魁蚶(Scapharca broughtonii)血红蛋白Ⅰ基因克隆及表达特征

魁蚶(Scapharca broughtonii)的血淋巴中因含有血红蛋白而不同于其他多数双壳贝类。为明确魁蚶血红蛋白基因的结构特征、组织发生分布、免疫活性等特点,本研究以魁蚶转录组数据库中的部分序列为基础,通过cDNA末端快速扩增(Rapid amplication of cDNA ends, RACE)技术,克隆获得了一种魁蚶血红蛋白基因cDNA全长序列(命名为SbHbⅠ),并研究了不同条件下的mRNA表达。序列和结构分析显示,SbHbⅠ基因cDNA全长为867 bp,其中包括长度为483 bp的开放阅读框(Open reading frame, ORF),编码160个氨基酸,预测蛋白分子量为17.5 kDa,理论等电点为9.68;氨基酸序列具有多个血红素结合位点,序列与所选其他物种的相似度范围为57%~93%,与蚶科相似度较高。实时荧光定量PCR (qRT-PCR)结果显示,在魁蚶成体的斧足、鳃、外套膜、闭壳肌、血淋巴、肝胰腺及受精卵至发育23 d的幼虫体内,均能检测到SbHbⅠ基因;该基因在成体魁蚶血淋巴中表达量最高,与其他5个组织中的表达量差异显著(P<0.05);受精卵至23 d幼虫期的表达,基本呈现为先下降后上升的趋势,且在12 d时急剧上升(P<0.05);在鳗弧菌(Vibrio anguillarum)刺激和低氧胁迫后,血淋巴中SbHbⅠ基因的表达均呈先上升后下降的趋势,表达量最高值均出现在 16 h。本研究丰富了贝类血红蛋白相关研究资料。     

烟草骨干亲本马铃薯Y病毒病抗性鉴定及抗性来源分析

马铃薯Y病毒病(potato virus Y, PVY)是影响烟草产量和质量的主要病毒病害,选育抗病品种是解决病毒病害经济有效、环境友好的方法,而丰富抗病亲本的遗传多样性在品种选育中具有非常重要的作用。为深入认识PVY抗性种质的抗性来源,选取30份烟草(Nicotiana tabacum)骨干亲本进行人工接种鉴定其PVY抗性,筛选出11份抗PVY烟草种质。为进一步探究材料的抗性来源,基于感病基因eIF4E1开发了PVY1分子标记,并利用VAM和K326构建的F2遗传群体对该标记进行了验证。用此标记对骨干亲本进行检测,结果发现Y48等6份抗病种质中无法扩增出条带,而CV58等5份抗病种质中可以扩增出大小为348 bp的条带,进一步分析发现CV58中eIF4E1基因并未发生突变。以上结果表明Y48等对PVY的抗性来源于eIF4E1基因的缺失,而CV58等具有新的抗性位点,其对PVY的抗性并非来源于eIF4E1基因的缺失或突变。本研究获得了两种不同抗性来源的抗PVY烟草种质资源,为烟草PVY抗性品种的选育提供借鉴。     

虾夷扇贝精子的冷冻保存及其杂交试验应用研究

以精子活力和受精率为参数,就收集精子的方法、抗冻剂的种类和浓度及冷冻程序和平衡时间对虾夷扇贝精子超低温保存效果的影响进行了研究,并进行了冻存精子与栉孔扇贝卵子的杂交实验.结果表明,肾管处收集到的精液与海水配的16%DMSO 1∶3（v/v）混合,在4 ℃冰箱内平衡5～10 min,在液氮面上方20cm、3 cm处分别停留3 min、10 min后浸入液氮保存,冻精活力在40%以上.在液氮中保存1 d、8 d、30 d、90 d后解冻,冷冻精子活力没有显著差异（P＞0.05）,但明显低于新鲜精子的精子活力.虾夷扇贝的冻精可以使栉孔扇贝卵子受精,受精率在20%以上,并能得到正常的D型幼虫.