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21.
中华绒螯蟹RXR基因全长cDNA克隆及表达分析 总被引:2,自引:2,他引:2
维甲类X受体(retinoid X receptor,RXR),属于核受体超家族(nuclear receptor super family)成员,是一种重要的调控因子,对甲壳动物生长发育和繁殖具有十分重要的作用。本研究根据陆地蟹 RXR基因保守区序列设计上下游引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)以及cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)RXR基因并进行各组织间的表达分析。序列分析表明中华绒螯蟹RXR cDNA全长1517bp,编码433个氨基酸。经BLASTn和BLASTx分析表明,中华绒螯蟹RXR氨基酸序列与陆地蟹RXR基因的氨基酸序列相似性最高,为96%。系统进化树分析显示,中华绒螯蟹RXR的氨基酸序列与陆地蟹RXR聚为一支。荧光定量PCR结果显示,RXR在所有检测的组织中均有表达,且在中华绒螯蟹Y器官中表达量最高,肝胰腺、鳃和肌肉中有少量表达,心脏、胃、肠、胸神经节和脑神经节中微量表达。在中华绒螯蟹不同蜕皮时期中,Y器官中RXR表达量在D期最高,与AB期、C期呈显著性差异(P<0.05);肌肉中RXR在AB期表达量最高,与其他蜕皮时期呈显著性差异(P<0.05);肝胰腺和鳃中RXR在AB期表达量最高,E期表达量最低,但各蜕皮时期表达量之间差异不显著。 相似文献
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根据已登录的中华绒螯蟹一种Δ6去饱和酶基因(Accession Number:JX946434)及菁夜蛾去饱和酶基因(Accession Number:KJ622055.1)的保守区设计引物,通过逆转录PCR以及RACE技术克隆了中华绒螯蟹另一种Δ6去饱和酶基因FAD6-b的全长序列。经序列分析,中华绒螯蟹FAD6-b cDNA全长为2 310 bp,其中开放阅读框(ORF)为1 326 bp,共编码442个氨基酸(Accession Number:KP876058),理论分子量为50.86 ku,理论等电点为8.47,FAD6-b基因的氨基酸序列与已公布的一条中华绒螯蟹Δ6去饱和酶基因的一致性为76%。原核表达载体构建及其表达实验表明,中华绒螯蟹FAD6-b基因成功重组到原核表达载体pCold-TF DNA中,重组质粒pCold TF-fad6b在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行表达,经SDS-PAGE电泳分析表明,IPTG诱导后的重组菌出现了单一的蛋白条带,且大小与预期(105.86 ku)一致,可溶性分析显示目的蛋白主要存在于蛋白上清液中。对重组蛋白进行纯化,蛋白纯化液经电泳检测后显示出特异性单一条带,进一步证明了pCold TF-fad6b的成功构建和表达。目的蛋白经Western-blotting检测,结果表明获得的重组蛋白与6×His抗体进行了特异性结合,显示出良好的免疫学活性。 相似文献
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2006年4月8日上午8时,定西市公安局接到安定区公安局刑警大队电话报案称:内官镇一个体商户的价值两千多元的农用化肥被盗,请求使用警犬协助侦破。 相似文献
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1日龄五龙鹅192只,随机分为4个处理,分别饲喂共轭亚油酸(CLA)水平为0.0、5.0、15.0和25.0g/kg的日粮,通过测定不同生长阶段的体增重(BWG)、采食量(FI)、料重比(F/G)、腹脂率(AFP),以及与脂质代谢有关血清生化指标,研究不同水平CLA日粮对五龙鹅生长发育和脂质代谢的影响。结果表明:在日粮中分别添加5.0g/kg和15.0g/kgCLA,对五龙鹅BWG无显著影响(P〉0.05),能够显著降低FI和F/G(P〈0.05);显著降低AFP和血清甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、极低密度脂蛋白(VLDL)含量(P〈0.05或P〈0.01),增加了血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量和高、低密度脂蛋白胆固醇之比(HDL-C/LDL-C)(P〈0.05)。日粮中添加25.0g/kgCLA,极显著地降低了FI和AFP(P〈0.01),对血清TG、TC、HDL-C、VLDL含量和HDL-C/LDL-C的影响差异不显著(P〉0.05)。适宜添加CLA对五龙鹅的生长发育和脂质代谢具有很好的促进和调节作用,即在五龙鹅的整个生长期内,CLA添加量不高于15.0g/kg时,不但能在不影响BWG的前提下提高饲料利用率,而且能够通过降低脂肪沉积和调节脂质代谢起到预防动脉粥样硬化的作用;但过多添加CLA(25.0g/kg)会使五龙鹅的生长发育受到抑制。 相似文献
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