联弱毒细胞苗,并测定了各项免疫指标.结果显示试制出的二联苗对1日龄雏番鸭具有良好的安全性和遗传稳定性;免疫后5 d和7 d攻击GPV强毒,保护率分别为75%和100%,同时免疫后7 d血清中MPV-胶乳凝集抑制(LPAI)抗体效价均大于21,21～28 d抗体达高峰,有效免疫期超过60 d.疫苗于-20℃保存期大于12个月.上述结果表明,二联弱毒细胞苗安全有效.     

嗜水气单胞菌 β-hemA 重组菌的优化培养及其生长曲线的测定

用正交试验探讨温度、培养基、时间三个因素对嗜水气单胞菌β-hemA重组菌E.coliDH5α(PCB)基因产物表达量的影响,通过优化培养,选择最佳培养条件,显著提高了β的溶血素基因(β-hemolysisgene,β-hemA)产物的产量。实验结果表明:该重组菌株在100mlTSB(添加0.05%酵母浸提物,1.8μg/mlZnCl2),37℃培养30h收获,其毒素蛋白含量为3258μg,毒素溶血价为17.44hu/μg,而在LB(100ml)和营养肉汤(100ml)中最高蛋白量和溶血活性分别为1260μg,14hu/μg和1199μg,8.22hu/μg。所选择的三个因子中对毒素蛋白质含量影响最大的是培养基,其次是温度;而对溶血素影响最大的则是温度,其次为时间。最佳生长曲线测定结果表明,在培养基预热至37℃的情况下,PCB6h能进入对数期。     

欧洲鳗鳗苗丙线磷中毒的诊治报告

环境中的有机磷（１０％丙线磷）进入鳗苗体内后能与胆碱酯酶结合，使该酶的活性下降，出现一系列胆碱反应系统临床表现。碘解磷定可使钝化的胆碱酯酶复活；硫酸阿托品可解除毒蕈碱样症状，掌握好这两种复活剂的用量，可以控制病情     

番鸭呼肠孤病毒MW9710株S1基因片段的克隆及序列分析

参考GenBank番鸭呼肠孤病毒(muscovy duck reovirus,MDRV)S1基因序列设计合成一对引物,对番鸭呼肠孤病毒MW9710株S1基因进行RT-PCR扩增,并对PCR产物进行了克隆和测序.结果显示扩增产物为300bp,与预期的目的片段大小一致,经PCR、酶切反应鉴定后克隆到pGEM-Teasy载体中,核苷酸序列经BLAST软件分析表明:番鸭呼肠孤病毒MW9170株S1基因的目的片段与番鸭呼肠孤病毒法国89026株同源性为91.7%,与鸡关节炎病毒S2基因同源性为68.7%,结果提示番鸭呼肠孤病毒MW9710株与鸡关节炎病毒亲缘距离较远.     

欧洲鳗黏膜免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析

应用杂交瘤单克隆抗体技术制备了8个分泌抗欧洲鳗（Anguilla anguilla）黏膜免疫球蛋白的单克隆抗体细胞株,并对这些单克隆抗体的特性进行了分析。结果显示,8株单抗中IgM有2株,IgG,和IgG2。各有3株;所有单抗均与欧洲鳗黏膜免疫球蛋白呈ELISA反应阳性,腹水抗体滴度为在10^4～10^6之间。进一步实验证实,这些单抗与供试的10种水产动物常见病原菌均无交叉反应;其中3株单抗与欧洲鳗血清IgM有不同程度的交叉反应;4株单抗与黏膜免疫球蛋白有交叉反应,其中2株单抗交叉反应较弱。以上结果提示,欧洲鳗黏膜免疫球蛋白和血清IgM之间既有各自独特的抗原决定簇,又有共同抗原位点,证实欧洲鳗黏膜抗体在抗原性方面有别于血清IgM。成功制备的这8株单抗可用于鳗黏膜免疫球蛋白的检测及其结构和功能分析,为欧洲鳗黏膜免疫的进一步研究提供工具。[中国水产科学,2008,15（3）：511-515]     

鱼类DNA疫苗的研究进展

ＤＮＡ疫苗也称核酸疫苗、基因疫苗 ,是将含有编码保护性抗原蛋白的基因序列和表达所必需调控元件的质粒ＤＮＡ直接导入动物组织 ,使抗原蛋白经过内源性表达并递呈给免疫系统 ,诱发机体产生特异性体液免疫和细胞免疫应答 ,形成对相应病原的免疫保护作用 ,用于免疫的质粒ＤＮＡ称为ＤＮＡ疫苗。它不同于传统的弱毒疫苗、灭活疫苗及亚单位苗 ,是带有特异性抗原基因的真核表达质粒 ,是继病原体疫苗、亚单位疫苗之后的第 3代疫苗[1] 。ＤＮＡ疫苗在人体和哺乳动物研究中已取得一定进展 ,部分疫苗已进入临床试验阶段[2 ] 。而鱼类ＤＮＡ疫苗的研…     

欧洲鳗皮肤黏膜免疫球蛋白纯化及其结构组成分析

应用亲和层析技术提纯欧洲鳗(Anguilla anguilla)黏膜免疫球蛋白(Ig),并在结构和抗原性上进行分析.柱层析结果表明,欧洲鳗黏膜Ig经亲和层析分离后出现1个锐形的蛋白峰,蛋白主要分布于收集物的第2-6管,蛋白峰和抗原活性峰重叠.凝胶电泳结果显示,在变性还原条件下,欧洲鳗黏膜Ig重、轻链分子量分别为68 kD和26 kD,还有1条分子量约为18 kD的蛋白带;在非变性非还原条件下,黏膜Ig只有1条蛋白带,分子量约为350 kD,略旱扩散拖带现象,这一结果提示自然条件下欧洲鳗黏膜Ig可能以二聚体形式存在;在变性非还原条件下,黏膜Ig有3条蛋白带,分子量约为350 kD、138 kD和135 kD,表明欧洲鳗黏膜Ig在SDS作用下可发生不同程度的解聚.Western-blotting试验证实,兔抗血清能识别欧洲鳗黏膜Ig的二聚体、解聚体、重链和81 kD、84 kD处的蛋白带,显示出黏膜Ig的抗原特异性.欧洲鳗黏膜Ig与血清Ig在结构和抗原性上的差异.为进一步探讨欧洲鳗是否存在相对独立的黏膜免疫系统奠定了基础.     

鱼源气单胞菌的分离鉴定及血清学调查

应用生化鉴定和PCR技术对1999～2001年主要分离自福建省患典型败血症鳗鲡的气单胞菌进行精细的鉴定，结果共得到气单胞菌115株，其中嗜水气单胞菌69株，温和气单胞菌29株，豚鼠气单胞菌2株和未定种气单胞菌15株。45株可被典型分型于5个主要血清型；福建鳖源嗜水气单胞菌优势血清型为O：Ah10501，鳗源气单胞菌分离株主要分布于0：Ahl0501、O：YT-1、0：CHS-3和O：CQ-1等4个血清型。非福建分离株则集中分布在O：Ah9617(0：9)。LPSs免疫印迹法既能用于不同血清型菌株脂多糖的结构分析，又能对常规血清学分型结果进行校正，其结果更直观、准确。     

鱼肥添加剂对浮游植物生长的影响

研究不同浓度的添加剂A与B对养殖池浮游植物生长的影响,结果表明:使用添加剂A对养殖池浮游植物生长有显著性差异,而添加剂B无显著性差异,且A与B交互作用不显著。经初筛选,发现B浓度为 0．032 g·m-3,A为0．24 g·m-3,组合效果较好;经进一步对A筛选,A为0．28 g·m-3时最佳。镜检显示各组优势藻类为硅藻门、金藻门。