PCR技术在动物疫病诊断中的应用

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）,又称体外扩增技术,最早于1985年由Kary Mullis研制,是一种根据生物体内DNA复制的特点而设计的在体外对特定DNA序列进行快速扩增的新技术,具有特异性和敏感性高、操作简便、快速高效等特点。它能特异地在体外扩增微量基因或DNA片段,将皮克（pg）水平的DNA特异地扩增10^6～10^7倍,达到检测诊断的目的;在对特异性基因进行扩增时可使核苷酸的错配率低于万分之一;其操作过程在2～4h即可完成,有效缩短了诊断的时间。PCR技术目前已广泛应用于从基因扩增、基因检测到基因克隆、基因改造、     

烟粉虱细胞色素P450基因CYP6JM1的克隆及其在噻虫嗪抗性中的作用

烟粉虱Bemisia tabaci是全球性农业害虫之一, 目前采用的防治手段多为化学防治。噻虫嗪作为一种新烟碱类杀虫剂, 现被广泛应用于田间烟粉虱的防治, 但烟粉虱已对其产生了抗性。本文通过RT-qPCR对烟粉虱噻虫嗪抗性与敏感种群的细胞色素P450基因CYP6JM1表达水平进行了比较, 结果显示, 烟粉虱噻虫嗪抗性种群CYP6JM1基因表达水平明显升高。基因克隆和序列分析表明, CYP6JM1基因具备昆虫P450基因的典型特征。RT-qPCR检测结果表明, 该基因在烟粉虱1~2龄时期及腹部高水平表达。RNAi结果表明, 降低烟粉虱体内CYP6JM1基因的表达量能够显著提高其对噻虫嗪的敏感性, 表明CYP6JM1基因可能与烟粉虱对噻虫嗪的抗性有关。     

沈阳市休闲农业发展中存在的问题及对策

作为农村新兴产业,沈阳市休闲农业起步较晚,但发展较为迅速.从沈阳市休闲农业的发展现状人手,详细分析该市休闲农业存在的主要问题,并在此基础上提出了促进沈阳市休闲农业发展的可行性建议.     

多级离心泵内部级间影响及压力脉动特征

为了研究多级离心泵内级间相互影响及流道内的瞬时流动特征,对一两级泵内部流动进行了三维定常与非定常数值计算,获得并分析了不同流量工况条件下流道内各个监测点的压力脉动特征.研究表明:首级导叶的存在是导致次级叶轮入口截面上不均匀流动状态的关键因素;在每级叶轮的出口与导叶进口联结处均存在剧烈的动静耦合作用;尽管整体流道的几何形状复杂,叶片通过频率仍支配着该两级泵内全流道的特征压力脉动,而导叶叶片数对压力脉动特征的影响较弱;叶轮内与叶频对应的压力脉动幅值自叶轮进口到叶轮出口逐渐增大,且在叶轮出口处达到极大值,导叶中的相应变化规律则与之相反;偏离最优流量工况,叶频仍占据统治地位,但整个流道内的压力脉动幅值增大,该趋势在小流量工况下尤为明显.     

大熊猫源大肠杆菌的分离鉴定和耐药性检测

本试验在对从四川卧龙大熊猫研究中心和雅安碧峰峡野生动物园的圈养大熊猫肠道大肠杆菌分离鉴定的基础上,对其耐药性进行了检测与分析,为本地区采用高效低残留的抗生素治疗大熊猫大肠杆菌病提供依据.     

大肠杆菌β-内酰胺酶耐药基因blaTEM,blaSHV,blaCTX-M三重PCR检测方法建立

本研究以我国大肠杆菌中常见的3种β-内酰胺酶耐药基因(bla,TEM blasHV和blaCTX-M)作为目的基因,设计3对特异性引物,建立了blaTEM,bla SHV和blaCTX-M耐药基因三重PCR检测方法.三重PCR反应体系为:10×PCR缓冲液2.5 μL,MgCl2(25 mmol/L) 2.5 μL,dNTP (2.5 mmol/L)4 μL,blaTEM,blasHV和blaCTX-M上下游引物(25 μmol/L)分别为0.25 μL、0.5 μL、1.0μL,Taq DNA聚合酶(2.5 U/μL)0.4μL,模板2.5μL,反应总体积为25 μL.反应参数为:94℃5 min,94℃50 s,55℃55 s,72℃1 min,32个循环,72℃延伸5 min.本方法的建立为大肠杆菌中β-内酰胺酶耐药基因的快速检测及分子流行病学调查提供了新的手段.     

中西医结合治疗山羊痘病

山羊痘病是由山羊痘病毒所引起的一种急性、热性、接触性传染病 ,临床上以皮肤和粘膜上发生特异性的痘疹为特征。1　诊断要点1 1　流行特点( 1 )仅发生于山羊 ,不传染给绵羊或其他家畜。( 2 )羔羊较成年羊易感 ,易引起孕羊流产或新生羔羊死亡。( 3)该病一年四季均可发生 ,但主要流行于冬末春初 ,尤以产羔集中季节为高峰。( 4 )病羊是主要传染源 ,病毒主要存在于病羊的皮肤和粘膜的痘疤中 ,主要经呼吸道感染 ,也可以经消化道或损伤的皮肤感染。该病传播迅速 ,呈地方性流行。1 2　临床特征潜伏期一般为 4～ 1 2d。病初体温升高达 4 1～ 4 2…     

西南地区猪肠外大肠杆菌毒力基因检测及耐药性研究

为了解规模化猪场肠外致病性大肠杆菌(ExPEC)的毒力基因与耐药性的流行情况,本实验室于2008年～2011年间对中国西南地区61个不同规模化猪场的427份组织病料进行细菌检验。采用菌落形态、显微观察和16SrDNA PCR测序鉴定分离菌,共检出79株(18.5%)ExPEC。对小鼠致病性试验结果显示其中50个分离株具有致病性,致病菌为66.3%。此外,对其8种毒力基因PCR检测结果表明astA、escV、invE、Stx2e 4种基因检出率分别为48%、44%、10%、4%,其他4种毒力基因未检出。18种药物的药敏试验结果显示头孢噻呋(7.6%)、氨苄西林/舒巴坦(11.4%)、阿莫西林/棒酸(16.4%)相对敏感,其他药耐药率均高于24%,多重耐药严重。该研究结果对近年来猪源大肠杆菌病的防控和临床用药提供了实验依据。     

季节性放牧对补播改良荒漠草原植物群落地上生物量及物种多样性的影响

放牧是影响天然草原植物生产力、群落组成与多样性的主要生物因子之一。以补播改良荒漠草原为研究对象,通过比较禁牧、夏季放牧和夏秋放牧处理对植物地上生物量、群落组成和多样性的变化,分析补播草地区域与原生植被区域对季节性放牧的响应。结果表明,夏秋放牧处理降低草原植物群落地上生物量与物种丰富度。补播草地区域,夏秋放牧显著降低优势植物蒙古冰草(Agropyron mongolicum)、达乌里胡枝子(Lespedeza davurica)和沙打旺(Astragalus adsurgens)地上生物量;夏季放牧对蒙古冰草(A.mongolicum)地上生物量无影响。原生植被区域,夏秋放牧降低蒙古冰草(A.mongolicum)地上生物量,2种处理对牛枝子(Lespedeza potaninii)地上生物量无显著影响。补播草地区域,家畜喜食蒙古冰草(A.mongolicum)、达乌里胡枝子(L.davurica)和沙打旺(A.adsurgens)。原生植被区域,放牧前期家畜喜食牛枝子(L.potaninii),放牧后期蒙古冰草(A.mongolicum)、牛枝子(L.potaninii)均被喜食。夏季...